ABSTRACT Gene functional descriptions, which are typically derived from sequence similarity to experimentally validated genes in a handful of model species, offer a crucial line of evidence when searching for candidate genes that underlie trait variation. Plant responses to environmental cues, including gene expression regulatory variation, represent important resources for understanding gene function and crucial targets for plant improvement through gene editing and other biotechnologies. However, even after years of effort and numerous large-scale functional characterization studies, biological roles of large proportions of protein coding genes across the plant phylogeny are poorly annotated. Here we describe the Joint Genome Institute (JGI) Plant Gene Atlas, a public and updateable data resource consisting of transcript abundance assays from 2,090 samples derived from 604 tissues or conditions across 18 diverse species. We integrated across these diverse conditions and genotypes by analyzing expression profiles, building gene clusters that exhibited tissue/condition specific expression, and testing for transcriptional modulation in response to environmental queues. For example, we discovered extensive phylogenetically constrained and condition-specific expression profiles across many gene families and genes without any functional annotation. Such conserved expression patterns and other tightly co-expressed gene clusters let us assign expression derived functional descriptions to 64,620 genes with otherwise unknown functions. The ever-expanding Gene Atlas resource is available at JGI Plant Gene Atlas ( https://plantgeneatlas.jgi.doe.gov ) and Phytozome ( https://phytozome-next.jgi.doe.gov ), providing bulk access to data and user-specified queries of gene sets. Combined, these web interfaces let users access differentially expressed genes, track orthologs across the Gene Atlas plants, graphically represent co-expressed genes, and visualize gene ontology and pathway enrichments.

A bstract Fungal specialized metabolites include many bioactive compounds with potential applications as pharmaceuticals, agrochemical agents, and industrial chemicals. Exploring and discovering novel fungal metabolites is critical to combat antimicrobial resistance in various fields, including medicine and agriculture. Yet, identifying the conditions or treatments that will trigger the production of specialized metabolites in fungi can be cumbersome since most of these metabolites are not produced under standard culture conditions. Here, we introduce a data-driven algorithm comprising various network analysis routes to characterize the production of known and putative specialized metabolites and unknown analytes triggered by different exogenous compounds. We use bipartite networks to quantify the relationship between the metabolites and the treatments stimulating their production through two routes. The first, called the direct route, determines the production of known and putative specialized metabolites induced by a treatment. The second, called the auxiliary route, is specific for unknown analytes. We demonstrated the two routes by applying chitooligosaccharides and lipids at two different temperatures to the opportunistic human fungal pathogen Aspergillus fumigatus . We used various network centrality measures to rank the treatments based on their ability to trigger a broad range of specialized metabolites. The specialized metabolites were ranked based on their receptivity to various treatments. Altogether, our data-driven techniques can track the influence of any exogenous treatment or abiotic factor on the metabolomic output for targeted metabolite research. This approach can be applied to complement existing LC/MS analyses to overcome bottlenecks in drug discovery and development from fungi. Notice This manuscript has been authored by UT-Battelle, LLC, under contract DE-AC05-00OR22725 with the US Department of Energy (DOE). The US government retains and the publisher, by accepting the article for publication, acknowledges that the US government retains a nonexclusive, paid-up, irrevocable, worldwide license to publish or reproduce the published form of this manuscript, or allow others to do so, for US government purposes. DOE will provide public access to these results of federally sponsored research in accordance with the DOE Public Access Plan ( http://energy.gov/downloads/doe-public-access-plan ). Author summary Triggering silent biosynthetic gene clusters in fungi to produce specialized metabolites is a tedious process that requires assessing various environmental conditions, applications of epigenetic modulating agents, or co-cultures with other microbes. We provide a data-driven solution using network analysis, called “direct route”, to characterize the production of known and putative specialized metabolites triggered by various exogenous compounds. We also provide a “auxiliary route” to distinguish unique unknown analytes amongst the abundantly produced analytes in response to these treatments. The developed techniques can assist researchers to identify treatments or applications that could positively influence the production of a targeted metabolite or recognize unique unknown analytes that can be further fractionated, characterized, and screened for their biological activities and hence, discover new metabolites.

Historically neglected by microbial ecologists, soil viruses are now thought to be critical to global biogeochemical cycles. However, our understanding of their global distribution, activities and interactions with the soil microbiome remains limited. Here we present the Global Soil Virus Atlas, a comprehensive dataset compiled from 2,953 previously sequenced soil metagenomes and composed of 616,935 uncultivated viral genomes and 38,508 unique viral operational taxonomic units. Rarefaction curves from the Global Soil Virus Atlas indicate that most soil viral diversity remains unexplored, further underscored by high spatial turnover and low rates of shared viral operational taxonomic units across samples. By examining genes associated with biogeochemical functions, we also demonstrate the viral potential to impact soil carbon and nutrient cycling. This study represents an extensive characterization of soil viral diversity and provides a foundation for developing testable hypotheses regarding the role of the virosphere in the soil microbiome and global biogeochemistry.

Abstract Sphagnum peat mosses is a major genus that is common to peatland ecosystems, where the species contribute to key biogeochemical processes including the uptake and long-term storage of atmospheric carbon. Warming threatens Sphagnum mosses and the peatland ecosystems in which they reside, potentially affecting the fate of vast global carbon stores. The competitive success of Sphagnum species is attributed in part to their symbiotic interactions with microbial associates. These microbes have the potential to rapidly respond to environmental change, thereby helping their host plants survive under changing environmental conditions. To investigate the importance of microbiome thermal origin on host plant thermotolerance, we mechanically separated the microbiome from Sphagnum plants residing in a whole-ecosystem warming study, transferred the component microbes to germ-free plants, and exposed the new hosts to temperature stress. Although warming decreased plant photosynthesis and growth in germ-free plants, the addition of a microbiome from a thermal origin that matched the experimental temperature completely restored plants to their pre-warming growth rates. Metagenome and metatranscriptome analyses revealed that warming altered microbial community structure, including the composition of key cyanobacteria symbionts, in a manner that induced the plant heat shock response, especially the Hsp70 family and jasmonic acid production. The plant heat shock response could be induced even without warming, suggesting that the warming-origin microbiome provided the host plant with thermal preconditioning. Together, our findings show that the microbiome can transmit thermotolerant phenotypes to host plants, providing a valuable strategy for rapidly responding to environmental change.

Microbes affect the global carbon cycle that influences climate change and are in turn influenced by environmental change. Here, we use data from a long-term whole-ecosystem warming experiment at a boreal peatland to answer how temperature and CO 2 jointly influence communities of abundant, diverse, yet poorly understood, non-fungi microbial Eukaryotes (protists). These microbes influence ecosystem function directly through photosynthesis and respiration, and indirectly, through predation on decomposers (bacteria, fungi). Using a combination of high-throughput fluid imaging and 18S amplicon sequencing, we report large climate-induced, community-wide shifts in the community functional composition of these microbes (size, shape, metabolism) that could alter overall function in peatlands. Importantly, we demonstrate a taxonomic convergence but a functional divergence in response to warming and elevated CO 2 with most environmental responses being contingent on organismal size: warming effects on functional composition are reversed by elevated CO 2 and amplified in larger microbes but not smaller ones. These findings show how the interactive effects of warming and rising CO 2 could alter the structure and function of peatland microbial food webs — a fragile ecosystem that stores 25% of terrestrial carbon and is increasingly threatened by human exploitation.

Abstract Peatlands store approximately one-third of the global terrestrial carbon and are historically considered carbon sinks due to primary production outpacing microbial decomposition of organic matter. Climate change has the potential to alter the rate at which peatlands store or release carbon, and results from the Spruce and Peatland Responses Under Changing Environments (SPRUCE) experiment have shown net losses of organic matter and increased greenhouse gas production from a boreal peatland in response to whole-ecosystem warming. In this study, we utilized the SPRUCE sites to investigate how warming and elevated CO 2 impact peat microbial communities and peat soil decomposition. We deployed peat soil decomposition ladders across warming and CO 2 treatment enclosures for three years, after which we characterized bacterial, archaeal, and fungal communities through amplicon sequencing and measured peat mass and compositional changes across four depth increments. Microbial diversity and community composition were significantly impacted by soil depth, temperature, and CO 2 treatment. Bacterial/archaeal α-diversity increased significantly with increasing temperature, and fungal α-diversity was significantly lower under elevated CO 2 treatment. Trans-domain microbial networks showed higher complexity (nodes, edges, degree, betweenness centrality) of microbial communities in decomposition ladders from warmed enclosures, and the number of highly connected, hub taxa within the networks was positively correlated with temperature. Methanogenic hubs were identified in the networks constructed from the warmest enclosures, indicating increased importance of methanogenesis in response to warming. Microbial community responses were not however reflected in measures of peat soil decomposition, as warming and elevated CO 2 had no significant short-term effects on soil mass loss or composition. Regardless of treatment, on average only 4.5% of the original soil mass was lost after three years and variation between replicates was high, potentially masking treatment effects. Many previous studies from the SPRUCE experiment have shown that warming is accelerating organic-matter decomposition and CO 2 and CH 4 production, and our results suggest that these changes may be driven by warming-induced shifts in microbial communities.

Abstract Temperature significantly impacts microbial communities’ composition and function, which subsequently plays a vital role in the global carbon cycle that ultimately fuels climate change. Interactions between different microorganisms might be critical in shaping how these communities react to both temperature changes. Additionally, rising temperatures are occurring in the context of increasingly nutrient-rich ecosystems due to human activity. Nonetheless, we lack a comprehensive understanding of how predation influences microbial communities in future climate scenarios and an increasingly nutrient-rich world. Here, we assess whether predation by key bacterial consumers—ciliates—influences a microbial community’s freshwater temperature and nutrient response regarding biomass, diversity, structure, and function. In a three-week microcosm experiment, we exposed mostly prokaryotic microbial communities to a community of ciliate predators at two different temperature scenarios (ambient and +3°C, i.e., a conservative projection of climate change by 2050) and nutrient levels (low and elevated). Nutrients, temperature, and ciliate presence influenced microbial biomass and function separately, but their interaction had the largest explanatory power over the observed changes in microbial community biomass, structure, and function. Our study supports previous findings that temperature and nutrients are essential drivers of microbial community structure and function but also demonstrates that the presence of predators can mediate these effects, indicating that the biotic context is as important as the abiotic context to understand microbial responses to novel climates. Importance While the importance of the abiotic environment in microbial communities has long been studied, how prevalent ecological interactions, like predation and the broader abiotic context, may influence these responses is largely unknown. Our study disentangles the complex interplay between temperature, nutrients, and predation and their joint effects on microbial community diversity and function. The findings suggest that while temperature and nutrients are fundamental drivers of microbial community dynamics, the presence of predators significantly mediates these responses. Our study underscores the profound impact of abiotic factors on microbial communities, but how to properly understand, let alone predict, these responses, we need to account for the biotic context in which these are occurring.

Horizontal gene transfer (HGT) is a fundamental evolutionary process that plays a key role in bacterial evolution. The likelihood of a successful transfer event is expected to depend on the precise balance of costs and benefits resulting from pathway acquisition. Most experimental analyses of HGT have focused on phenotypes that have large fitness benefits under appropriate selective conditions, such as antibiotic resistance. However, many examples of HGT involve phenotypes that are predicted to provide smaller benefits, such as the ability to catabolize additional carbon sources. We have experimentally reproduced one such HGT event in the laboratory, studying the effects of transferring a pathway for catabolism of the plant-derived aromatic compound salicyl alcohol into soil isolates from the Pseudomonas genus. We find that pathway acquisition enables rapid catabolism of salicyl alcohol with only minor disruptions to existing metabolic and regulatory networks of the new host. However, this new catabolic potential does not confer a measurable fitness advantage during competitive growth in the rhizosphere. We conclude that the phenotype of salicyl alcohol catabolism is readily transferred by HGT but is selectively neutral under environmentally-relevant conditions. We propose that this condition is common and that HGT of many pathways will be self-limiting, because the selective benefits are small and negative frequency-dependent.

Beetles are ubiquitous cave invertebrates worldwide that adapted to scarce subterranean resources when they colonized caves. Here, we investigated the potential role of gut microbiota in the adaptation of beetles to caves from different climatic regions of the Carpathians. The beetles' microbiota was host-specific, reflecting phylogenetic and nutritional adaptation. The microbial community structure further resolved conspecific beetles by caves suggesting microbiota-host coevolution and influences by local environmental factors. The detritivore species hosted a variety of bacteria known to decompose and ferment organic matter, suggesting turnover and host cooperative digestion of the sedimentary microbiota and allochthonous-derived nutrients. The cave Carabidae, with strong mandibulae adapted to predation and scavenging of animal and plant remains, had distinct microbiota dominated by symbiotic lineages Spiroplasma or Wolbachia . All beetles had relatively high levels of fermentative Carnobacterium and Vagococcus involved in lipid accumulation and a reduction of metabolic activity, and both features characterize adaptation to caves.

Climate change may reduce biodiversity leading to a reduction in ecosystem productivity. Despite numerous reports of a strong correlation of microbial diversity and ecosystem productivity, little is known about the warming effects on plant associated microbes. Here we explore the impact of experimental warming on the microbial and nitrogen-fixing (diazotroph) community associated with the widespread and ecologically relevant Sphagnum genus in a field warming experiment. To quantify changes in the abundance, diversity, and community composition of Sphagnum microbiomes with warming we utilized qPCR and Illumina sequencing of the 16S SSU rRNA and nifH gene. Microbial and diazotroph community richness and Shannon diversity decreased with warming (p<0.05). The diazotroph communities shifted from diverse communities to domination by primarily Nostocaceae (25% in control samples to 99% in elevated temperature samples). In addition, the nitrogen fixation activity measured with the acetylene reduction assay (ARA) decreased with warming treatment. This suggests the negative correlation of temperature and microbial diversity corresponds to a reduction in functional potential within the diazotroph community. The results indicate that climate warming may alter the community structure and function in peat moss microbiomes, with implications for impacts to host fitness and ecosystem productivity, and carbon uptake potential of peatlands.