Abstract Monkeypox virus (MPXV) is a zoonotic orthopoxvirus that causes smallpox-like symptoms in humans and caused an outbreak in May 2022 that led the WHO to declare global health emergency. In this study, from a screening of approved-drug libraries using an MPXV infection cell system, atovaquone, mefloquine, and molnupiravir exhibited anti-MPXV activity, with 50% inhibitory concentrations of 0.51-5.2 μM, which is more potent than cidofovir. Whereas mefloquine was suggested to inhibit viral entry, atovaquone and molnupiravir targeted post-entry process to impair intracellular virion accumulation. Inhibitors of dihydroorotate dehydrogenase, an atovaquone’s target enzyme, showed conserved anti-MPXV activities. Combining atovaquone with tecovirimat enhanced the anti-MPXV effect of tecovirimat. Quantitative mathematical simulations predicted that atovaquone can promote viral clearance in patients by seven days at clinically relevant drug concentrations. Moreover, atovaquone and molnupiravir exhibited pan- Orthopoxvirus activity against vaccinia and cowpox viruses. These data suggest that atovaquone would be potential candidates for treating monkeypox.

Abstract Living with COVID-19 requires continued vigilance against the spread and emergence of variants of concern (VOCs). Rapid and accurate saliva diagnostic testing, alongside basic public health responses, is a viable option contributing to effective transmission control. Nevertheless, our knowledge regarding the dynamics of SARS-CoV-2 infection in saliva is not as advanced as our understanding of the respiratory tract. Here we analyzed longitudinal viral load data of SARS-CoV-2 in saliva samples from 144 patients with mild COVID-19 (a combination of our collected data and published data). Using a mathematical model, we successfully stratified infection dynamics into three distinct groups with clear patterns of viral shedding: viral shedding durations in the three groups were 11.5 days (95% CI: 10.6 to 12.4), 17.4 days (16.6 to 18.2), and 30.0 days (28.1 to 31.8), respectively. Surprisingly, this stratified grouping remained unexplained despite our analysis of 47 types of clinical data, including basic demographic information, clinical symptoms, results of blood tests, and vital signs. Additionally, we quantified the expression levels of 92 micro-RNAs in a subset of saliva samples, but these also failed to explain the observed stratification, although the mir-1846 level may have been weakly correlated with peak viral load. Our study provides insights into SARS-CoV-2 infection dynamics in saliva, highlighting the challenges in predicting the duration of viral shedding without indicators that directly reflect an individual’s immune response, such as antibody induction. Given the significant individual heterogeneity in the kinetics of saliva viral shedding, identifying biomarker(s) for viral shedding patterns will be crucial for improving public health interventions in the era of living with COVID-19.

Abstract Monkeypox virus (MPXV) is a neglected zoonotic pathogen that caused a worldwide outbreak in May 2022. Given the lack of an established therapy, the development of an anti-MPXV strategy is of vital importance. To identify drug targets for the development of anti-MPXV agents, we screened a chemical library using an MPXV infection cell assay and found that gemcitabine, trifluridine, and mycophenolic acid (MPA) inhibited MPXV propagation. These compounds showed broad-spectrum anti-orthopoxvirus activities and presented lower 90% inhibitory concentrations (0.032-1.40 μM) than brincidofovir, an approved anti-smallpox agent. These three compounds have been suggested to target the post-entry step to reduce the intracellular production of virions. Knockdown of inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH), the rate-limiting enzyme of guanosine biosynthesis and a target of MPA, dramatically reduced MPXV DNA production. Moreover, supplementation with guanosine recovered the anti-MPXV effect of MPA, suggesting that IMPDH and its guanosine biosynthetic pathway regulate MPXV replication. By targeting IMPDH, we identified a series of compounds with stronger anti-MPXV activity than MPA. These evidences propose that IMPDH is a potential target for the development of anti-MPXV agents. Importance Monkeypox is a zoonotic disease caused by infection with the monkeypox virus, and a worldwide outbreak occurred in May 2022. The smallpox vaccine has recently been approved for clinical use against monkeypox in the United States. Although brincidofovir and tecovirimat are drugs approved for the treatment of smallpox by the U.S. Food and Drug Administration, their efficacy against monkeypox has not been established. Moreover, these drugs may present negative side effects. Therefore, new anti-monkeypox virus agents are needed. This study revealed that gemcitabine, trifluridine, and mycophenolic acid inhibited monkeypox virus propagation, exhibited broad-spectrum anti-orthopoxvirus activities. We also suggested inosine monophosphate dehydrogenase as a potential target for the development of anti-monkeypox virus agents. By targeting this molecule, we identified a series of compounds with stronger anti-monkeypox virus activity than mycophenolic acid.