Recent work has disclosed the critical role played by enamel peptides in sex classification of old skeletal remains. In particular, protein AMELY (amelogenin isoform Y) is present in the enamel dental tissue of male individuals only, while AMELX (isoform X) can be found in both sexes. AMELY can be easily detected by LC-MS/MS in the ion extracted chromatograms of the SM(ox)IRPPY peptide (monoisotopic [M + 2 H]+2 mass = 440.2233 m/z). In this paper, we exploited the dimorphic features of the amelogenin protein to determine the sex of the so-called 'Lovers of Modena', two Late Antique individuals whose skeletons were intentionally buried hand-in-hand. Upon discovery, mass media had immediately assumed they were a male-female couple, even if bad preservation of the bones did not allow an effective sex classification. We were able to extract proteins from the dental enamel of both individuals (~1600 years old) and to confidently classify them as males. Results were compared to 14 modern and archaeological control samples, confirming the reliability of the ion chromatogram method for sex determination. Although we currently have no information on the actual relationship between the 'Lovers of Modena' (affective? Kin-based?), the discovery of two adult males intentionally buried hand-in-hand may have profound implications for our understanding of funerary practices in Late Antique Italy.

Summary The Sicilian wolf represented the only population of wolves living on a Mediterranean island until the first half of the twentieth century (1930s-1960s) 1–7 . Previous studies hypothesised that they remained isolated from mainland wolves from the end of the Last Glacial Maximum (LGM) 8,9 , until human persecutions led them to extinction 1–7 . There are only seven known Sicilian wolf specimens from the 19th and 20th century preserved in museums in Italy and recent morphometric analyses assigned them to the new subspecies Canis lupus cristaldii 10 . To better understand the origins of the Sicilian wolf, and its relationship to other wolf populations, we sequenced four whole genomes (3.8×-11.6×) and five mitogenomes. We investigated the relationship between Sicilian wolves and other modern breeds to identify potential admixture. Furthermore, considering that the last land-bridge between Sicily and Italy disappeared after the LGM 11 , around 17 kya, we explored the possibility that the Sicilian wolf retained ancestry from ancient wolf and dog lineages. Additionally, we explored whether the long-term isolation might have affected the genomic diversity, inbreeding levels and genetic load of the Sicilian wolf. Our findings show that the Sicilian wolves shared most ancestry with the modern Italian wolf population but are better modelled as admixed with European dog breeds, and shared traces of Eneolithic and Bronze age European dogs. We also find signatures of severe inbreeding and low genomic diversity at population and individual levels due to long-term isolation and drift, suggesting also low effective population size.

Abstract Background The Italic Iron Age was characterized by the presence of various ethnic groups partially examined from a genomic perspective. To explore the evolution of Iron Age Italic populations and the genetic impact of Romanization, we focused on the Picenes, one of the most fascinating pre-Roman civilizations, who flourished on the Middle Adriatic side of Central Italy between the 9 th and the 3 rd century BCE, until the Roman colonization. Results We analyzed more than 50 samples, spanning more than 1,000 years of history from the Iron Age to Late Antiquity. Despite cultural diversity, our analysis reveals no major differences between the Picenes and other coeval populations, suggesting a shared genetic history of the Central Italian Iron Age ethnic groups. Nevertheless, a slight genetic differentiation between populations along the Adriatic and Tyrrhenian coasts can be observed, possibly due to genetic contacts between populations residing on the Italian and Balkan shores of the Adriatic Sea. Additionally, we found several individuals with ancestries deviating from their general population. Lastly, In the Late Antiquity period, the genetic landscape of the Middle Adriatic region drastically changed, indicating a relevant influx from the Near East. Conclusions Our findings, consistently with archeological hypotheses, suggest genetic interactions across the Adriatic Sea during the Bronze/Iron Age and a high level of individual mobility typical of cosmopolitan societies. Finally, we highlighted the role of the Roman Empire in shaping genetic and phenotypic changes that greatly impacted the Italian peninsula.

Abstract Mitogenomic (MT) introgression between species is readily documented in marine fishes. Such introgression events may either be long-term natural phenomena or the result of human-driven shifts in spatial distributions of previously separated species. Determining the drivers behind MT introgression is stymied by the difficulty of directly observing patterns of interbreeding over long timescales. Using ancient DNA spanning five millennia, we here investigate the long-term presence of MT introgression from Pacific bluefin tuna ( Thunnus orientalis ) and albacore ( Thunnus alalunga ) into Atlantic bluefin tuna ( Thunnus thynnus ), a species with extensive exploitation history and observed shifts in abundance, and demographic distribution. Comparing ancient (n=130) and modern (n=78) mitogenomes of specimens covering most of the range of Atlantic bluefin tuna we detect no significant spatial or temporal population structure. This lack of spatiotemporal genomic differentiation is indicative of ongoing gene flow between populations and large effective population sizes over millennia. Moreover, we identify introgressed MT genomes in ancient specimens up to 5000 years old and find that this rate of introgression has remained similar through time. We therefore conclude that MT introgression in the Atlantic bluefin tuna is to date unaffected by anthropogenic impacts. By providing the oldest example of directly observed MT introgression in the marine environment, our results highlight the utility of ancient DNA to obtain temporal insights in the long-term persistence of such phenomena.

During historical times many local populations of grey wolf (Canis lupus), once the most diffused mammal in the world, became extinct. Among these the Sicilian population, the biggest island of the Mediterranean Sea, was eradicated by human persecution in the early decades of the XX century. In order to reconstruct the genetic identity of the Sicilian wolf, we used ancient DNA techniques to analyse the mitochondrial DNA of the six known specimens actually stored in museums. We have successfully extracted and amplified a mtDNA fragment of the control region (CR) from four samples. Our analyses show that two samples have the same haplotype, that differs by two substitutions from the most diffused Italian haplotype (W14) and one substitution from the second Italian rare haplotype (W16). One of the others two samples shows a new wolf haplotype never described before and the fourth a haplotype common in dogs. Furthermore, all the detected wolf haplotypes in this study belonged to the mitochondrial haplogroup to which the Pleistocene European wolves and several current southern Europe haplotypes belong. Unfortunately, this endemic population of Mediterranean wolf, was definitively lost before it has been possible to understand its uniqueness and importance regards conservation.

The Italic Iron Age is characterized by the presence of various ethnic groups partially examined from a genomic perspective. To explore the evolution of Iron Age Italic populations and the genetic impact of Romanization, we focus on the Picenes, one of the most fascinating pre-Roman civilizations, who flourished on the Middle Adriatic side of Central Italy between the 9th and the 3rd century BCE, until the Roman colonization. More than 50 samples are reported, spanning more than 1000 years of history from the Iron Age to Late Antiquity. Despite cultural diversity, our analysis reveals no major differences between the Picenes and other coeval populations, suggesting a shared genetic history of the Central Italian Iron Age ethnic groups. Nevertheless, a slight genetic differentiation between populations along the Adriatic and Tyrrhenian coasts can be observed, possibly due to different population dynamics in the two sides of Italy and/or genetic contacts across the Adriatic Sea. Additionally, we identify several individuals with ancestries deviating from their general population. Lastly, in our Late Antiquity site, we observe a drastic change in the genetic landscape of the Middle Adriatic region, indicating a relevant influx from the Near East, possibly as a consequence of Romanization. Our findings, consistently with archeological hypotheses, suggest genetic interactions across the Adriatic Sea during the Bronze/Iron Age and a high level of individual mobility typical of cosmopolitan societies. Finally, we highlight the role of the Roman Empire in shaping genetic and phenotypic changes that greatly impact the Italian peninsula.