The glucocorticoid and mineralocorticoid receptors (GR and MR, respectively) have distinct, yet overlapping physiological and pathophysiological functions. There are indications that both receptors interact functionally and physically, but the precise role of this interdependence is poorly understood. Here, we analyzed the impact of GR co-expression on MR genome-wide chromatin binding and transcriptional responses to aldosterone and glucocorticoids, both physiological ligands of this receptor. Our data show that GR co-expression alters MR genome-wide binding to consensus DNA sequences in a locus- and ligand-specific way. MR binding to consensus DNA sequences is affected by GR. Transcriptional responses of MR in the absence of GR are weak and show poor correlation with chromatin binding. In contrast, co-expression of GR potentiates MR-mediated transcription, particularly in response to aldosterone. Finally, single-molecule tracking of MR suggests that the presence of GR contributes to productive binding of MR/aldosterone complexes to chromatin. Together, our data indicate that co-expression of GR potentiates aldosterone-mediated MR transcriptional activity, even in the absence of glucocorticoids.

Small-cell lung cancer (SCLC) is the most fatal form of lung cancer. Intratumoral heterogeneity, marked by neuroendocrine (NE) and non-neuroendocrine (non-NE) cell states, defines SCLC, but the cell-extrinsic drivers of SCLC plasticity are poorly understood. To map the landscape of SCLC tumor microenvironment (TME), we apply spatially resolved transcriptomics and quantitative mass spectrometry-based proteomics to metastatic SCLC tumors obtained via rapid autopsy. The phenotype and overall composition of non-malignant cells in the TME exhibit substantial variability, closely mirroring the tumor phenotype, suggesting TME-driven reprogramming of NE cell states. We identify cancer-associated fibroblasts (CAFs) as a crucial element of SCLC TME heterogeneity, contributing to immune exclusion, and predicting exceptionally poor prognosis. Our work provides a comprehensive map of SCLC tumor and TME ecosystems, emphasizing their pivotal role in SCLC's adaptable nature, opening possibilities for reprogramming the TME-tumor communications that shape SCLC tumor states.

Abstract Small-cell lung cancer (SCLC) is the most fatal form of lung cancer. Intra-tumoral heterogeneity, marked by neuroendocrine (NE) and non-neuroendocrine (non-NE) cell states, defines SCLC, but the drivers of SCLC plasticity are poorly understood. To map the landscape of SCLC tumor microenvironment (TME), we applied spatially resolved transcriptomics and quantitative mass spectrometry-based proteomics to metastatic SCLC tumors obtained via rapid autopsy. The phenotype and overall composition of non-malignant cells in the tumor microenvironment (TME) exhibits substantial variability, closely mirroring the tumor phenotype, suggesting TME-driven reprogramming of NE cell states. We identify cancer-associated fibroblasts (CAF) as a crucial element of SCLC TME heterogeneity, contributing to immune exclusion, and predicting an exceptionally poor prognosis. Together, our work provides the first comprehensive map of SCLC tumor and TME ecosystems, emphasizing their pivotal role in SCLCs adaptable nature, opening possibilities for re-programming the intercellular communications that shape SCLC tumor states. Abstract Figure

Abstract DNA polymerase theta (Pol θ) is an error-prone translesion polymerase that becomes crucial for DNA double-strand break repair when cells are deficient in homologous recombination or non-homologous end joining. In some organisms, Pol θ also promotes tolerance of DNA interstrand crosslinks. Due to its importance in DNA damage tolerance, Pol θ is an emerging target for treatment of cancer and disease. Prior work has characterized the functions of the Pol θ helicase-like and polymerase domains, but the roles of the linker domain are largely unknown. Here, we show that the Drosophila melanogaster Pol θ linker domain promotes egg development and is required for tolerance of DNA double-strand breaks and interstrand crosslinks. While a linker domain with scrambled amino acid residues is sufficient for DNA repair, replacement of the linker with part of the Homo sapiens Pol θ linker or a disordered region from the FUS RNA-binding protein does not restore function. These results demonstrate that the linker domain is not simply a random tether between the helicase-like and polymerase domains. Furthermore, they suggest that intrinsic amino acid residue properties, rather than protein interaction motifs, are more critical for Pol θ linker functions in DNA repair.

Abstract Rif1 plays important roles in the repair of DNA double-strand breaks in multiple organisms. In mammals, RIF1 promotes non-homologous end joining and suppresses homologous recombination by interacting with 53BP1 to inhibit resection. In Saccharomyces cerevisiae , Rif1 directly binds DNA to inhibit resection and promote non-homologous end-joining. Yeast Rif1 can also facilitate long-range resection and promote single-strand annealing. Since it is not clear if Rif1 regulates resection-mediated pathway choice in other eukaryotes, we explored the role of Rif1 in double-strand break repair in Drosophila melanogaster . We found that rif1 mutants are not sensitive to ionizing radiation or hydroxyurea, demonstrating that it is not essential for the resolution of DNA damage in Drosophila. However, we show that rif1 null mutants are largely unable to repair a specific type of double-strand break that is induced upon the excision of a P-element transposon. Furthermore, assessment of repair pathway choice at I- Sce I-induced breaks revealed Rif1 suppresses homologous recombination and promotes single-strand annealing. Collectively, our findings illustrate Drosophila Rif1 shares functions with both its yeast and mammalian counterparts and serves a unique role in repairing P-element-induced double-strand breaks.