Abstract Persons living with HIV (PLWH) have an increased risk for tuberculosis (TB). After prolonged and repeated exposure, some PLWH never develop TB and test persistently negative in tests of immune sensitization tuberculin skin test (TST) and interferon gamma release assays (IGRA) for Mycobacterium tuberculosis ( Mtb) . This group has been identified and defined as HIV+ persistently TB, tuberculin and IGRA negative (HITTIN). To investigate potential innate mechanisms unique to individuals with the HITTIN phenotype we compared their neutrophil Mtb infection response to that of PLWH, with no TB history, but who test persistently IGRA positive, and tuberculin positive (HIT). Neutrophil samples from 17 HITTIN (PMN HITTIN ) and 11 HIT (PMN HIT ) were isolated and infected with Mtb H37Rv for 1h and 6h. RNA was extracted and used for RNAseq analysis. At 1h of Mtb infection, PMN HITTIN displayed 151 significantly upregulated and 40 significantly downregulated differentially expressed genes (DEGs) and PMN HIT 98 significantly upregulated and 11 significantly downregulated DEGs. At the 6h timepoint, PMN HITTIN displayed 3106 significantly upregulated and 3548 significantly downregulated DEGs while PMN HIT had 3816 significantly up- and 3794 significantly downregulated DEGs. There was no significant differential transcriptional response at 1h between infected PMN HITTIN and PMN HIT. However, when contrasting the log 2 FC 6h infection response to Mtb from PMN HITTIN against PMN HIT , 2285 genes showed significant differential response between the two groups. Apoptosis and NETosis were key pathways linked to the enrichment of genes in PMN HITTIN when contrasted to PMN HIT after 6h infection with Mtb . Fluorescence microscopy revealed relatively lower neutrophil extracellular trap formation and cell loss in PMN HITTIN compared to PMN HIT , showing that PMN HITTIN have a distinct response to Mtb .

Abstract MicroRNA miR-181a is down-regulated in the kidneys of hypertensive patients and hypertensive mice. In vitro , miR-181a is a posttranslational inhibitor of renin expression, but pleiotropic mechanisms by which miR-181a may influence blood pressure (BP) are unknown. Here we determined whether deletion of miR-181a/b-1 in vivo changes BP and the molecular mechanisms involved at the single-cell level. We developed a knockout mouse model lacking miR-181a/b-1 genes using CRISPR/Cas9 technology. Radio-telemetry probes were implanted in twelve-week-old C57BL/6J wild-type and miR-181a/b-1 knockout mice. Systolic and diastolic BP were 4-5mmHg higher in knockout compared with wild-type mice over 24-hours ( P<0 . 01 ). Compared with wild-type mice, renal renin was higher in the juxtaglomerular cells of knockout mice. BP was similar in wild-type mice on a high (3.1%) versus low (0.3%) sodium diet (+0.4±0.8mmHg) but knockout mice showed salt sensitivity (+3.3±0.8mmHg, P<0 . 001 ). Since microRNAs can target several mRNAs simultaneously, we performed single-nuclei RNA-sequencing in 6,699 renal cells. We identified 12 distinct types of renal cells, all of which had genes that were dysregulated. This included genes involved in renal fibrosis and inflammation such as Stat4, Col4a1, Cd81, Flt3l, Cxcl16, Smad4 . We observed up-regulation of pathways related to the immune system, inflammatory response, reactive oxygen species and nerve development, consistent with higher tyrosine hydroxylase. In conclusion, downregulation of the miR-181a gene led to increased BP and salt sensitivity in mice. This is likely due to an increase in renin expression in juxtaglomerular cells, as well as microRNA-driven pleiotropic effects impacting renal pathways associated with hypertension.