Dogs diagnosed with chronic enteropathy (CE) or small-cell lymphoma (SCL) exhibit marked differences in faecal microbiota and organic acid profiles compared with healthy dogs, as well as immune abnormalities in intestinal mucosal tissue. However, few studies have analysed trace organic acids, such as succinic acid, which have been suggested to be associated with IBD in humans. Therefore, in this study, we compared the faecal microbiota and organic acid profiles as well as serum inflammatory markers between dogs with disease (n = 11; 6 with CE and 5 with SCL) and healthy controls (n = 16). We also performed machine learning and correlation analysis to obtain more detailed insights into the characteristics of affected dogs. These results revealed that dogs with CE and SCL had lower levels of Erysipelotrichaceae (e.g. Turicibacter and Allobaculum), exhibited abnormalities in the succinic acid metabolism (i.e. succinic acid accumulation and decreased levels of Phascolarctobacterium as succinic acid-utilising bacteria) and increased levels of pathobiont bacteria such as Escherichia-Shigella. Additionally, the presence of Dubosiella was significantly negatively correlated with Canine Inflammatory Bowel Disease Activity Index scores. These findings are expected to aid the development of microbiome-based medications and/or supplements, although further verification is needed.

Background:

 Incidence of late-onset rheumatoid arthritis (LORA) has been increasing recently. Patients with LORA have unique clinical characteristics compared to those with young-onset RA (YORA), but the underlying immunological condition is not understood. It is essential to elucidate the pathogenesis to develop an optimal treatment strategy for LORA. 

Objectives:

 To elucidate the differences in clinical characteristics, cytokine profiles and immunological conditions between patients with LORA and YORA. 

Methods:

 Consecutive patients with newly diagnosed, untreated RA between 2015 and 2022 and healthy controls were recruited. We measured serum 64 cytokines and chemokines and 56 immune cell subsets in their peripheral blood. We divided patients into two groups according to the onset age of 65 years old and compared the clinical and immunological characteristics between patients with LORA and YORA. 

Results:

 We enrolled 46 patients with LORA (median age, 74 years), 60 patients with YORA (median age, 49 years), and 14 healthy controls. Patients with LORA had significantly lower proportion of positivity for rheumatoid factor (57 vs 80%, p=0.02) and anti-cyclic citrullinated peptide antibody (52 vs 78%, p=0.007), higher proportion of acute onset (41 vs 3%, p<0.001), and higher levels of median C-reactive protein (2.5 vs 0.5 mg/dL, p<0.001) compared to those with YORA. We identified 16 cytokines or chemokines that significantly overexpressed in patients with LORA (p<0.05, Figure 1), and among them, interleukin (IL)-1 receptor antagonist, IL-6, IL-8, IL-15, vascular endothelial growth factor-A, tumor necrosis factor receptor (TNFR)-1, and TNFR-2 were significantly positively correlated with disease activity score for 28 joints-erythrocyte sedimentation rate (DAS28-ESR) in patients with LORA (p=0.01, p<0.001, p=0.005, p=0.02, p<0.001, respectively). Immunophenotyping revealed the number of naïve CD4 cells, naïve CD8 cells, IgD+ memory B cells, and transitional B cells were significantly lower in patients with LORA than those with YORA (p=0.005, p<0.001, p=0.006, and p=0.003, respectively). Number of B cell lineages including CD19+ B cells, naïve B cells, memory B cells, and transitional B cells were significantly inversely correlated with DAS28-ESR (p=0.03, p=0.01, p=0.03, and p=0.02, respectively) (Figure 1). 

Conclusion:

 LORA has distinct unique cytokine and immune cell profiles from YORA, which had close association with disease activity. Overexpression of inflammatory cytokines and immunosenescence, especially decrease in B cell lineages, may be associated with its unique clinical characteristics. 

REFERENCES:

 NIL. 

Acknowledgements:

 NIL. 

Disclosure of Interests:

 Satoshi Takanashi: None declared, Noriyasu Seki Employee of Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Hideto Tsujimoto Employee of Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Kenji Chiba Employee of Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Yuko Kaneko: None declared.

Exosomes are small extracellular vesicles released from almost all cell types, which play roles in cell-cell communication. Recent studies have suggested that microenvironmental crosstalk mediated by exosomes is an important factor in the escape of tumour cells from the anti-tumour immune system in human haematopoietic malignancies. Here, we conducted comprehensive analysis of the miRNA and protein profiles within the exosomes released from four canine lymphoid tumour cell lines as a model of human lymphoid tumours. The results showed that the miRNAs and proteins abundantly contained in exosomes were similar among the four cell lines. However, the profiles of miRNA within exosomes differed among the cell lines and reflected the expression pattern of miRNAs of the parent cells. In the comparison of the amounts of miRNAs and proteins among the cell lines, those of three miRNAs (miR-151, miR-8908a-3p, and miR-486) and CD82 protein differed between exosomes derived from vincristine-sensitive and resistant cell lines. Further investigations are needed to elucidate the biological functions of the exosomal contents in the microenvironmental crosstalk of lymphoid tumours.

Non-neoplastic bone marrow disorders are main causes of non-regenerative anemia in dogs. Despite the high incidence of the diseases, their molecular pathophysiology has not been elucidated. We previously reported that Miniature Dachshund (MD) was a predisposed breed to be diagnosed with non-neoplastic bone marrow disorders in Japan, and immunosuppressive treatment-resistant MDs showed higher number of platelets and morphological abnormalities in peripheral blood cells. These data implied that treatment-resistant MDs might possess distinct pathophysiological features from treatment-responsive MDs. Therefore, we conducted transcriptomic analysis of bone marrow specimens to investigate the pathophysiology of treatment-resistant MDs. Transcriptomic analysis comparing treatment-resistant MDs and healthy control dogs identified 179 differentially expressed genes (DEGs). Pathway analysis using these DEGs showed that "Wnt signaling pathway" was a significantly enriched pathway. We further examined the expression levels of DEGs associated with Wnt signaling pathway and confirmed the upregulation of AXIN2 and CCND2 and the downregulation of SFRP2 in treatment-resistant MDs compared with treatment-responsive MDs and healthy control dogs. This alteration implied the activation of Wnt signaling pathway in treatment-resistant MDs. The activation of Wnt signaling pathway has been reported in human patients with myelodysplastic syndrome (MDS), which is characterized by dysplastic features of blood cells. Therefore, the results of this study implied that treatment-resistant MDs have distinct molecular pathological features from treatment-responsive MDs and the pathophysiology of treatment-resistant MDs might be similar to that of human MDS patients.

Background:

 Achievement of deep remission (DR), defined as a urine protein creatinine ratio (UPCR) ≤0.15 g/gCr with stabilisation of serum creatinine levels, within 12 months after induction therapy is more favourable target than complete renal response (CR), defined as UPCR ≤0.5 g/gCr, to prevent renal flares and damage accrual in patients with active lupus nephritis [1]. However, immunological characteristics of this population have not been elucidated and need to be clarified. 

Objectives:

 To elucidate the characteristics of peripheral blood immune cells associated with DR in active lupus nephritis. 

Methods:

 We enrolled consecutive patients who underwent induction or re-induction therapies for active lupus nephritis and prospectively assessed peripheral blood immunophenotyping with flowcytometry before and 12 months after starting induction therapies. We compared subpopulations of immunophenotyping between patients with DR, those with CR, and those with non-CR. 

Results:

 Fifty two patients were included in the analysis. Median age was 39 years, and 45 (86.5%) were female. Median disease duration was 4.5 years, and SLEDAI was 20. All patients were treated with prednisolone with the median starting dose of 50 mg/day, and 51 (96.2%) patients used immunosuppressants concomitantly. Based on UPCR at 12 months, 28 (54%), 16 (31%), and 8 (15%) were categorised as DR, CR, and non-CR, respectively. Baseline clinical characteristics except for age and disease duration were not different between the DR, CR and non-CR groups. Before induction therapy, the DR group had significantly higher proportions of HLA-DR⁺CD8⁺T cells, NKT-like cells, CD19⁺ B cells, plasmacytoid dendritic cells and CD16⁺ monocytes (p=0.036, p=0.037, p=0.017, p=0.010, p=0.048, respectively) and had lower proportions of Tfh, CD16^- monocytes and basophils compared to the CR group (p=0.021, p=0.038 and p=0.022, respectively) (Figure 1). The DR group also had higher proportions of HLA-DR⁺ CD8⁺ T cells and CD19⁺ B cells and had lower proportions of basophils compared to the non-CR group (p=0.014, p=0.004 and p=0.035, respectively). Only in the DR group, the proportions of plasmablasts, plasma cells and CD16⁺ monocytes significantly decreased (p=0.005, p=0.002 and p=0.049, respectively), and those of CD8⁺ T cells, NKT-like cells, CD16^- monocytes and basophils increased (p=0.002, p<0.001, p=0.027 and p<0.001, respectively) after induction therapy. At 12 months of treatment, the DR group had lower proportions of Th17, Tfh and plasma cells and higher proportions of NKT-like cells than the CR group. (p=0.041, p=0.005, p=0.012 and p=0.014, respectively). 

Conclusion:

 Achievement of DR within 12 months after induction therapies in patients with lupus nephritis is characterised by a multifactorial involvement of peripheral immune cells, including higher proportions of CD19⁺ B cells and CD16⁺ monocytes before treatment, persistently lower proportions of Tfh and persistently higher proportions of NKT-like cells, and a decrease in plasma cells and an increases in basophils after treatment. 

REFERENCES:

 [1] Kikuchi J, Hanaoka H, Saito S, Oshige T, Hiramoto K, Takeuchi T, Kaneko Y. Deep remission within 12 months prevents renal flare and damage accrual in lupus nephritis. Clin Exp Rheumatol. 2023 Jul;41(7):1500-1506. 

Acknowledgements:

 NIL. 

Disclosure of Interests:

 Jun Kikuchi: None declared, Hironari Hanaoka: None declared, Shuntaro Saito: None declared, Kazuoto Hiramoto: None declared, Noriyasu Seki Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Hideto Tsujimoto Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Tsutomu Takeuchi: None declared, Yuko Kaneko: None declared.