MF
Michael Ferguson
Author with expertise in Epidemiology and Treatment of Chagas Disease
Achievements
Cited Author
Open Access Advocate
Key Stats
Upvotes received:
0
Publications:
17
(71% Open Access)
Cited by:
1,579
h-index:
78
/
i10-index:
325
Reputation
Biology
< 1%
Chemistry
< 1%
Economics
< 1%
Show more
How is this calculated?
Publications
0

Glycosyl-Phosphatidylinositol Moiety That Anchors Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein to the Membrane

Michael Ferguson et al.Feb 12, 1988
T
R
S
M
Two forms of protein-membrane anchor have been described for the externally disposed glycoproteins of eukaryotic plasma membranes; namely, the hydrophobic transmembrane polypeptide and the complex glycosylphosphatidylinositol (G-PI) moiety. The chemical structures of the major species of G-PI anchors found on a single variant surface glycoprotein (VSG) of the parasitic protozoan Trypanosoma brucei were determined by a combination of nuclear magnetic resonance spectroscopy, mass spectrometry, chemical modification, and exoglycosidase digestions. The G-PI anchor was found to be heterogeneous with respect to monosaccharide sequence, and several novel glycosidic linkages were present. The results are pertinent to the mechanism of the biosynthesis of G-PI anchors.
0

Complete structure of the glycosyl phosphatidylinositol membrane anchor of rat brain Thy-1 glycoprotein

Steve Homans et al.May 1, 1988
+3
R
M
S
51

Aligning Model and Macaque Inferior Temporal Cortex Representations Improves Model-to-Human Behavioral Alignment and Adversarial Robustness

Joel Dapello et al.Jul 4, 2022
+4
M
K
J
Abstract While some state-of-the-art artificial neural network systems in computer vision are strikingly accurate models of the corresponding primate visual processing, there are still many discrepancies between these models and the behavior of primates on object recognition tasks. Many current models suffer from extreme sensitivity to adversarial attacks and often do not align well with the image-by-image behavioral error patterns observed in humans. Previous research has provided strong evidence that primate object recognition behavior can be very accurately predicted by neural population activity in the inferior temporal (IT) cortex, a brain area in the late stages of the visual processing hierarchy. Therefore, here we directly test whether making the late stage representations of models more similar to that of macaque IT produces new models that exhibit more robust, primate-like behavior. We conducted chronic, large-scale multi-electrode recordings across the IT cortex in six non-human primates (rhesus macaques). We then use these data to fine-tune (end-to-end) the model “IT” representations such that they are more aligned with the biological IT representations, while preserving accuracy on object recognition tasks. We generate a cohort of models with a range of IT similarity scores validated on held-out animals across two image sets with distinct statistics. Across a battery of optimization conditions, we observed a strong correlation between the models’ IT-likeness and alignment with human behavior, as well as an increase in its adversarial robustness. We further assessed the limitations of this approach and find that the improvements in behavioral alignment and adversarial robustness generalize across different image statistics, but not to object categories outside of those covered in our IT training set. Taken together, our results demonstrate that building models that are more aligned with the primate brain leads to more robust and human-like behavior, and call for larger neural data-sets to further augment these gains.
14

Defining Early Steps inB. subtilisBiofilm Biosynthesis

Christine Arbour et al.Feb 22, 2023
+6
H
R
C
The Bacillus subtilis extracellular biofilm matrix includes an exopolysaccharide that is critical for the architecture and function of the community. To date, our understanding of the biosynthetic machinery and the molecular composition of the exopolysaccharide of B. subtilis remains unclear and incomplete. This report presents synergistic biochemical and genetic studies built from a foundation of comparative sequence analyses targeted at elucidating the activities of the first two membrane-committed steps in the exopolysaccharide biosynthetic pathway. By taking this approach, we determined the nucleotide sugar donor and lipid-linked acceptor substrates for the first two enzymes in the B. subtilis biofilm exopolysaccharide biosynthetic pathway. EpsL catalyzes the first phosphoglycosyl transferase step using UDP-di- N -acetyl bacillosamine as phospho-sugar donor. EpsD is a GT-B fold glycosyl transferase that facilitates the second step in the pathway that utilizes the product of EpsL as an acceptor substrate and UDP- N -acetyl glucosamine as the sugar donor. Thus, the study defines the first two monosaccharides at the reducing end of the growing exopolysaccharide unit. In doing so we provide the first evidence of the presence of bacillosamine in an exopolysaccharide synthesized by a Gram-positive bacterium.Biofilms are the communal way of life that microbes adopt to increase survival. Key to our ability to systematically promote or ablate biofilm formation is a detailed understanding of the biofilm matrix macromolecules. Here we identify the first two essential steps in the Bacillus subtilis biofilm matrix exopolysaccharide synthesis pathway. Together our studies and approaches provide the foundation for the sequential characterization of the steps in exopolysaccharide biosynthesis, using prior steps to enable chemoenzymatic synthesis of the undecaprenol diphosphate-linked glycan substrates.
14
Citation2
0
Save
3

Proteomic identification of the UDP-GlcNAc : PI α1-6 GlcNAc-transferase subunits of the glycosylphosphatidylinositol biosynthetic pathway of Trypanosoma brucei

Zhe Ji et al.Dec 16, 2020
M
M
Z
Abstract The first step of glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchor biosynthesis in all eukaryotes is the addition of N-acetylglucosamine (GlcNAc) to phosphatidylinositol (PI) which is catalysed by a UDP-GlcNAc : PI α1-6 GlcNAc-transferase. This enzyme has been shown to be a complex of at least seven subunits in mammalian cells and a similar complex of homologous subunits has been postulated in yeast. Homologs of most of these mammalian and yeast subunits were identified in the Trypanosoma brucei predicted protein database. The putative catalytic subunit of the T. brucei complex, TbGPI3, was epitope tagged with three consecutive c-Myc sequences at its C-terminus. Immunoprecipitation of TbGPI3-3Myc followed by native polyacrylamide gel electrophoresis and anti-Myc Western blot showed that it is present in a ~240 kDa complex. Label-free quantitative proteomics were performed to compare anti-Myc pull-downs from lysates of TbGPI-3Myc expressing and wild type cell lines. TbGPI3-3Myc was the most highly enriched protein in the TbGPI3-3Myc lysate pull-down and partner proteins TbGPI15, TbGPI9, TbGPI2, TbGPI1 and TbERI1 were also identified with significant enrichment. Our proteomics data also suggest that an Arv1-like protein (TbArv1) is a subunit of the T. brucei complex. Yeast and mammalian Arv1 have been previously implicated in GPI biosynthesis, but here we present the first experimental evidence for physical association of Arv1 with GPI biosynthetic machinery. A putative E2-ligase has also been tentatively identified as part of the T. brucei UDP-GlcNAc : PI α1-6 GlcNAc-transferase complex. Graphical abstract First step of GPI anchor biosynthesis pathway in T.brucei BSF is catalysed by TbGPI3 complex.
3
Citation1
0
Save
0

A broadly active fucosyltransferase LmjFUT1 whose mitochondrial localization and catalytic activity is essential in the parasitic protozoan Leishmania

Hongjie Guo et al.May 10, 2021
+5
L
S
H
ABSTRACT Glycoconjugates play major roles in the infectious cycle of the trypanosomatid parasite Leishmania . While GDP-Fucose synthesis is essential (Guo et al 2017), fucosylated glycoconjugates have not been reported in Leishmania major . Four predicted fucosyltransferases appear conventionally targeted to the secretory pathway; SCA1/2 play a role in side-chain modifications of lipophosphoglycan, while gene deletion studies here showed that FUT2 and SCAL were not essential. Unlike most eukaryotic glycosyltransferases, the predicted α 1-2 fucosyltransferase encoded by FUT1 localized to the mitochondrion. A quantitative ‘plasmid segregation’ assay, expressing FUT1 from the multicopy episomal pXNG vector in a chromosomal null Δ fut1 - background, established that FUT1 is essential. Similarly “plasmid shuffling” confirmed that both enzymatic activity and mitochondrial localization were required for viability, comparing import-blocked or catalytically inactive enzymes respectively. Enzymatic assays of tagged proteins expressed in vivo or of purified recombinant FUT1 showed it had a broad fucosyltransferase activity including glycan and peptide substrates. Unexpectedly a single rare Δ fut1 - s segregant ( Δfut1 s ) was obtained in rich media, which showed severe growth defects accompanied by mitochondrial dysfunction and loss, all of which were restored upon FUT1 re-expression. Thus, FUT1 along with the similar Trypanosoma brucei enzyme TbFUT1 (Bandini et al 2021) joins the eukaryotic O-GlcNAc transferase isoform as one of the few glycosyltransferases acting within the mitochondrion. Trypanosomatid mitochondrial FUT1s may offer a facile system for probing mitochondrial glycosylation in a simple setting and their essentiality renders it an attractive target for chemotherapy of these serious human pathogens. Significance Statement Abundant surface glycoconjugates play key roles in the infectious cycle of protozoan parasites including Leishmania . Through defining biosynthetic pathways we identified a fucosyltransferase FUT1 that was localized to the parasite mitochondrion, an atypical compartment for glycosyltransferases. FUT1 was essential for normal growth, requiring both mitochondrial localization and enzymatic activity. Loss of FUT1 in a unique segregant showed extensive mitochondrial defects. Enzymatic tests showed FUT1 could fucosylate glycan and peptide substrates in vitro , although as yet the native substrate is unknown. Trypanosomatid mitochondrial FUT1s may offer a facile system in the future for probing mitochondrial glycosylation in a setting uncomplicated by multiple isoforms targeted to diverse compartments, and its essentiality renders it an attractive target for chemotherapy of these deadly parasites.
0
Citation1
0
Save
1

Identification of the glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase A2 (GPI-PLA2) of GPI fatty acid remodelling inTrypanosoma brucei

Zhe Ji et al.Apr 18, 2023
+2
S
R
Z
Abstract The biosynthesis of glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchored proteins (GPI-APs) in the parasitic protozoan Trypanosoma brucei involves fatty acid remodelling of the GPI precursor molecules before they are transferred to protein in the endoplasmic reticulum. The genes encoding the requisite phospholipase A2 and A1 activities for this remodelling have thus far been elusive. Here, we identify a gene, Tb927.7.6110, that encodes a protein that is necessary and sufficient for GPI-phospholipase A2 (GPI-PLA2) activity in the procyclic form of the parasite. The predicted protein product belongs to the alkaline ceramidase, PAQR receptor, Per1, SID-1, and TMEM8 (CREST) superfamily of transmembrane hydrolase proteins and shows sequence similarity to Post-GPI-Attachment to Protein 6 (PGAP6), a GPI-PLA2 that acts after transfer of GPI precursors to protein in mammalian cells. The trypanosome Tb927.7.6110 GPI-PLA2 gene resides in a locus with two closely related genes Tb927.7.6150 and Tb927.7.6170, one of which (Tb927.7.6150) most likely encodes a catalytically inactive protein. The absence of GPI-PLA2 in the null mutant procyclic cells not only affected fatty acid remodelling but also reduced GPI anchor sidechain size on mature GPI-anchored procyclin glycoproteins. This reduction in GPI anchor sidechain size was reversed upon the add back of Tb927.7.6110 and of Tb927.7.6170, despite the latter not encoding GPI precursor GPI-PLA2 activity.
1

Elimination of GPI2 suppresses glycosylphosphatidylinositol GlcNAc transferase activity and alters GPI glycan modification in Trypanosoma brucei

Aurelio Jenni et al.Mar 19, 2021
+6
R
S
A
Abstract The biosynthesis of glycosylphosphatidylinositol (GPI) membrane protein anchors is initiated in the endoplasmic reticulum by transfer of GlcNAc from the sugar nucleotide UDP-GlcNAc to phosphatidylinositol. The reaction is catalyzed by GPI GlcNAc transferase, a multi-subunit complex comprising the catalytic subunit Gpi3/PIG-A, as well as at least five other subunits including the hydrophobic protein Gpi2 which is essential for activity in yeast and mammals, but whose function is not known. Here we exploited Trypanosoma brucei (Tb), an early diverging eukaryote and important model organism, to investigate the function of Gpi2. We generated trypanosomes that lack TbGPI2 and found that in TbGPI2-null parasites (i) GPI GlcNAc transferase activity is reduced but not lost, in contrast with the situation in yeast and human cells, (ii) the GPI GlcNAc transferase complex persists, but its architecture is affected, with loss of at least the TbGPI1 subunit, and (iii) the GPI anchors of the major surface proteins are underglycosylated when compared with their wild-type counterparts, indicating the importance of TbGPI2 for reactions that are expected to occur in the Golgi apparatus. Additionally, TbGPI2-null parasites were unable to perform social motility, a form of collective migration on agarose plates. Immunofluorescence microscopy localized TbGPI2 to the endoplasmic reticulum as expected, but also to the Golgi apparatus, suggesting that in addition to its expected function as a subunit of the GPI GlcNAc transferase complex, TbGPI2 may have an enigmatic non-canonical role in Golgi-localized GPI anchor modification in trypanosomes.
1

A UDP-GlcNAc : βGal β1-6 GlcNAc transferase involved in bloodstream formN-glycan and procyclic form GPI anchor elaboration inTrypanosoma brucei

Sheila Duncan et al.Jun 23, 2021
+4
M
R
S
Abstract Trypanosoma brucei has large carbohydrate extensions on its N -linked glycans and glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchors in its bloodstream form (BSF) and procyclic form (PCF), respectively. The parasite’s glycoconjugate repertoire suggests at least 38 glycosyltransferase (GT) activities, 16 of which are unknown. Here, we probe the function(s) of a putative β3GT gene, TbGT10 . The BSF null mutant is viable in vitro and in vivo and can differentiate into PCF, demonstrating non-essentiality. However, the absence of TbGT10 led to impaired elaboration of N -glycans and GPI anchor sidechains in BSF and PCF parasites, respectively. Glycosylation defects include reduced BSF glycoprotein binding to ricin and to monoclonal antibodies mAb139 and mAbCB1. The latter bind a carbohydrate epitope of lysosomal glycoprotein p67 that we show here, using synthetic glycans, consists of (− 6 Galβ1-4GlcNAcβ1-) ≥ 4 poly- N -acetyllactosamine repeats. Methylation linkage analysis of Pronase glycopeptides isolated from BSF wild-type and TbGT10 null parasites show a reduction in 6- O -substituted- and 3,6-di- O -substituted-Gal residues. Together, these data suggest that TbGT10 encodes a UDP-GlcNAc : βGal β1-6 GlcNAc-transferase active in both BSF and PCF life-cycle stages elaborating complex N -glycans and GPI sidechains, respectively. The β1-6 specificity of this β3GT gene product and its dual roles in N -glycan and GPI glycan elaboration are notable.
Load More