Abstract Ebola virus (EBOV) is the most virulent pathogens that cause hemorrhagic fever with high mortality rates in humans and nonhuman primates. The postexposure antibody therapies to prevent EBOV infection are considered efficient. However, due to the poor thermal stability of mammalian antibody, their application in the tropics has been limited. Here, we developed a thermostable therapeutic antibody against EBOV based on chicken immunoglobulin Y (IgY). The IgY antibodies demonstrated excellent thermal stability, which retained their neutralizing activity at 25°C for one year, in contrast to conventional polyclonal or monoclonal antibodies (MAbs). We immunized laying hens with a variety of EBOV vaccine candidates and confirmed that VSV Δ G/EBOVGP encoding the EBOV glycoprotein could induce high titer neutralizing antibodies against EBOV. The therapeutic efficacy of immune IgY antibodies in vivo was evaluated in the newborn Balb/c mice model. Lethal dose of virus challenged mice were treated 2 or 24 h post-infection with different doses of anti-EBOV IgY. The group receiving a high dose of 10 6 NAU/kg (neutralizing antibody units/kilogram) achieved complete protection with no signs of disease, while the low-dose group was only partially protected. In contrast, all mice receiving naïve IgY died within 10 days. In conclusion, the anti-EBOV IgY exhibits excellent thermostability and protective efficacy, and it is very promising to be developed as alternative therapeutic entities. Author Summary Although several Ebola virus therapeutic antibodies have been reported in recent years, however, due to the poor thermal stability of mammalian antibody, their application in tropical endemic areas has been limited. We developed a highly thermostable therapeutic antibody against EBOV based on chicken immunoglobulin Y (IgY). The IgY antibodies demonstrated excellent thermal stability, which retained their neutralizing activity at 25°C for one year. The newborn mice receiving passive transfer of IgY achieved complete protection against a lethal dose of virus challenge indicating that the anti-EBOV IgY provides a promising countermeasure to solve the current clinical application problems of Ebola antibody-based treatments in Africa.

Abstract Neutralizing antibodies (NAbs) can prevent and treat infections caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). However, continuously emerging variants, such as Omicron, have significantly reduced the potency of most known NAbs. The selection of NAbs with broad neutralizing activities and the identification of conserved critical epitopes are still urgently needed. Here, we identified an extremely potent antibody (55A8) by single B-cell sorting from convalescent SARS-CoV-2-infected patients that recognized the receptor-binding domain (RBD) in the SARS-CoV-2 spike (S) protein. 55A8 could bind to wild-type SARS-CoV-2, Omicron BA.1 and Omicron BA.2 simultaneously with 58G6, a NAb previously identified by our group. Importantly, an antibody cocktail containing 55A8 and 58G6 (2-cocktail) showed synergetic neutralizing activity with a half-maximal inhibitory concentration (IC 50 ) in the picomolar range in vitro and prophylactic efficacy in hamsters challenged with Omicron (BA.1) through intranasal delivery at an extraordinarily low dosage (25 μg of each antibody daily) at 3 days post-infection. Structural analysis by cryo-electron microscopy (cryo-EM) revealed that 55A8 is a Class III NAb that recognizes a highly conserved epitope. It could block angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) binding to the RBD in the S protein trimer via steric hindrance. The epitopes in the RBD recognized by 55A8 and 58G6 were found to be different and complementary, which could explain the synergetic mechanism of these two NAbs. Our findings not only provide a potential antibody cocktail for clinical use against infection with current SARS-CoV-2 strains and future variants but also identify critical epitope information for the development of better antiviral agents.

Abstract The outbreak of COVID-19 has emerged as a global pandemic. The unprecedented scale and severity call for rapid development of effective prophylactics or therapeutics. We here reported Nanobody (Nb) phage display libraries derived from four camels immunized with the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain (RBD), from which 381 Nbs were identified to recognize SARS-CoV-2-RBD. Furthermore, seven Nbs were shown to block interaction of human angiotensin converting enzyme 2 (ACE2) with SARS-CoV-2-RBD-variants, bat-SL-CoV-WIV1-RBD and SARS-CoV-1-RBD. Among the seven candidates, Nb11-59 exhibited the highest activity against authentic SARS-CoV-2 with ND 50 of 0.55 μg/mL. Nb11-59 can be produced on a large-scale in Pichia pastoris , with 20 g/L titer and 99.36% purity. It also showed good stability profile, and nebulization did not impact its stability. Overall, Nb11-59 might be a promising prophylactic and therapeutic molecule against COVID-19, especially through inhalation delivery. Graphical Abstract

COVID-19 caused by the emerging human coronavirus, SARS-CoV-2, has become a global pandemic, leading a serious threat to human health. So far, there is none vaccines or specific antiviral drugs approved for that. Therapeutic antibodies for SARS-CoV-2, was obtained from hyper immune equine plasma in this study. Herein, SARS-CoV-2 RBD with gram level were obtained through Chinese hamster ovary cells high-density fermentation. The binding of RBD to SARS-CoV-2 receptor, human ACE2, was verified and the efficacy of RBD in vivo was tested on mice and then on horses. As a result, RBD triggered high-titer neutralizing antibodies in vivo, and immunoglobulin fragment F(ab')2 was prepared from horse antisera through removing Fc. Neutralization test demonstrated that RBD-specific F(ab')2 inhibited SARS-CoV-2 with EC50 at 0.07 μg/ml, showing a potent inhibitory effect on SARS-CoV-2. These results highlights as RBD-specific F(ab')2 as therapeutic candidate for SARS-CoV-2.### Competing Interest Statement

Background To evaluate the methodological quality, report quality, and evidence quality of meta-analysis (MA) and systematic review (SR) on the efficacy of probiotics in the treatment of rheumatoid arthritis (RA). Methods Databases were used to identify eligible SRs/MAs until February 12, 2024. The methodological quality of the studies was assessed using AMSTAR-2 tool, the quality of the literature reports was scored using PRISMA checklists, and the quality of the evidence was graded using GRADE system. Results Seven reviews including 21 outcomes were included. Methodological quality of the included reviews was of general low, and the entries with poor scores were 2, 4, and 7. By PRISMA checklists, there were some reporting deficiencies, and quality problems were mainly reflected in the reporting registration and protocol, comprehensive search strategy and additional analysis. GRADE results elevated the quality of evidence to be low or very low overall. Conclusions Probiotics may have a therapeutic effect on RA, based on the evidence provided by the SRs/MAs in this overview. Nevertheless, there is still a lack of conclusive evidence due to methodological limitations in the included research. To make trustworthy judgments regarding the efficacy of probiotics in the treatment of RA, more large-scale, high-quality randomized controlled trials are still required.