Purpose To develop a classification and grading system for myopic maculopathy. Design Development and evaluation of a classification system for myopic maculopathy based on observational case series. Methods A comprehensive set of myopic macular lesions was defined via literature review and through consensus meetings among retinal specialists and clinician scientists. A classification of myopic maculopathy was formulated based on fundus photographs and a modified Delphi process and consensus. Inter- and intraobserver reproducibility, assessed as agreement (%) and weighted kappa values, were evaluated. One hundred retinal photographs with myopia and myopic macular lesions were selected from case series at the High Myopia Clinic of the Tokyo Medical and Dental University, Tokyo, Japan. Results We defined 5 categories of myopic maculopathy including “no myopic retinal degenerative lesion” (Category 0), “tessellated fundus” (Category 1), “diffuse chorioretinal atrophy” (Category 2), “patchy chorioretinal atrophy” (Category 3), and “macular atrophy” (Category 4). Three additional features to supplement these categories were defined as “plus” lesions, namely, lacquer cracks, myopic choroidal neovascularization, and Fuchs spot. Posterior staphyloma was considered as a further, important sign of myopic retinopathy. The intraobserver agreement was ≥85% and the corresponding weighted kappa statistic was ≥0.6 between observations. After a brief training session, interobserver kappa statistics reached the predefined satisfactory level (≥0.4), considered as above moderate agreement. Conclusions We propose a classification system for myopic maculopathy that was found to be reproducible. Applying a uniform classification in different studies will facilitate communication and comparison of findings from clinical trials and epidemiologic studies. To develop a classification and grading system for myopic maculopathy. Development and evaluation of a classification system for myopic maculopathy based on observational case series. A comprehensive set of myopic macular lesions was defined via literature review and through consensus meetings among retinal specialists and clinician scientists. A classification of myopic maculopathy was formulated based on fundus photographs and a modified Delphi process and consensus. Inter- and intraobserver reproducibility, assessed as agreement (%) and weighted kappa values, were evaluated. One hundred retinal photographs with myopia and myopic macular lesions were selected from case series at the High Myopia Clinic of the Tokyo Medical and Dental University, Tokyo, Japan. We defined 5 categories of myopic maculopathy including “no myopic retinal degenerative lesion” (Category 0), “tessellated fundus” (Category 1), “diffuse chorioretinal atrophy” (Category 2), “patchy chorioretinal atrophy” (Category 3), and “macular atrophy” (Category 4). Three additional features to supplement these categories were defined as “plus” lesions, namely, lacquer cracks, myopic choroidal neovascularization, and Fuchs spot. Posterior staphyloma was considered as a further, important sign of myopic retinopathy. The intraobserver agreement was ≥85% and the corresponding weighted kappa statistic was ≥0.6 between observations. After a brief training session, interobserver kappa statistics reached the predefined satisfactory level (≥0.4), considered as above moderate agreement. We propose a classification system for myopic maculopathy that was found to be reproducible. Applying a uniform classification in different studies will facilitate communication and comparison of findings from clinical trials and epidemiologic studies.

Purpose To assess whether a low cerebrospinal fluid pressure (CSF-P) is associated with open-angle glaucoma in eyes with normal intraocular pressure (IOP). Design Prospective, interventional study. Participants The study included 43 patients with open-angle glaucoma (14 with a normal IOP, and 29 with an elevated IOP) and 71 subjects without glaucoma. Interventions All patients underwent standardized ophthalmologic and neurologic examinations and measurement of lumbar CSF-P. Main Outcome Measures Cerebrospinal fluid pressure and IOP. Results Lumbar CSF-P was significantly (P<0.001) lower in the normal IOP glaucoma group (9.5±2.2 mmHg) than in the high IOP glaucoma group (11.7±2.7 mmHg) or the control group (12.9±1.9 mmHg). The trans-lamina cribrosa pressure difference (IOP minus CSF-P) was significantly (P<0.001) higher in the normal IOP glaucoma group (6.6±3.6 mmHg) and the high-IOP glaucoma group (12.5±4.1 mmHg) than in the control group (1.4±1.7 mmHg). The extent of glaucomatous visual field loss was negatively correlated with the height of the CSF-P and positively correlated with the trans-lamina cribrosa pressure difference. In the control group, CSF-P was significantly correlated with both systolic blood pressure (P = 0.04) and IOP (P<0.001). The trans-lamina cribrosa pressure difference was not significantly associated with blood pressure (P = 0.97). Conclusions In open-angle glaucoma with normal IOP, CSF-P is abnormally low, leading to an abnormally high trans-lamina cribrosa pressure difference. Pathogenetically, a low CSF-P in normal-IOP glaucoma may be similar to a high IOP in high-IOP glaucoma. Consequently, the glaucomatous visual field defect is positively correlated with the trans-lamina cribrosa pressure difference and inversely correlated with the CSF-P. In nonglaucomatous subjects, CSF-P, blood pressure, and IOP are significantly associated with each other. Financial Disclosure(s) The authors have no proprietary or commercial interest in any of the materials discussed in this article. To assess whether a low cerebrospinal fluid pressure (CSF-P) is associated with open-angle glaucoma in eyes with normal intraocular pressure (IOP). Prospective, interventional study. The study included 43 patients with open-angle glaucoma (14 with a normal IOP, and 29 with an elevated IOP) and 71 subjects without glaucoma. All patients underwent standardized ophthalmologic and neurologic examinations and measurement of lumbar CSF-P. Cerebrospinal fluid pressure and IOP. Lumbar CSF-P was significantly (P<0.001) lower in the normal IOP glaucoma group (9.5±2.2 mmHg) than in the high IOP glaucoma group (11.7±2.7 mmHg) or the control group (12.9±1.9 mmHg). The trans-lamina cribrosa pressure difference (IOP minus CSF-P) was significantly (P<0.001) higher in the normal IOP glaucoma group (6.6±3.6 mmHg) and the high-IOP glaucoma group (12.5±4.1 mmHg) than in the control group (1.4±1.7 mmHg). The extent of glaucomatous visual field loss was negatively correlated with the height of the CSF-P and positively correlated with the trans-lamina cribrosa pressure difference. In the control group, CSF-P was significantly correlated with both systolic blood pressure (P = 0.04) and IOP (P<0.001). The trans-lamina cribrosa pressure difference was not significantly associated with blood pressure (P = 0.97). In open-angle glaucoma with normal IOP, CSF-P is abnormally low, leading to an abnormally high trans-lamina cribrosa pressure difference. Pathogenetically, a low CSF-P in normal-IOP glaucoma may be similar to a high IOP in high-IOP glaucoma. Consequently, the glaucomatous visual field defect is positively correlated with the trans-lamina cribrosa pressure difference and inversely correlated with the CSF-P. In nonglaucomatous subjects, CSF-P, blood pressure, and IOP are significantly associated with each other.

A deep learning system (DLS) that could automatically detect glaucomatous optic neuropathy (GON) with high sensitivity and specificity could expedite screening for GON.To establish a DLS for detection of GON using retinal fundus images and glaucoma diagnosis with convoluted neural networks (GD-CNN) that has the ability to be generalized across populations.In this cross-sectional study, a DLS for the classification of GON was developed for automated classification of GON using retinal fundus images obtained from the Chinese Glaucoma Study Alliance, the Handan Eye Study, and online databases. The researchers selected 241 032 images were selected as the training data set. The images were entered into the databases on June 9, 2009, obtained on July 11, 2018, and analyses were performed on December 15, 2018. The generalization of the DLS was tested in several validation data sets, which allowed assessment of the DLS in a clinical setting without exclusions, testing against variable image quality based on fundus photographs obtained from websites, evaluation in a population-based study that reflects a natural distribution of patients with glaucoma within the cohort and an additive data set that has a diverse ethnic distribution. An online learning system was established to transfer the trained and validated DLS to generalize the results with fundus images from new sources. To better understand the DLS decision-making process, a prediction visualization test was performed that identified regions of the fundus images utilized by the DLS for diagnosis.Use of a deep learning system.Area under the receiver operating characteristics curve (AUC), sensitivity and specificity for DLS with reference to professional graders.From a total of 274 413 fundus images initially obtained from CGSA, 269 601 images passed initial image quality review and were graded for GON. A total of 241 032 images (definite GON 29 865 [12.4%], probable GON 11 046 [4.6%], unlikely GON 200 121 [83%]) from 68 013 patients were selected using random sampling to train the GD-CNN model. Validation and evaluation of the GD-CNN model was assessed using the remaining 28 569 images from CGSA. The AUC of the GD-CNN model in primary local validation data sets was 0.996 (95% CI, 0.995-0.998), with sensitivity of 96.2% and specificity of 97.7%. The most common reason for both false-negative and false-positive grading by GD-CNN (51 of 119 [46.3%] and 191 of 588 [32.3%]) and manual grading (50 of 113 [44.2%] and 183 of 538 [34.0%]) was pathologic or high myopia.Application of GD-CNN to fundus images from different settings and varying image quality demonstrated a high sensitivity, specificity, and generalizability for detecting GON. These findings suggest that automated DLS could enhance current screening programs in a cost-effective and time-efficient manner.

Glaucoma is one of the leading causes of irreversible vision loss. Many approaches have recently been proposed for automatic glaucoma detection based on fundus images. However, none of the existing approaches can efficiently remove high redundancy in fundus images for glaucoma detection, which may reduce the reliability and accuracy of glaucoma detection. To avoid this disadvantage, this paper proposes an attention-based convolutional neural network (CNN) for glaucoma detection, called AG-CNN. Specifically, we first establish a large-scale attention-based glaucoma (LAG) database, which includes 11 760 fundus images labeled as either positive glaucoma (4878) or negative glaucoma (6882). Among the 11 760 fundus images, the attention maps of 5824 images are further obtained from ophthalmologists through a simulated eye-tracking experiment. Then, a new structure of AG-CNN is designed, including an attention prediction subnet, a pathological area localization subnet, and a glaucoma classification subnet. The attention maps are predicted in the attention prediction subnet to highlight the salient regions for glaucoma detection, under a weakly supervised training manner. In contrast to other attention-based CNN methods, the features are also visualized as the localized pathological area, which are further added in our AG-CNN structure to enhance the glaucoma detection performance. Finally, the experiment results from testing over our LAG database and another public glaucoma database show that the proposed AG-CNN approach significantly advances the state-of-the-art in glaucoma detection.

Abstract As a pathological hallmark in Parkinson’s disease (PD), α-synucleinopathy causes multiple cellular damages, including calcium overload, mitochondrial and autophagic dysfunction, and eventually dopamine neuron death. However, the hierarchy of these detrimental events is unclear. In Drosophila , we confirmed that overexpression of α-synuclein could induce all these cytotoxic events. To determine the specific cytotoxic events induced by calcium overload, we established a calcium overload model in Drosophila and performed genetic screens. We found that calcium overload caused mitochondrial damage and autophagy failure and cell death, and these cytotoxic processes could be strongly rescued by loss of Tousled-like kinase (TLK). Interestingly, loss of TLK also rescued defects induced by α-synuclein overexpression in Drosophila . This suggests that calcium overload acts as the crucial event upstream of mitochondrial and autophagy dysfunction. For TLK regulation of autophagy, our data indicated that a transcriptional factor REPTOR, which regulated the expression of several lysosomal genes, functioned downstream of TLK. In mammalian cells and mice, TLK2 (the homolog of Drosophila TLK) was phosphorylated under calcium overload. Upon phosphorylation, TLK2 increased its kinase activity. In addition, TLK2 could phosphorylate CREBRF (the human homolog of REPTOR) to cause its loss of transcription on the lysosomal genes. Moreover, TLK2 knockout mice rescued multi-aspect cytotoxicity induced by calcium overload and α-synuclein overexpression. Our research demonstrates that TLK2 acts as a key regulator to mediate cell death and dysfunctions of mitochondria and autophagy downstream of calcium overload.

Aims and objectivesDuring the new coronavirus disease 2019 (COVID-19) outbreak period, there was increasing presentation in the number of patients with acute primary angle closure (APAC). This study aimed to report the occurrence of APAC during the COVID-19 post-restriction period and investigate the related characteristics of these patients with APAC.MethodsThis retrospective, multi-center study included consecutive patients seeking APAC treatment at two eye centers in China from December 7, 2022 to January 13, 2023 (post-restriction period) and from December 7, 2021 to January 13, 2022 (control period). Electronic medical records were reviewed, and ocular data of the affected eye(s) were analyzed for patients with unilateral or bilateral APAC. Information including COVID-19 related symptoms, medications used for COVID-19 infection, and living habits and emotions related to the COVID-19 outbreak during the post restriction period were collected using a questionnaire.ResultsOverall, 189 (219 APAC eyes) and 51 (54 APAC eyes) patients with APAC were identified during the post-restriction and control periods, respectively. The patients identified during the post-restriction period were younger (P = 0.043) and had a longer duration from symptoms to treatment (P = 0.039), shorter axial length (P = 0.002), larger pupil diameter (P = 0.004), larger vertical cup disc ratio (P = 0.004), poorer mean deviation values (P = 0.003), and more glaucomatous optic neuropathy diagnoses (P = 0.032) compared with the patients with APAC identified during the control period. Among 151 included patients with APAC who completed the questionnaires, 130 patients with APAC were diagnosed with concurrent COVID-19 infection, of which 54 (41.5 %) had coughing and/or vomiting as the main symptoms. Of these, 89.2 % spent 0 h per day on outdoor activity; 44.6 % drank more water than usual, with 14.6 % drinking more than twice the amount of water than usual; 91.5 % used antipyretics; and 20.0 % had mood swings, including anxiety, depression, and tension, during the concurrent COVID-19 infection.ConclusionIn our study, a significant increase in the number of patients presenting with APAC with certain characteristics was observed during the COVID-19 post-restriction period. And whether COVID-19 symptoms, such as coughing and vomiting, and behavioral and psychological changes caused by COVID-19 infection contributing to the concurrence of APAC and COVID-19 recurrence require further investigation.

To the Editor: Glaucoma is a leading cause of irreversible blindness worldwide.[1] Trabeculectomy with mitomycin C (MMC) has been the standard surgical intervention for reducing intraocular pressure (IOP) and slow down the progression of glaucoma.[2] However, some serious complications with devastating consequences can occur after trabeculectomy, such as bleb-related infections, suprachoroidal hemorrhage, vitreous hemorrhage, and malignant glaucoma. Over the last decade, many novel ophthalmic surgical devices have been used in glaucoma. The XEN45 microstent (Allergan, Dublin, CA, USA) is a hydrophilic cross-linked porcine gelatin stent. It is implanted ab-interno, draining the aqueous humor into the subconjunctival space without the need to form a conjunctival flap, scleral flap, or iridectomy. Penetrating canaloplasty (PCP), first proposed by Liang et al[3], is a relatively new Schlemm's canal-based surgery. The procedure integrates the trabeculectomy procedures into canaloplasty, creating a direct communication between the anterior chamber and the ostia of Schlemm's canal to restore the internal drainage of aqueous humor. PCP restores the aqueous humor outflow in a bleb-independent manner and does not require MMC. The purpose of this study is to compare the surgical success and postoperative complications among XEN45 implantation, trabeculectomy with MMC, and PCP in Chinese patients with open-angle glaucoma over a 12-month period. This non-randomized comparison study was approved by the Ethics Committee of the Eye Hospital of Wenzhou Medical University (No. 2023-042-K-34) and was carried out in accordance with the tenets of the Declaration of Helsinki. Patients received glaucoma surgeries after being fully informed and signing an informed consent. Patients aged 18 years or older, demonstrating inadequately controlled open-angle glaucoma with an IOP of 18 mmHg or more on tolerated medical therapy, who underwent successful XEN45 implantation and trabeculectomy with MMC or PCP by a single experienced glaucoma surgeon (YBL) between May 1, 2019, and March 15, 2022, with a minimum follow-up of 12 months were included. Exclusion criteria included: (1) angle-closure glaucoma, exfoliation glaucoma, pigmentary glaucoma, or normal-tension glaucoma, (2) no light perception, (3) iris neovascularization, (4) signs of suprascleral venous hypertension (e.g., torturous and dilated suprascleral veins), (5) central corneal thickness ≤490 μm or ≥620 μm; (6) history of retinal surgery or corneal surgery (including laser-assisted in situ keratomileusis, laser subepithelial keratomileusis and photorefractive keratectomy), and (7) opacities, or disease/pathology of the cornea. Data including age, eye, gender, glaucoma diagnosis (primary open-angle glaucoma [POAG], juvenile glaucoma, or Posner–Schlossman syndrome [PSS]), prior glaucoma surgical therapy, and preoperative ocular characteristics were collected. Postoperative follow-up visits were scheduled at day 1, week 1, and at months 1, 3, 6, and 12. IOP, glaucoma medications, complications, need for postoperative interventions, slit-lamp photograph, and ultrasound biomicroscopy (UBM) image were collected at each postoperative time point. The conjunctiva of the target area was marked 3 mm from the limbus. Then, 0.1 mL of MMC (mitosol, 0.2–0.3 mg/mL) was injected into the subconjunctiva to enlarge the subconjunctival space. A preloaded injector was inserted through the main incision and the needle advanced through the sclera into the subconjunctival space. The subconjunctival XEN part was tested to ensure its mobility. Following a fornix-based conjunctival flap, a fluid-retaining sponge soaked in MMC (0.4 mg/mL) was applied to the superior sclera for 3–5 min. Balanced salt solution rinsing was then carried out. A 4.0 mm × 3.0 mm scleral flap was made. A 1.0 mm × 0.5 mm trabecular meshwork segment was excised, followed by peripheral iridectomy. Following a fornix-based conjunctival flap and a 4.0 mm × 3.0 mm superficial scleral flap, a 1.5 mm × 2.0 mm deep scleral flap was sculpted and removed. The external wall of the Schlemm's canal was opened and unroofed. A flexible microcatheter (iTrack by Ellex iScience, Inc., Fremont, CA, USA) was inserted into the Schlemm's canal and guided forward for 360° circumference. A 10-0 polypropylene suture was tied to the distal tip of the microcatheter, which was drawn through the Schlemm's canal as the microcatheter was withdrawn. A small amount of high-molecular-weight hyaluronic acid viscoelastic agent (Healon GV, Johnson&John Surgical Vision, Inc., Santa Ana, CA, USA) was injected into the Schlemm's canal. The suture was then tied with tension to inwardly indent the trabecular meshwork. A 1.0 mm × 0.5 mm trabecular meshwork segment anterior to the Schlemm's canal was excised, followed by peripheral iridectomy. Surgical success was defined as an IOP ≤21 mmHg and ≥5 mmHg without (complete success) or with/without (qualified success) glaucoma medications. Surgical failure was defined as an IOP >21 mmHg with maximum tolerated topical medication on two consecutive visits at 1 month, reoperation for glaucoma, or loss of light perception due to glaucoma progression or surgical-related complications. Postoperative interventions performed at the slit-lamp or suture wound were not considered as surgical failure. Statistical analysis can be seen in Supplementary Material, https://links.lww.com/CM9/B998. A total of 101 eyes of 78 patients were included in the study. Baseline characteristics of patients from three groups are presented in Supplementary Table 1, https://links.lww.com/CM9/B998. The patients in the XEN45 group (50.6 ± 16.1 years) and in the trabeculectomy group (56.7 ± 15.8 years) were significantly older than the patients in the PCP group (38.0 ± 11.5 years, F = 14.796, P <0.001). All groups produced a significant reduction in IOP [Supplementary Figure 1, https://links.lww.com/CM9/B998] and glaucoma medications postoperatively [Supplementary Table 2, https://links.lww.com/CM9/B998]. There was no significant difference in the mean IOP among the three groups at 12 months (F = 0.264, P = 0.769). The XEN group had significantly lower mean IOPs than the other two groups at all follow-up visits during the first postoperative month (all P <0.05). There was a higher failure rate in the XEN45 group than in the other groups during the 12 months of follow-up [Figure 1]. The Kaplan–Meier survival analysis showed that the cumulative probability of complete success rate and qualified success rate was 65.8% and 74.5% in the XEN45 group at one year. In all, four patients with four eyes (4/33, 12.1%) in the trabeculectomy group failed within 6 months postoperatively, yielding a one-year complete success rate of (25/33, 75.7%) and a qualified success rate of (29/33, 87.9%). Similarly, the PCP group had a one-year complete success rate of (27/36, 75.0%) and a qualified success rate of (32/36, 88.9%), with four patients (4/36, 11.1%) experiencing failure between 6 months and 12 months postoperatively. The postoperative complications and interventions are listed in Supplementary Table 3, https://links.lww.com/CM9/B998. During the first year of follow-up, 18 eyes (18/32, 56.3%) in the XEN45 group, 24 eyes (24/33, 72.7%) in the trabeculectomy group, and 24 eyes (24/36, 66.7%) in the PCP group experienced one or more postoperative complications. Transient IOP elevation (≥21 mmHg) at early follow-up visits was the most-common complication in the PCP (18/36, 50.0%) and the trabeculectomy groups (12/33, 36.4%). The most-common complication in the XEN45 group was shallow anterior chamber (8/32, 25.0%). Regarding postoperative interventions, 19 eyes (19/32, 59.4%) in the XEN45 group and 21 eyes (21/33, 63.6%) in the trabeculectomy group experienced one or more postoperative interventions, but no eye in the PCP group needed interventions. Bleb management procedures such as bleb needling, 5-fluorouracil injection, and bleb massage were the most-common postoperative interventions in the XEN45 and trabeculectomy groups.Figure 1: Kaplan–Meier curve for the (A) complete success and (B) qualified success of follow-up in the XEN45 group, trabeculectomy group and PCP group. PCP: Penetrating canaloplasty; Trab: Trabeculectomy.The current study on Chinese patients with open-angle glaucoma compared the surgical success rate of XEN45 implantation with MMC, trabeculectomy with MMC, and PCP. All surgical procedures effectively reduced IOP and glaucoma medications without significant difference at 12-months follow-up. However, the XEN45 group had lower IOPs than the other groups at all time points during the first postoperative month. The pressure differential across XEN45 is proportional to the resistance to flow. If there is no subconjunctival resistance, an IOP value of approximately 6 mmHg is theoretically possible.[4] Thus, the early postoperative IOP of XEN45 is low and fairly constant. As a result, shallow anterior chamber was the most-common complication, and hypotony was not observed in the XEN45 group in this study. In the current study, the outcomes showed that the complete and qualified successe rate of all the three interventions were similar in the first 9 months, wherein XEN45 decreased in the 9- to 12-month timeframe. Bleb management is very important for bleb-based procedures. Postoperative interventions were undertaken with similar frequency in the trabeculectomy and XEN45 groups in our study. However, an insufficient experience in bleb management for XEN45 implantation may decrease the success rate of the XEN45 group. In addition, the age of the patient can influence the success rate of external filtration surgery, leading to a lower success rate of XEN in younger patients in our study. As demonstrated in this study, the success rate of PCP is comparable to eyes that underwent trabeculectomy with MMC. The notable high complete success rate of PCP may be attributed to several factors. The surgery involves the enlargement of the Schlemm's canal and the creation of a direct fistula between the anterior chamber and the Schlemm's canal. This bypasses the main area of resistance in the damaged trabecular meshwork, facilitating the internal drainage of aqueous humor from the anterior chamber to the Schlemm's canal. As a bleb-independent surgery, PCP was free from postoperative intervention, and the majority of the eyes (81.3%–100%) displayed no observable subconjunctival bleb during the follow-up after PCP surgery.[3,5] This study was limited by its non-randomized nature and may have inherently created information and selection bias. However, the clinical data from this study represent real-world results. In contrast, the monocentric and comparative aspects of this study having three procedures performed by the same surgeon, as well as having a reasonably high sample size for a single-center study should be considered as an asset during the analysis of these results. This study would help to plan for prospective studies with larger sample sizes to investigate the long-term outcomes of XEN45 implantation, trabeculectomy, and PCP. In conclusion, XEN45 implantation, trabeculectomy, and PCP resulted in sufficiently low postoperative IOP values. Trabeculectomy and PCP showed comparable complete and qualified surgical success rate after 12 months and better outcomes than XEN45, although trabeculectomy was associated with more postoperative interventions. Acknowledgments We wish to thank Weihe Zhou for statistical consultation. Funding This study was supported by grants from the Program for Zhejiang Leading Talent of S&T Innovation (No. 2021R52012), the Key Research and Development Projects of Zhejiang Province (No. 2022C03112), and the Wenzhou Innovation Team. Conflicts of interest None.

ABSTRACT In this work, different injection modes (single injection, overlapping injection, and continuous injection) of countercurrent chromatography were used and compared for the isolation and purification of glabridin from the crude extract of Glycyrrhiza glabra . The two‐phase solvent system consisting of n ‐hexane/ethyl acetate/methanol/water (5:4:5:4, v/v) was employed as stationary and mobile phases. Compared with single injection mode, both overlapping injection and continuous injection modes exhibited higher separation efficiency at the same sample loading capacity. Their total separation times were 89.68% and 53.97% of the single injection mode, and the total solvent consumption were 74.88% and 52.49% of the single injection mode, respectively. Meanwhile, the yield, purity, and recovery rate of these three injection modes were almost the same. It was demonstrated that high‐speed countercurrent chromatography in continuous injection mode was the most effective way for separating glabridin in three methods and it can be further applied to the separation of other economically valuable natural products.