A fragment of the mitochondrial cytochrome b gene of avian malaria (genera Haemoproteus and Plasmodium) was amplified from blood samples of 12 species of passerine birds from the genera Acrocephalus, Phylloscopus and Parus. By sequencing 478 nucleotides of the obtained fragments, we found 17 different mitochondrial haplotypes of Haemoproteus or Plasmodium among the 12 bird species investigated. Only one out of the 17 haplotypes was found in more than one host species, this exception being a haplotype detected in both blue tits (Parus caeruleus) and great tits (Parus major). The phylogenetic tree which was constructed grouped the sequences into two clades, most probably representing Haemoproteus and Plasmodium, respectively. We found two to four different parasite mitochondrial DNA (mtDNA) haplotypes in four bird species. The phylogenetic tree obtained from the mtDNA of the parasites matched the phylogenetic tree of the bird hosts poorly. For example, the two tit species and the willow warbler (Phylloscopus trochilus) carried parasites differing by only 0.6%sequence divergence, suggesting that Haemoproteus shift both between species within the same genus and also between species in different families. Hence, host shifts seem to have occurred repeatedly in this parasite-host system. We discuss this in terms of the possible evolutionary consequences for these bird species.

Chronic malaria shortens telomeres Chronic infections are assumed to cause little damage to the host, but is this true? Migrant birds can pick up various species of malaria parasite while overwintering in the tropics. After initial acute malaria, migrant great reed warblers, which nest in Sweden and overwinter in Africa, are asymptomatically infected for life. Asghar et al. discovered that these cryptically infected birds laid fewer eggs and were less successful at rearing healthy offspring than uninfected birds. Furthermore, infected birds had significantly shorter telomeres (the protective caps on the ends of chromosomes) and produced chicks with shortened telomeres. Science , this issue p. 436

Invasive species can displace natives, and thus identifying the traits that make aliens successful is crucial for predicting and preventing biodiversity loss. Pathogens may play an important role in the invasive process, facilitating colonization of their hosts in new continents and islands. According to the Novel Weapon Hypothesis, colonizers may out-compete local native species by bringing with them novel pathogens to which native species are not adapted. In contrast, the Enemy Release Hypothesis suggests that flourishing colonizers are successful because they have left their pathogens behind. To assess the role of avian malaria and related haemosporidian parasites in the global spread of a common invasive bird, we examined the prevalence and genetic diversity of haemosporidian parasites (order Haemosporida, genera Plasmodium and Haemoproteus) infecting house sparrows (Passer domesticus). We sampled house sparrows (N = 1820) from 58 locations on 6 continents. All the samples were tested using PCR-based methods; blood films from the PCR-positive birds were examined microscopically to identify parasite species. The results show that haemosporidian parasites in the house sparrows' native range are replaced by species from local host-generalist parasite fauna in the alien environments of North and South America. Furthermore, sparrows in colonized regions displayed a lower diversity and prevalence of parasite infections. Because the house sparrow lost its native parasites when colonizing the American continents, the release from these natural enemies may have facilitated its invasion in the last two centuries. Our findings therefore reject the Novel Weapon Hypothesis and are concordant with the Enemy Release Hypothesis.

ABSTRACT How the avian sex chromosomes first evolved from autosomes remains elusive as 100 million years (Myr) of divergence and degeneration obscure their evolutionary history. Sylvioidea songbirds is an emerging model for understanding avian sex chromosome evolution because a unique chromosome fusion event ∼24 Myr ago has formed enlarged “neo-sex chromosomes” consisting of an added (new) and an ancestral (old) part. Here, we report the female genome (ZW) of one Sylvioidea species, the great reed warbler ( Acrocephalus arundinaceus ). We confirm that the added region has been translocated to both Z and W, and show that the added-W part has been heavily reorganised within itself and with the ancestral-W. Next, we show that recombination between Z and W continued after the fusion event, and that recombination suppression took ∼10 Myr to be completed and arose locally and non-linearly along the sex chromosomes. This pattern is inconsistent with that of large inversions and instead suggests gradual and mosaic recombination suppression. We find that the added-W mirrors the ancestral-W in terms of repeat accumulation, loss of genetic variation, and gene degeneration. Lastly, we show that genes being maintained on W are slowly evolving and dosage sensitive, and that highly conserved genes across broad taxonomic groups, regardless of sex-linkage, evolve slower on both Z and W. This study reveals complex expansion of recombination suppression along avian sex chromosomes, and that the evolutionary trajectory of sex-linked genes is highly predictable and governed partly by sex-linkage per se , partly by their functional properties.

Small population sizes can, over time, put species at risk due to the loss of genetic variation and the deleterious effects of inbreeding. Losing diversity in the major histocompatibility complex (MHC) could be particularly harmful, given its key role in the immune system. Here, we assess MHC class I (MHC-I) diversity and its effects on mate choice and survival in the Critically Endangered Raso lark Alauda razae , a species restricted to the 7 km2 islet of Raso (Cape Verde) since ~1460, whose population size has dropped as low as 20 pairs. Exhaustively genotyping 122 individuals, we find no effect of MHC-I genotype/diversity on mate choice or survival. However, we demonstrate that MHC-I diversity has been maintained through extreme bottlenecks by retention of a high number of gene copies (at least 14), aided by co-segregation of multiple haplotypes comprising 2−8 linked MHC-I loci. Within-locus homozygosity is high, contributing to comparably low population-wide diversity. Conversely, each individual had comparably many alleles, 6−16 (average 11), and the large and divergent haplotypes occur at high frequency in the population, resulting in high within-individual MHC-I diversity. This functional immune gene diversity will be of critical importance for this highly threatened species' adaptive potential.

Major histocompatibility complex (MHC) genes play a central role for pathogen recognition by the adaptive immune system. The MHC genes are often duplicated and tightly linked within a small genomic region. This structural organization suggests that natural selection acts on the combined property of multiple MHC gene copies in segregating haplotypes, rather than on single MHC genes. This may have important implications for analyses of patterns of selection on MHC genes. Here, we present a computer-assisted protocol to infer segregating MHC haplotypes from family data, based on functions in the R package MHCtools. We employed this method to identify 107 unique MHC class I (MHC-I) haplotypes in 116 families of wild great reed warblers (Acrocephalus arundinaceus). In our data, the MHC-I genes were tightly linked in haplotypes and inherited as single units, with only two observed recombination events among 334 offspring. We found substantial variation in the number of different MHC-I alleles per haplotype, and the divergence between alleles in MHC-I haplotypes was significantly higher than between randomly assigned alleles in simulated haplotypes. This suggests that selection has favored non-random associations of divergent MHC-I alleles in haplotypes to increase the range of pathogens that can be recognized by the adaptive immune system. Further studies of selection on MHC haplotypes in natural populations is an interesting avenue for future research. Moreover, inference and analysis of MHC haplotypes offers important insights into the structural organization of MHC genes, and may improve the accuracy of the MHC region in de novo genome assemblies.

Abstract Long-distance migratory animals such as birds and bats have evolved to withstand selection imposed by pathogens across the globe, and pathogen richness is known to be particularly high in tropical regions. Immune genes, so-called Major Histocompatibility Complex (MHC) genes, are highly duplicated in songbirds compared to other vertebrates, and this high MHC diversity has been hypothesised to result in a unique adaptive immunity. To understand the rationale behind the evolution of the high MHC genetic diversity in songbirds, we determined the structural properties of an MHC class I protein, Acar3, from a long-distance migratory songbird, the great reed warbler Acrocephalus arundinaceus (in short: Acar ). The structure of Acar3 was studied in complex with pathogen-derived antigens and shows an overall antigen presentation similar to human MHC class I. However, the peptides bound to Acar3 display an unusual conformation: Whereas the N-terminal ends of the peptides display enhanced flexibility, the conformation of their C-terminal halves is rather static. This uncommon peptide-binding mode in Acar3 is facilitated by a central Arg residue within the peptide-binding groove that fixes the backbone of the peptide at its central position, and potentially permits successful interactions between MHC class I and innate immune receptors. Our study highlights the importance of investigating the immune system of wild animals, such as birds and bats, to uncover unique immune mechanisms which may neither exist in humans nor in model organisms.

Abstract Major Histocompatibility Complex (MHC) polymorphism is maintained by balancing selection through host-pathogen interactions and mate choice. MHC-based mate choice has been proposed across a wide range of vertebrates. However, the likelihood of its existence in songbirds has been questioned because of their poorly developed olfactory sense, which is a trait considered crucial in pre-copulatory mate choice to determine both own MHC and the MHC of putative partners. In this study, we show that female reed warblers, Acrocephalus scirpaceus , with extra-pair young in their nests have a lower MHC class I (MHC-I) dissimilarity with their social mate than females without extra-pair young in their nests. We also show that the MHC-I dissimilarity of successfully siring extra-pair males is not different from that of either the other males with territories surrounding the social nest ( i.e. putative extra-pair males) or the pairs without extra-pair young in their nests. Taken together with the observation that extra-pair mating in reed warblers is common, we argue that these results support a scenario where extra-pair mating is more likely to lead to successful fertilisation when there is a high similarity in MHC-I between the female and her social male. Furthermore, as our data suggest that extra-pair mating at random can result in a higher MHC-I dissimilarity this scenario does not require any active female mate choice for MHC-I dissimilar males to drive this pattern.