The laparoscopic approach for renal cell carcinoma is slowly evolving. We report our experience with laparoscopic radical nephrectomy and compare it to a contemporary cohort of patients with renal cell carcinoma who underwent open radical nephrectomy.From 1990 to 1999, 32 males and 28 females underwent 61 laparoscopic radical nephrectomies for suspicious renal cell carcinoma. Clinical data from a computerized database were reviewed and compared to a contemporary group of 33 patients who underwent open radical nephrectomy for renal cell carcinoma.Patients in the laparoscopic radical nephrectomy group had significantly reduced, estimated blood loss (172 versus 451 ml., p <0.001), hospital stay (3.4 versus 5.2 days, p <0.001), pain medication requirement (28.0 versus 78.3 mg., p <0.001) and quicker return to normal activity than patients in the open radical nephrectomy group (3.6 versus 8.1 weeks, p <0.001). The majority of laparoscopic specimens (65%) were morcellated. Operating time and cost were higher in the laparoscopic than the open nephrectomy group. Average followup was 25 months (range 3 to 73) for the laparoscopic and 27.5 months (range 7 to 90) for the open group. Renal cell carcinoma in 3 patients (8%) recurred in the laparoscopic group versus renal cell carcinoma in 3 (9%) in the open group. When stratified patients with tumors larger than 4 to 10 cm. experienced similar benefits and results as patients with tumors less than or equal to 4 cm. To date there have been no instances of trocar or intraperitoneal seeding in the laparoscopic radical nephrectomy group.Laparoscopic radical nephrectomy, although technically demanding, is a viable alternative for managing localized renal tumors up to 10 cm. It affords patients with renal tumors an improved postoperative course with less pain and a quicker recovery while providing similar efficacy at 2-year followup for patients with T1 and T2 tumors.

ABSTRACT Pandemic SARS CoV-2 has been undergoing rapid evolution during spread throughout the world resulting in the emergence of many Spike protein variants, some of which appear to either evade antibody neutralization, transmit more efficiently, or potentially exhibit increased virulence. This raises significant concerns regarding the long-term efficacy of protection elicited after primary infection and/or from vaccines derived from single virus Spike (S) genotypes, as well as the efficacy of anti-S monoclonal antibody based therapeutics. Here, we used fully human polyclonal human IgG (SAB-185), derived from hyperimmunization of transchromosomic bovines with DNA plasmids encoding the SARS-CoV-2 Wa-1 strain S protein or purified ectodomain of S protein, to examine the neutralizing capacity of SAB-185 in vitro and the protective efficacy of passive SAB-185 antibody (Ab) transfer in vivo . The Ab preparation was tested for neutralization against five variant SARS-CoV-2 strains: Munich (Spike D614G), UK (B.1.1.7), Brazil (P.1) and SA (B.1.3.5) variants, and a variant isolated from a chronically infected immunocompromised patient (Spike Δ144-146). For the in vivo studies, we used a new human ACE2 (hACE2) transgenic Syrian hamster model that exhibits lethality after SARS-Cov-2 challenge and the Munich, UK, SA and Δ144-146 variants. SAB-185 neutralized each of the SARS-CoV-2 strains equivalently on Vero E6 cells, however, a control convalescent human serum sample was less effective at neutralizing the SA variant. In the hamster model, prophylactic SAB-185 treatment protected the hamsters from fatal disease and minimized clinical signs of infection. These results suggest that SAB-185 may be an effective treatment for patients infected with SARS CoV-2 variants.

Abstract SARS-CoV-2, the causative agent of COVID-19, emerged at the end of 2019 and by mid-June 2020, the virus has spread to at least 215 countries, caused more than 8,000,000 confirmed infections and over 450,000 deaths, and overwhelmed healthcare systems worldwide. Like SARS-CoV, which emerged in 2002 and caused a similar disease, SARS-CoV-2 is a betacoronavirus. Both viruses use human angiotensin-converting enzyme 2 (hACE2) as a receptor to enter cells. However, the SARS-CoV-2 spike (S) glycoprotein has a novel insertion that generates a putative furin cleavage signal and this has been postulated to expand the host range. Two low passage (P) strains of SARS-CoV-2 (Wash1: P4 and Munich: P1) were cultured twice in Vero-E6 cells and characterized virologically. Sanger and MinION sequencing demonstrated significant deletions in the furin cleavage signal of Wash1: P6 and minor variants in the Munich: P3 strain. Cleavage of the S glycoprotein in SARS-CoV-2-infected Vero-E6 cell lysates was inefficient even when an intact furin cleavage signal was present. Indirect immunofluorescence demonstrated the S glycoprotein reached the cell surface. Since the S protein is a major antigenic target for the development of neutralizing antibodies we investigated the development of neutralizing antibody titers in serial serum samples obtained from COVID-19 human patients. These were comparable regardless of the presence of an intact or deleted furin cleavage signal. These studies illustrate the need to characterize virus stocks meticulously prior to performing either in vitro or in vivo pathogenesis studies.

Abstract Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) variants with amino-acid substitutions and deletions in spike protein (S) can reduce the effectiveness of monoclonal antibodies (mAbs) and may compromise immunity induced by vaccines. We report a polyclonal, fully human, anti-SARS-CoV-2 immunoglobulin produced in transchromosomic bovines (Tc-hIgG-SARS-CoV-2) hyperimmunized with two doses of plasmid DNA encoding the SARS-CoV-2 Wuhan strain S gene, followed by repeated immunization with S protein purified from insect cells. The resulting Tc-hIgG-SARS-CoV-2, termed SAB-185, efficiently neutralizes SARS-CoV-2, and vesicular stomatitis virus (VSV) SARS-CoV-2 chimeras in vitro . Neutralization potency was retained for S variants including S477N, E484K, and N501Y, substitutions present in recent variants of concern. In contrast to the ease of selection of escape variants with mAbs and convalescent human plasma, we were unable to isolate VSV-SARS-CoV-2 mutants resistant to Tc-hIgG-SARS-CoV-2 neutralization. This fully human immunoglobulin that potently inhibits SARS-CoV-2 infection may provide an effective therapeutic to combat COVID-19.

Abstract Eastern equine encephalitis virus (EEEV), a mosquito-borne RNA virus, is one of the most acutely virulent viruses endemic to the Americas, causing between 30% and 70% mortality in symptomatic human cases. A major factor in the virulence of EEEV is the presence of four binding sites for the hematopoietic cell-specific microRNA, miR-142-3p, in the 3’ untranslated region (3’ UTR) of the virus. Three of the sites are “canonical” with all 8 seed sequence residues complimentary to miR-142-3p while one is “non-canonical” and has a seed sequence mismatch. Interaction of the EEEV genome with miR-142-3p limits virus replication in myeloid cells and suppresses the systemic innate immune response, greatly exacerbating EEEV neurovirulence. The presence of the miRNA binding sequences is also required for efficient EEEV replication in mosquitoes and, therefore, essential for transmission of the virus. In the current studies, we have examined the role of each binding site by point mutagenesis of seed sequences in all combinations of sites followed by infection of mammalian myeloid cells, mosquito cells and mice. The resulting data indicate that both canonical and non-canonical sites contribute to cell infection and animal virulence, however, surprisingly, all sites are rapidly deleted from EEEV genomes shortly after infection of myeloid cells or mice. Finally, we show that the virulence of a related encephalitis virus, western equine encephalitis virus, is also dependent upon miR-142-3p binding sites. Author Summary Eastern equine encephalitis virus (EEEV) is one of the most acutely virulent mosquito-borne viruses in the Americas. A major determinant of EEEV virulence is a mammalian microRNA (miRNA) that is primarily expressed in myeloid cells, miR-142-3p. Like miRNA suppression of host mRNA, miR-142-3p binds to the 3’ untranslated region (UTR) of the EEEV genome only in myeloid cells suppressing virus replication and the induction of the innate immune response. In this study, we used point mutations in all four miR-142-3p binding sites in the EEEV 3’ UTR to understand the mechanism behind this miRNA suppression. We observed that decreasing the number of miR-142-3p binding sites leads to virus escape and ultimately attenuation in vivo . Furthermore, another virus, western equine encephalitis virus, also encodes miR-142-3p binding sites that contribute to virulence in vivo . These results provide insight into the mechanism of how cell-specific miRNAs can mediate suppression of virus replication.

ABSTRACT Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV) is a positively-stranded RNA arbovirus of the genus Alphavirus that causes encephalitis in humans. Cynomolgus macaques are a relevant model of the human disease caused by VEEV and are useful in exploring pathogenic mechanisms and the host response to VEEV infection. Macaques were exposed to small-particle aerosols containing virus derived from an infectious clone of VEEV strain INH-9813, a subtype IC strain isolated from a human infection. VEEV-exposed macaques developed a biphasic fever after infection similar to that seen in humans. Maximum temperature deviation correlated with the inhaled dose, but fever duration did not. Neurological signs, suggestive of virus penetration into the CNS, were predominantly seen in the second febrile period. Electroencephalography data indicated a statistically significant decrease in all power bands and circadian index during the second febrile period that returned to normal after fever resolved. Intracranial pressure increased late in the second febrile period. On day 6 post-infection macaques had high levels of MCP-1 and IP-10 chemokines in the CNS, as well as a marked increase of T lymphocytes and activated microglia. More than four weeks after infection, viral genomic RNA was found in the brain, cerebrospinal fluid and cervical lymph nodes. Pro-inflammatory cytokines & chemokines, infiltrating leukocytes and pathological changes were seen in the CNS tissues of macaques euthanized at these times. These data are consistent with persistence of virus replication and/or genomic RNA and potentially, inflammatory sequelae in the central nervous system after resolution of acute VEEV disease.

Abstract The inflammatory upregulation of kynurenine metabolism induces immunomodulatory responses via incompletely understood mechanisms. We report that increases in cellular and systemic kynurenine levels yield the electrophilic derivative kynurenine-carboxyketoalkene (Kyn-CKA), as evidenced by the accumulation of thiol-conjugates and saturated metabolites. Under physiological conditions, Kyn-CKA induces Nrf2-regulated genes and inhibits NF-κB and NLRP3-dependent pro-inflammatory signaling. Sickle Cell Disease (SCD) is a hereditary hemolytic condition characterized by basal inflammation and recurrent vaso-occlusive crises. Both a transgenic SCD murine model and SCD patients exhibit increased kynurenine synthesis and elevated Kyn-CKA metabolite levels. Plasma hemin and kynurenine concentrations are positively correlated, indicating that Kyn-CKA synthesis in SCD is upregulated during pathogenic vascular stress. Remarkably, exogenous administration of Kyn-CKA abrogated pulmonary microvasculature occlusion in SCD mice, an important factor in the development of lung injury. These findings demonstrate that the upregulation of kynurenine synthesis and its metabolism to Kyn-CKA is an adaptive response that attenuates inflammation and protects tissues. One-Sentence Summary Kyn-CKA is a kynurenine-derived signaling mediator that transduces its immunomodulatory protective actions and attenuates vaso-occlusion in sickle cell disease.

Abstract Vaccines are urgently needed to combat the global coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic, and testing of candidate vaccines in an appropriate non-human primate (NHP) model is a critical step in the process. Infection of African green monkeys (AGM) with a low passage human isolate of SARS-CoV-2 by aerosol or mucosal exposure resulted in mild clinical infection with a transient decrease in lung tidal volume. Imaging with human clinical-grade 18 F-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ( 18 F-FDG PET) co-registered with computed tomography (CT) revealed pulmonary lesions at 4 days post-infection (dpi) that resolved over time. Infectious virus was shed from both respiratory and gastrointestinal (GI) tracts in all animals in a biphasic manner, first between 2-7 dpi followed by a recrudescence at 14-21 dpi. Viral RNA (vRNA) was found throughout both respiratory and gastrointestinal systems at necropsy with higher levels of vRNA found within the GI tract tissues. All animals seroconverted simultaneously for IgM and IgG, which has also been documented in human COVID-19 cases. Young AGM represent an excellent species to study mild/subclinical COVID-19 disease and have shed light on unknown aspects of long-term virus shedding. They are ideally suited for preclinical evaluation of candidate vaccines and therapeutic interventions. One Sentence Summary Subclinical infection of African green monkeys infected with SARS-CoV-2 results in prolonged shedding of infectious virus from both respiratory and gastrointestinal tracts.