Abstract Eliciting broadly neutralizing antibodies (bNAbs) against the four dengue virus serotypes (DENV1-4) that are spreading into new territories is an important goal of vaccine design. To delineate bNAb targets, we characterized 28 monoclonal antibodies belonging to expanded and hypermutated clonal families identified by transcriptomic analysis of single plasmablasts from DENV-infected individuals. Among these, we identified two somatically related bNAbs that potently neutralized DENV1-4. Mutagenesis studies revealed that the major recognition determinants of these bNAbs are in E protein domain I, distinct from the only known class of human bNAbs against flaviviruses with a well-defined epitope. B cell repertoire analysis from acute-phase peripheral blood suggested a memory origin and divergent somatic hypermutation pathways for these bNAbs, and a limited number of mutations was sufficient for neutralizing activity. Our study suggests multiple B cell evolutionary pathways leading to DENV bNAbs targeting a novel epitope that can be exploited for vaccine design.

Abstract Severe dengue (SD) is a major cause of morbidity and mortality impacting approximately 5 million of the 400 million people infected with dengue virus (DENV) annually. To define DENV target cells and immunological hallmarks of SD progression in children’s blood, we integrated virus-inclusive single cell RNA-Seq 2 (viscRNA-Seq 2) with functional assays. Beyond myeloid cells, in natural infection, B cells harbor replicating DENV capable of infecting permissive cells. Alterations in cell type abundance, gene and protein expression and secretion, and cell-cell communications point towards increased migration and inflammation in SD progressors (SDp). Concurrently, antigen presenting cells from SDp demonstrate intact uptake, yet impaired interferon responses and antigen presentation, in part DENV-modulated. Increased activation, regulation, and exhaustion of effector responses and expansion of HLA-DR-expressing, possibly compensatory, adaptive-like NK cells also characterize SDp. These findings reveal DENV target cells in the human blood and provide insight into SD pathogenesis beyond antibody-mediated enhancement.

Summary Approximately five million dengue virus-infected patients, particularly children, progress to a potentially life-threatening severe dengue (SD) infection annually. To identify the immune features and temporal dynamics underlying SD progression, we performed deep immune profiling by mass cytometry of PBMCs collected longitudinally from SD progressors (SDp) and uncomplicated dengue (D) patients. While D is characterized by early activation of innate immune responses, in SDp there is rapid expansion and activation of IgG-secreting plasma cells and memory and regulatory T cells. Concurrently, SDp, particularly children, demonstrate increased proinflammatory NK cells, inadequate expansion of CD16 + monocytes, and high expression of the FcγR, CD64 on myeloid cells, yet diminished antigen presentation. Syndrome-specific determinants include suppressed dendritic cell abundance in shock/hemorrhage vs. enriched plasma cell expansion in organ impairment. This study reveals uncoordinated immune responses in SDp and provides insights into SD pathogenesis in humans with potential implications for prediction and treatment.

Abstract Dengue virus (DENV) infection can result in severe complications. Yet, the understanding of the molecular correlates of severity is limited, partly due to difficulties in defining the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) that are associated with DENV in vivo. Additionally, there are currently no biomarkers predictive of progression to severe dengue (SD). Bulk transcriptomics data are difficult to interpret because blood consists of multiple cell types that may react differently to infection. Here we applied virus-inclusive single cell RNA-seq approach (viscRNA-Seq) to profile transcriptomes of thousands of single PBMCs derived early in the course of disease from six dengue patients and four healthy controls, and to characterize distinct DENV-associated leukocytes. Multiple genes, particularly interferon response genes, were upregulated in a cell-specific manner prior to progression to SD. Expression of MX2 in naive B cells and CD163 in CD14 + CD16 + monocytes was predictive of SD. The majority of DENV-associated cells in the blood of two patients who progressed to SD were naive IgM B cells expressing the CD69 and CXCR4 receptors and antiviral genes, followed by monocytes. Bystander uninfected B cells also demonstrated immune activation, and plasmablasts from two patients exhibited antibody lineages with convergently hypermutated heavy chain sequences. Lastly, assembly of the DENV genome revealed diversity at unexpected genomic sites. This study presents a multi-faceted molecular elucidation of natural dengue infection in humans and proposes biomarkers for prediction of SD, with implications for profiling any tissue and viral infection, and for the development of a dengue prognostic assay. Significance A fraction of the 400 million people infected with dengue annually progresses to severe dengue (SD). Yet, there are currently no biomarkers to effectively predict disease progression. We profiled the landscape of host transcripts and viral RNA in thousands of single blood cells from dengue patients prior to progressing to SD. We discovered cell-type specific immune activation and candidate predictive biomarkers. We also revealed preferential virus association with specific cell populations, particularly naive B cells and monocytes. We then explored immune activation of bystander cells, clonality and somatic evolution of adaptive immune repertoires, and viral genomics. This multi-faceted approach could advance understanding of pathogenesis of any viral infection, map an atlas of infected cells and promote the development of prognostics.

Abstract Objective Cartilaginous tumors of the larynx are rare, representing less than 1% of all laryngeal tumors. Chondromas are benign mesenchymal tumors characterized by a slow‐paced growth, primarily originated in the cricoid cartilage, followed by the thyroid, arytenoid, and epiglottic cartilages. This scoping review aims to understand the extent of evidence on the epidemiology, clinical characteristics, morbidity, and recurrence of the laryngeal chondroma (LC). Data sources MEDLINE (Ovid), Embase (Elsevier), Web of Science (Clarivate), Cochrane Central Register of Controlled Trials and Systematic Reviews, Lilacs, Scopus, and Google Scholar databases. Review methods The scoping review was conducted from 1816 to 2023, for observational studies describing LC. Titles and abstracts were screened for relevance, followed by an evaluation of the full text for eligibility. The data were collected from the qualifying articles, and a narrative summary of the outcomes was prepared. Results One hundred and nineteen studies met the inclusion criteria. Ninety‐four case reports, 22 case series, and 3 cohorts. Two hundred and four participants with a diagnosis of LC were described. Male:female ratio was 2.8:1. The most common localization was the cricoid (113; 47.08%), followed by the thyroid (45; 18.75%), and the arytenoid cartilage (27; 11.25%). Dyspnea (78.85%) and hoarseness (74.28%) were the most reported symptoms. The recurrence rate was 11.25%, and complications were uncommon following the resection. Conclusion This scoping review found a low‐frequency rate over all the cartilaginous laryngeal tumors. Most patients were treated with resection, with a low rate of malignancy conversion. This population has low attributable mortality, morbidity, and recurrence according to the current literature.

Sequential dengue virus (DENV) infections often generate neutralizing antibodies against all four DENV serotypes and sometimes, Zika virus. Characterizing cross-flavivirus broadly neutralizing antibody (bnAb) responses can inform countermeasure strategies that avoid infection enhancement associated with non-neutralizing antibodies. Here, we used single cell transcriptomics to mine the bnAb repertoire following secondary DENV infection. We identified several new bnAbs with comparable or superior breadth and potency to known bnAbs, and with distinct recognition determinants. Unlike all known flavivirus bnAbs, which are IgG1, one newly identified cross-flavivirus bnAb (F25.S02) was derived from IgA1. Both IgG1 and IgA1 versions of F25.S02 and known bnAbs displayed neutralizing activity, but only IgG1 enhanced infection in monocytes expressing IgG and IgA Fc receptors. Moreover, IgG-mediated enhancement of infection was inhibited by IgA1 versions of bnAbs. We demonstrate a role for IgA in flavivirus infection and immunity with implications for vaccine and therapeutic strategies.