Abstract Vivid structural colors in butterflies are caused by photonic nanostructures scattering light. Structural colors evolved for numerous biological signaling functions and have technological applications. Optically, such structures are well understood, however their development in vivo remains obscure. We show that actin is intimately involved in structural color formation in the butterfly Heliconius sara . Using comparisons between iridescent (structurally colored) and non-iridescent scales in adult and developing H. sara , we show that iridescent scales have more densely packed actin bundles leading to an increased density of reflective ridges. Super-resolution microscopy revealed that actin is repeatedly re-arranged in later development, when optical nanostructures are forming. Furthermore, actin perturbation experiments at these later developmental stages resulted in near total loss of structural color. Overall, this shows that actin plays vital templating roles during structural color formation in butterfly scales, with mechanisms potentially universal across lepidoptera. Teaser The actin cytoskeleton is essential for templating the optical nanostructures responsible for structural color production in butterfly scales. Actin templates the reflective ridges on butterfly scales and is directly involved in forming the color-producing nanostructures within these

X-ray phase-contrast micro computed tomography using synchrotron radiation (SR PhC-microCT) offers unique 3D imaging capabilities for visualizing microstructure of the human brain. Its applicability for unstained soft tissue is an area of active research. Acquiring images from a tissue block without needing to section it into thin slices, as required in routine histology, allows for investigating the microstructure in its natural 3D space. This paper presents a detailed step-by-step guideline for imaging unstained human brain tissue at resolutions of a few micrometers with SR PhC-microCT implemented at SYRMEP, the hard X-ray imaging beamline of Elettra, the Italian synchrotron facility. We present examples of how blood vessels and neurons appear in the images acquired with isotropic 5 micron and 1 micron voxel sizes. Furthermore, the proposed protocol can be used to investigate important biological substrates such as neuromelanin or corpora amylacea. Their spatial distribution can be studied using specifically tailored segmentation tools that are validated by classical histology methods. In conclusion, SR PhC-microCT using the proposed protocols, including data acquisition and image processing, offers viable means of obtaining information about the anatomy of the human brain at the cellular level in 3D.