Abstract The global pandemic of Coronavirus disease 2019 (COVID-19) is a disaster for human society. A convenient and reliable in vitro neutralization assay is very important for the development of neutralizing antibodies, vaccines and other inhibitors. In this study, G protein-deficient vesicular stomatitis virus (VSVdG) bearing full-length and truncated spike (S) protein of SARS-CoV-2 were evaluated. The virus packaging efficiency of VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 (S with C-terminal 18 amino acid truncation) is much higher than VSV-SARS-CoV-2-S. A neutralization assay for antibody screening and serum neutralizing titer quantification was established based on VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 pseudovirus and human angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) overexpressed BHK21 cell (BHK21-hACE2). The experimental results can be obtained by automatically counting EGFP positive cell number at 12 hours after infection, making the assay convenient and high-throughput. The serum neutralizing titer of COVID-19 convalescent patients measured by VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 pseudovirus assay has a good correlation with live SARS-CoV-2 assay. Seven neutralizing monoclonal antibodies targeting receptor binding domain (RBD) of SARS-CoV-2-S were obtained. This efficient and reliable pseudovirus assay model could facilitate the development of new drugs and vaccines.

Abstract To identify drugs that are potentially used for the treatment of COVID-19, the potency of 1403 FDA-approved drugs were evaluated using a robust pseudovirus assay and the candidates were further confirmed by authentic SARS-CoV-2 assay. Four compounds, Clomiphene (citrate), Vortioxetine, Vortioxetine (hydrobromide) and Asenapine (hydrochloride), showed potent inhibitory effects in both pseudovirus and authentic virus assay. The combination of Clomiphene (citrate), Vortioxetine and Asenapine (hydrochloride) is much more potent than used alone, with IC50 of 0.34 μM.

Abstract Remarkable progress has been made in developing intramuscular vaccines against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2); however, they are limited with respect to eliciting local immunity in the respiratory tract, which is the primary infection site for SARS-CoV-2. To overcome the limitations of intramuscular vaccines, we constructed a nasal vaccine candidate based on an influenza vector by inserting a gene encoding the receptor-binding domain (RBD) of the spike protein of SARS-CoV-2, named CA4-dNS1-nCoV-RBD (dNS1-RBD). A preclinical study showed that in hamsters challenged 1 day and 7 days after single-dose vaccination or 6 months after booster vaccination, dNS1-RBD largely mitigated lung pathology, with no loss of body weight, caused by either the prototype-like strain or beta variant of SARS-CoV-2. Lasted data showed that the animals could be well protected against beta variant challenge 9 months after vaccination. Notably, the weight loss and lung pathological changes of hamsters could still be significantly reduced when the hamster was vaccinated 24 h after challenge. Moreover, such cellular immunity is relatively unimpaired for the most concerning SARS-CoV-2 variants. The protective immune mechanism of dNS1-RBD could be attributed to the innate immune response in the nasal epithelium, local RBD-specific T cell response in the lung, and RBD-specific IgA and IgG response. Thus, this study demonstrates that the intranasally delivered dNS1-RBD vaccine candidate may offer an important addition to fight against the ongoing COVID-19 pandemic, compensating limitations of current intramuscular vaccines, particularly at the start of an outbreak.

Abstract The ongoing COVID-19 pandemic, caused by SARS-CoV-2 infection, has resulted in hundreds of thousands of deaths. Cellular entry of SARS-CoV-2, which is mediated by the viral spike protein and host ACE2 receptor, is an essential target for the development of vaccines, therapeutic antibodies, and drugs. Using a mammalian cell expression system, we generated a recombinant fluorescent protein (Gamillus)-fused SARS-CoV-2 spike trimer (STG) to probe the viral entry process. In ACE2-expressing cells, we found that the STG probe has excellent performance in the live-cell visualization of receptor binding, cellular uptake, and intracellular trafficking of SARS-CoV-2 under virus-free conditions. The new system allows quantitative analyses of the inhibition potentials and detailed influence of COVID-19-convalescent human plasmas, neutralizing antibodies and compounds, providing a versatile tool for high-throughput screening and phenotypic characterization of SARS-CoV-2 entry inhibitors. This approach may also be adapted to develop a viral entry visualization system for other viruses.

Abstract The widespread SARS-CoV-2 in humans results in the continuous emergence of new variants. Recently emerged Omicron variant with multiple spike mutations sharply increases the risk of breakthrough infection or reinfection, highlighting the urgent need for new vaccines with broad-spectrum antigenic coverage. Using inter-lineage chimera and mutation patch strategies, we engineered a recombinant monomeric spike variant (STFK1628x), which showed high immunogenicity and mutually complementary antigenicity to its prototypic form (STFK). In hamsters, a bivalent vaccine comprised of STFK and STFK1628x elicited high titers of broad-spectrum antibodies to neutralize all 14 circulating SARS-CoV-2 variants, including Omicron; and fully protected vaccinees from intranasal SARS-CoV-2 challenges of either the ancestral strain or immune-evasive Beta variant. Strikingly, the vaccination of hamsters with the bivalent vaccine completely blocked the within-cage virus transmission to unvaccinated sentinels, for either the ancestral SARS-CoV-2 or Beta variant. Thus, our study provides new insights and antigen candidates for developing next-generation COVID-19 vaccines.

Abstract A safe and effective SARS-CoV-2 vaccine is essential to avert the on-going COVID-19 pandemic. Here, we developed a subunit vaccine, which is comprised of CHO-expressed spike ectodomain protein (StriFK) and nitrogen bisphosphonates-modified zinc-aluminum hybrid adjuvant (FH002C). This vaccine candidate rapidly elicited the robust humoral response, Th1/Th2 balanced helper CD4 T cell and CD8 T cell immune response in animal models. In mice, hamsters, and non-human primates, 2-shot and 3-shot immunization of StriFK-FH002C generated 28- to 38-fold and 47- to 269-fold higher neutralizing antibody titers than the human COVID-19 convalescent plasmas, respectively. More importantly, the StriFK-FH002C immunization conferred sterilizing immunity to prevent SARS-CoV-2 infection and transmission, which also protected animals from virus-induced weight loss, COVID-19-like symptoms, and pneumonia in hamsters. Vaccine-induced neutralizing and cell-based receptor-blocking antibody titers correlated well with protective efficacy in hamsters, suggesting vaccine-elicited protection is immune-associated. The StriFK-FH002C provided a promising SARS-CoV-2 vaccine candidate for further clinical evaluation.

The study focused on individuals with influenza-like symptoms (fever, cough, sore throat, runny nose, and other respiratory symptoms) in three kindergartens in Tongzhou District, Beijing City, in April 2023. Nasopharyngeal swab specimens were collected, and real-time fluorescent quantitative PCR was used to detect common respiratory pathogens in the collected specimens. Positive specimens were subjected to sequencing analysis of the highly variable region of human respiratory syncytial virus (HRSV) G protein, homology analysis and phylogenetic tree analysis. A total of 25 fever cases were collected from 3 kindergartens, aged 3-8 years old, with an age

Objective To investigate the impact of diaphragmatic breathing combined with limb training on lower limb lymphedema following surgery for gynecological cancer. Methods From January 2022 to May 2022, 60 patients with lower limb lymphedema post-gynecologic cancer surgery were chosen. They were split into a control group ( n = 30) and a treatment group ( n = 30). The control group underwent complex decongestive therapy (CDT) for managing lower limb lymphedema after gynecologic cancer surgery, while the treatment group received diaphragmatic breathing combined with limb coordination training alongside CDT. Both groups completed a 4-week treatment regimen. The lower limb lymphedema symptoms were evaluated using the genital, lower limb, buttock, and abdomen (GCLQ) scores; bilateral lower limb circumference measurements; and anxiety and depression scores. Results Compared to sole CDT administration, individuals undergoing diaphragmatic breathing coupled with limb coordination training experienced notable reductions in scores for the self-perceived symptom assessment questionnaire (GCLQ), bilateral lower limb circumference, as well as anxiety and depression scores. Conclusion The incorporation of diaphragmatic breathing combined withalongside limb coordination training can accelerate and augment the efficacy of treating lower limb lymphedema post-gynecologic cancer surgery.