Dendritic cell-derived exosomes (Dex) are small extracellular vesicles secreted by viable dendritic cells. In the two phase-I trials that we conducted using the first generation of Dex (IFN-γ-free) in end-stage cancer, we reported that Dex exerted natural killer (NK) cell effector functions in patients. A second generation of Dex (IFN-γ-Dex) was manufactured with the aim of boosting NK and T cell immune responses. We carried out a phase II clinical trial testing the clinical benefit of IFN-γ-Dex loaded with MHC class I- and class II-restricted cancer antigens as maintenance immunotherapy after induction chemotherapy in patients bearing inoperable non-small cell lung cancer (NSCLC) without tumor progression. The primary endpoint was to observe at least 50% of patients with progression-free survival (PFS) at 4 mo after chemotherapy cessation. Twenty-two patients received IFN-γ-Dex. One patient exhibited a grade three hepatotoxicity. The median time to progression was 2.2 mo and median overall survival (OS) was 15 mo. Seven patients (32%) experienced stabilization of >4 mo. The primary endpoint was not reached. An increase in NKp30-dependent NK cell functions were evidenced in a fraction of these NSCLC patients presenting with defective NKp30 expression. Importantly, MHC class II expression levels of the final IFN-γ-Dex product correlated with expression levels of the NKp30 ligand BAG6 on Dex, and with NKp30-dependent NK functions, the latter being associated with longer progression-free survival. This phase II trial confirmed the capacity of Dex to boost the NK cell arm of antitumor immunity in patients with advanced NSCLC.

Circulating tumour cells (CTCs) can provide information on patient prognosis and treatment efficacy. However, there is no universal method to detect CTC currently available. Here, we compared the performance of two CTC detection systems based on the expression of the EpCAM antigen (CellSearch assay) or on cell size (ISET assay). Circulating tumour cells were enumerated in 60 patients with metastatic carcinomas of breast, prostate and lung origins using CellSearch according to the manufacturer's protocol and ISET by studying cytomorphology and immunolabelling with anti-cytokeratin or lineage-specific antibodies. Concordant results were obtained in 55% (11 out of 20) of the patients with breast cancer, in 60% (12 out of 20) of the patients with prostate cancer and in only 20% (4 out of 20) of lung cancer patients. Our results highlight important discrepancies between the numbers of CTC enumerated by both techniques. These differences depend mostly on the tumour type. These results suggest that technologies limiting CTC capture to EpCAM-positive cells, may present important limitations, especially in patients with metastatic lung carcinoma.

Duchenne muscular dystrophy (DMD) has as standard pharmacological therapy with corticoisteroids (CS) that decrease inflammation and immune responses present in patients and animal models. CS have however limited efficacy and important and numerous side effects. Therefore, there is a need for new anti-inflammatory and pro-tolerogenic treatments that could replace or decrease doses of CS. We first assessed the status of immune system of dystrophin-deficient rats (Dmdmdx) that closely reproduce the phenotype of DMD patients. Dmdmdx rats showed increased leukocyte infiltration in skeletal and cardiac muscles, containing mostly macrophages but also T cells, and increased expression of several cytokines. Anti-CD45RC Monoclonal antibody (Mab) treatment induced immune tolerance in models of organ transplantation and GVHD (Graft Versus Host Disease). We observed that muscles and blood of DMD patients contained T CD4+ and CD8+ expressing high levels of CD45RChigh cells. Treatment of young Dmdmdx rats with anti-CD45RC MAb corrected skeletal muscle strength associated to a depletion of effectors CD45RChigh T cells with no obvious side-effects. Prednisolone treatment of Dmdmdx rats similarly increased skeletal muscle strength and was also associated to a depletion of effectors CD45RChigh cells but resulted in severe weight loss. Overall, Dmdmdx rats display important immune inflammatory response and thus represent a useful model to analyze new anti-inflammatory and tolerogenic treatments for DMD. As an example, a new treatment with anti-CD45RC antibodies improved muscle strength in Dmdmdx rats as prednisolone did but without side effects. Anti-CD45RC therapy could complement other therapies in DMD patients.

Abstract Immune homeostasis requires fully functional Tregs with a stable phenotype to control autoimmunity. Although IL-34 is a cytokine first described as mainly involved in monocyte cell survival and differentiation, we recently described its expression by CD8+ Tregs in a rat model of transplantation tolerance and by activated FOXP3+ CD4+ and CD8+ Tregs in human healthy individuals. However, its role in autoimmunity and potential in human diseases remain to be determined. Here we report that the absence of expression of IL-34 in Il34 -/- rodents leads to an unstable phenotype, with production of multiple auto-antibodies, exacerbated under inflammatory conditions with increased susceptibility to DSS- and TNBS-colitis in deficient animals. Moreover, we strikingly revealed the inability of Il34 -/- CD4+ Tregs to protect Il2rg -/- rats from a wasting disease induced by transfer of pathogenic cells, in contrast to Il34 +/+ CD4+ Tregs. We also showed that IL-34 treatment delayed EAE in mice as well as GVHD and human skin allograft rejection in immune humanized immunodeficient NSG mice. Finally, we show that presence of IL-34 in the serum is associated with a longer rejection-free period in kidney transplanted patients. Altogether, our data emphasize on the crucial necessity of IL-34 for immune homeostasis and for CD4+ Tregs suppressive function. Our data also shows the therapeutic potential of IL-34 in human transplantation and auto-immunity.

Background:

 CD45RC is an isoform of CD45, a transmembrane tyrosine phosphatase, essential regulator of T and B cells antigen receptor signaling. CD45RC is expressed by most blood B cells while in T cells its high expression is restricted to Th1 precursor and Th1 cells, as well as TEMRA. We demonstrated that administration of an anti-CD45RC mAb in preclinical models of transplant rejection, graft versus host disease (GvHD), Duchene dystrophy or Autoimmune Polyendocrinopathy Candidiasis Ectodermal Dystrophy (APECED) leads to prevention or control of the disease. RA is a chronic relapsing/remitting disease characterized by synovitis, joint deformity, loss of function and increased mortality. While T-cells are a major component in the pathogenesis, B-cells are also pathogenic. 

Objectives:

 In this study, we deciphered the mechanism of action of the anti-human CD45RC mAb and assessed its effect in vitro and in vivo on human immune cell populations. We then assessed the potential of the anti-CD45RC mAb in an experimental model of rheumatoid arthritis. 

Methods:

 Cells were isolated from peripheral blood. Apoptosis, antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity (ADCC), antibody-Dependent Cellular Phagocytosis (ADCP) and Complement-Dependent Cytotoxicity (CDC) were assessed by Annexin V/DAPI staining. In vivo studies were performed in CD34+ immune-humanized NSG mice, in a model of xenogeneic GVHD in human PBMC-reconstituted immunodeficient NSG mice or in a model of collagen-induced arthritis (CIA) in rat. 

Results:

 We demonstrated that the humanized anti-human CD45RC mAb induced CD45RC^high T and B cell death mainly by direct apoptosis of CD45RC^high cells expressing around 105 molecules per µm2 of membrane, inducing signaling but not cytokine release. We demonstrated contribution of ADCC and ADCP-mediated death of CD45RC^high cells. Using in vivo studies in CD34+ immune-humanized NSG mice, we showed that a single iv administration of anti-CD45RC mAb induced an efficient killing of CD45RC^high T and B cells as soon as day 1, this effect was dose and time-dependent and targeted cells recovered by day 24. We also showed a dose dependent efficacy in a model of xenogeneic GVHD in human PBMC-reconstituted immunodeficient NSG mice. Treatment with an anti-rat CD45RC mAb in a rat model of CIA efficiently prevented weight loss, mean arthritis severity, maximum score and AUC,in contrast to the isotype control mAb. Anti-CD45RC mAb completely inhibited anti-collagen antibody production, inflammation of the paws and GM-CSF secretion in the sera in contrast to controls. Efficacy of the anti-CD45RC mAb correlated with depletion of CD45RC^high T and B cells by d3 (>94%) and until sacrifice with conserved Treg numbers. Analysis of RA patients showed in the blood presence of CD45RC^high cells and a strong infiltration by CD45RC^high cells of synovial tissues using IHC. Analysis of the potency of the anti-human CD45RC mAb demonstrated efficient apoptosis in vitro of CD45RC^high T and B from blood cells from RA patients and HC. 

Conclusion:

 Altogether our study demonstrates the mechanisms by which anti-human CD45RC mAb mediates CD45RC^high T and B cell death to control immune responses. Our study demonstrates that anti-CD45RC mAb treatment is a potent immunomodulatory agent rebalancing the Treg/teff ratio to reduce joint inflammation and disease activity in RA and a potential alternative for first line DMARD. This highly specific targeting of cells involved in transplant rejection and autoimmune diseases could substantially improve the management of patients across a wide range of affections. 

REFERENCES:

 [1] Besnard M. et al. Anti-CD45RC antibody immunotherapy prevents and treats experimental Autoimmune PolyEndocrinopathy Candidiasis Ectodermal Dystrophy syndrome. J Clin Invest. 2022. doi: 10.1172/JCI156507. [2] Boucault L. et al.. Transient Antibody Targeting of CD45RC Inhibits the Development of Graft-versus-Host Disease. Blood Advances. 2020. doi: 10.1182/bloodadvances.2020001688. [3] Picarda E. et al.. Transient antibody targeting of CD45RC induces transplant tolerance and potent antigen-specific regulatory T cells. JCI Insights. 2017 Feb 9;2(3):e90088. 

REFERENCES:

 NIL. 

Acknowledgements:

 NIL. 

Disclosure of Interests:

 Cecile Bergua: None declared, Marine Besnard: None declared, Ghenima Ahmil: None declared, Laure-Helene Ouisse: None declared, Nadege Vimond: None declared, Apolline Salama: None declared, Berangere Evrard: None declared, Elise Brisebard: None declared, Alexis Collette AbolerIS Pharma, Frederic Blanchard: None declared, Thibaut Larcher: None declared, Ronald Van Brempt AbolerIS Pharma, Benoit Le Goff: None declared, Ignacio Anegon AbolerIS Pharma, AbolerIS Pharma, Carole Guillonneau AbolerIS Pharma, AbolerIS Pharma, AbolerIS Pharma.