Background: Despite extensive knowledge regarding the diagnosis and management of keratoconus and ectatic corneal diseases, many controversies still exist. For that reason, there is a need for current guidelines for the diagnosis and management of these conditions. Purpose: This project aimed to reach consensus of ophthalmology experts from around the world regarding keratoconus and ectatic diseases, focusing on their definition, concepts, clinical management, and surgical treatments. Methods: The Delphi method was followed with 3 questionnaire rounds and was complemented with a face-to-face meeting. Thirty-six panelists were involved and allocated to 1 of 3 panels: definition/diagnosis, nonsurgical management, or surgical treatment. The level of agreement considered for consensus was two thirds. Results: Numerous agreements were generated in definitions, methods of diagnosing, and management of keratoconus and other ectatic diseases. Nonsurgical and surgical treatments for these conditions, including the use of corneal cross-linking and corneal transplantations, were presented in a stepwise approach. A flowchart describing a logical management sequence for keratoconus was created. Conclusions: This project resulted in definitions, statements, and recommendations for the diagnosis and management of keratoconus and other ectatic diseases. It also provides an insight into the current worldwide treatment of these conditions.

Summary Many plants acquire freezing tolerance through cold acclimatization (CA), a prolonged exposure to low but non‐freezing temperatures at the onset of winter. CA is associated with gene expression that requires transient calcium influx into the cytosol. Alfalfa ( Medicago sativa ) cells treated with agents blocking this influx are unable to cold‐acclimatize. Conversely, chemical agents causing increased calcium influx induce cold acclimatization‐specific ( cas ) gene expression in alfalfa at 25°C. How low temperature triggers calcium influx is, however, unknown. We report here that induction of a CA‐specific gene ( cas30 ), calcium influx and freezing tolerance at 4°C are all prevented by cell membrane fluidization, but, conversely, are induced at 25°C by membrane rigidification. cas30 expression and calcium influx at 4°C are also prevented by jasplakinolide (JK), an actin microfilament stabilizer, but induced at 25°C by the actin microfilament destabilizer cytochalasin D (CD). JK blocked the membrane rigidifier‐induced, but not the calcium channel agonist‐induced cas30 expression at 25°C. These findings indicate that cytoskeleton re‐organization is an integral component in low‐temperature signal transduction in alfalfa cell suspension cultures, serving as a link between membrane rigidification and calcium influx in CA.

Summary Mitogen‐activated protein kinases (MAPKs) appear to be ubiquitously involved in signal transduction during eukaryotic responses to extracellular stimuli. In plants, no heat shock‐activated MAPK has so far been reported. Also, whereas cold activates specific plant MAPKs such as alfalfa SAMK, mechanisms of such activation are unknown. Here, we report a heat shock‐activated MAPK (HAMK) immunologically related to ERK (Extracellular signal‐Regulated Kinase) superfamily of protein kinases. Molecular mechanisms of heat‐activation of HAMK and cold‐activation of SAMK were investigated. We show that cold‐activation of SAMK requires membrane rigidification, whereas heat‐activation of HAMK occurs through membrane fluidization. The temperature stress‐ and membrane structure‐dependent activation of both SAMK and HAMK is mimicked at 25°C by destabilizers of microfilaments and microtubules, latrunculin B and oryzalin, respectively; but is blocked by jasplakinolide, a stabilizer of actin microfilaments. Activation of SAMK or HAMK by temperature, chemically modulated membrane fluidity, or by cytoskeleton destabilizers is inhibited by blocking the influx of extracellular calcium. Activation of SAMK or HAMK is also prevented by an antagonist of calcium‐dependent protein kinases (CDPKs). In summary, our data indicate that cold and heat are sensed by structural changes in the plasma membrane that translates the signal via cytoskeleton, Ca 2+ fluxes and CDPKs into the activation of distinct MAPK cascades.

This study describes a novel surgical technique of limbal transplantation, which combines the benefits of existing techniques while avoiding their difficulties. Six patients with unilateral and total limbal stem cell deficiency following ocular surface burns underwent a single-stage procedure. A 2 × 2 mm strip of donor limbal tissue was obtained from the healthy eye and divided into eight to ten small pieces. After surgical preparation of the recipient ocular surface, these tiny limbal transplants were distributed evenly over an amniotic membrane placed on the cornea. After surgery, a completely epithelialised, avascular and stable corneal surface was seen in all recipient eyes by 6 weeks, and this was maintained at a mean ± SD follow-up of 9.2 ± 1.9 months. Visual acuity improved from worse than 20/200 in all recipient eyes before surgery to 20/60 or better in four (66.6%) eyes, while none of the donor eyes developed any complications. This technique requires less donor tissue than previously used for conventional autografting and does not need a specialist laboratory for cell expansion. Although long-term results are awaited, this simple limbal epithelial transplantation promises to be an easy and effective technique for treating unilateral limbal stem cell deficiency following ocular burns.

Abstract Lymph nodes (LNs) are frequently the first sites of metastasis. Currently, the only prognostic LN assessment is determining metastasis status. However, there is evidence suggesting that LN metastasis is facilitated by a pre-metastatic niche induced by tumour derived extracellular vehicles (EVs). Therefore, it is important to detect and modify the LN environmental changes. We have previously reported that neutrophil extracellular traps (NETs) can sequester and promote distant metastasis. Here, we first confirmed that LN NETs are associated with reduced patient survival. Next, we demonstrated that NETs deposition precedes LN metastasis and NETs inhibition abolishes LN metastases in animal mode. Furthermore, we discovered that EVs are essential to the formation of LN NETs. Lymphatic endothelial cells secrete CXCL8/2 in response to EVs inducing NETs formation and the promotion of LN metastasis. Our findings are the first to reveal the role of EV induced NETs in LN metastasis and provide potential immunotherapeutic vulnerabilities. Graphic Abstract Illustrative demonstration of the LNs premetastatic niche formation induced by EVs and NETs. Primary tumour constantly secretes EVs, which were actively uptaken by LECs. LECs subsequently secretes CXCL8 or CXCL2 upon EV reception. CXCL8 and CXCL2 are both neutrophil chemoattractants and potent NETs inducers. The following neutrophil recruitment and NETs formation lead to increased LN metastasis burden.

Esophageal adenocarcinoma arises from Barrett's esophagus, a precancerous metaplastic replacement of squamous by columnar epithelium in response to chronic inflammation. Multi-omics profiling, integrating single-cell transcriptomics, extracellular matrix proteomics, tissue-mechanics and spatial proteomics of 64 samples from 12 patients' paths of progression from squamous epithelium through metaplasia, dysplasia to adenocarcinoma, revealed shared and patient-specific progression characteristics. The classic metaplastic replacement of epithelial cells was paralleled by metaplastic changes in stromal cells, ECM and tissue stiffness. Strikingly, this change in tissue state at metaplasia was already accompanied by appearance of fibroblasts with characteristics of carcinoma-associated fibroblasts and of an NK cell-associated immunosuppressive microenvironment. Thus, Barrett's esophagus progresses as a coordinated multi-component system, supporting treatment paradigms that go beyond targeting cancerous cells to incorporating stromal reprogramming.

Abstract Early events associated with chronic inflammation and cancer involve significant remodeling of the extracellular matrix (ECM), which greatly affects its composition and functional properties. Using lung squamous cell carcinoma (LSCC), a chronic inflammation-associated cancer (CIAC), we optimized a robust proteomic pipeline to discover potential biomarker signatures and protein changes specifically in the stroma. We combined ECM enrichment from fresh human tissues, data-independent acquisition strategies, and stringent statistical processing to analyze ‘Tumor’ and matched adjacent histologically normal (‘Matched Normal’) tissues from patients with LSCC. Overall, 1,802 protein groups were quantified with at least two unique peptides, and 56% of those proteins were annotated as ‘extracellular’. Confirming dramatic ECM remodeling during CIAC progression, 529 proteins were significantly altered in the ‘Tumor’ compared to ‘Matched Normal’ tissues. The signature was typified by a coordinated loss of basement membrane proteins and small leucine-rich proteins. The dramatic increase in the stromal levels of SERPINH1/heat shock protein 47, that was discovered using our ECM proteomic pipeline, was validated by immunohistochemistry (IHC) of ‘Tumor’ and ‘Matched Normal’ tissues, obtained from an independent cohort of LSCC patients. This integrated workflow provided novel insights into ECM remodeling during CIAC progression, and identified potential biomarker signatures and future therapeutic targets. Statement of significance of the study The extracellular matrix (ECM) is a complex scaffolding network composed of glycoproteins, proteoglycans and collagens, which binds soluble factors and, most importantly, significantly impacts cell fate and function. Alterations of ECM homeostasis create a microenvironment promoting tumor formation and progression, therefore deciphering molecular details of aberrant ECM remodeling is essential. Here, we present a multi-laboratory and refined proteomic workflow, featuring i) the prospective collection of tumor and matched histologically normal tissues from patients with lung squamous cell carcinoma, ii) the enrichment for ECM proteins, and iii) subsequent label-free data-independent acquisition (DIA)-based quantification. DIA is a powerful strategy to comprehensively profile and quantify all detectable precursor ions contained in the biological samples, with high quantification accuracy and reproducibility. When combined with very stringent statistical cutoffs, this unbiased strategy succeeded in capturing robust and highly confident proteins changes associated with cancer, despite biological variability between individuals. This label-free quantification workflow provided the flexibility required for ongoing prospective studies. Discussions with clinicians, surgeons, pathologists, and cancer biologists represent an opportunity to interrogate the DIA digitalized maps of the samples for newly formulated questions and hypotheses, thus gaining insights into the continuum of the disease and opening the path to novel ECM-targeted therapies.