Detection of chemical cues via chemosensory receptor proteins are essential for most animals, and underlies critical behaviors, including location and discrimination of food resources, identification of sexual partners and avoidance of predators. The current knowledge of how chemical cues are detected is based primarily on data acquired from studies on insects, while our understanding of the molecular basis for chemoreception in acari, mites in particular, remains limited. The poultry red mite (PRM), Dermanyssus gallinae, is one of the most important blood-feeding ectoparasites of poultry. Unlike other ectoparasites on animals, PRM feeds mainly at night. During daytime, these animals hide themselves in crevices around the poultry house. The diversity in habitat usage, as well as the demonstrated host finding and avoidance behaviors suggest that PRM relies on their sense of smell to orchestrate complex behavioral decisions. Comparative transcriptome analyses revealed the presence of candidate variant ionotropic receptors (IRs), odorant binding proteins (OBPs), niemann-pick proteins type C2 (NPC2) and sensory neuron membrane proteins (SNMPs). Some of these proteins were highly and differentially expressed in the forelegs of PRM. Rhodopsin-like G protein-coupled receptors (GPCRs) were also identified, while insect-specific odorant receptors (ORs) and odorant co-receptors (ORcos) were not detected. Furthermore, using scanning electron microscopy (SEM), the tarsomeres of all legs pairs were shown to be equipped with sensilla chaetica with or without tip pores, while wall-pored olfactory sensilla chaetica were restricted to the distal-most tarsomeres of the forelegs. Further, using the conserved odorant binding protein (OBP) as a test case, the results showed that RNA interference (RNAi) can be induced in D. gallinae chemosensory tissues. This study is the first to describe the presence of chemosensory genes in any Dermanyssidae family. It is also the first report of chemosensory gene knockdown by RNAi in any mite species and demonstrate that their diminutive size, less than 1 mm, is not a major impediment when applying gene knockdown approaches. Our findings make a significant step forward in understanding the chemosensory abilities of D. gallinae.### Competing Interest StatementThe authors have declared no competing interest.

Insect phenoloxidase, presented as an inactive precursor prophenoloxidase (PPO) in hemolymph, catalyzes melanin formation, which is involved in wound healing, pathogen killing, reversible oxygen collection during insect respiration, and cuticle and eggshell formation. Mosquitoes possess 9 to 16 PPO members across different genera, a number that is more than that found in other dipteran insects. However, the reasons for the redundancy of these PPOs and whether they have distinct biochemical properties and physiological functions remain unclear. Phylogenetic analysis confirmed that Aedes aegypti PPO6 (Aea-PPO6) is an ortholog to PPOs in other insect species, classified as the classical insect type, while other Aea-PPOs are unique to Diptera, herein referred to as the dipteran type here. We characterized two Aea-PPO members, Aea-PPO6, the classical insect type, and Aea-PPO10, a dipteran type, which exhibit distinct substrate specificities. By resolving Aea-PPO6's crystal structure and creating a chimera protein (Aea-PPO6-cm) with Motif 1 (217GDGPDSVVR225) from Aea-PPO10, we identified the motif that determines PPO substrate specificity. In vivo, loss of Aea-PPO6 led to larval lethality, while Aea-PPO10 was involved in development, pigmentation, and immunity. Our results enhance the understanding of the functional diversification of mosquito PPOs.