Abstract Diverging from conventional cell division models, plant cells undergo incomplete division to generate plasmodesmata communication bridges between daughter cells. While fundamental for plant multicellularity, the mechanisms governing bridge stabilization, as opposed to severing, remain unknown. We found that the endoplasmic reticulum (ER) is decisive in promoting incomplete cytokinesis by inhibiting local abscission events. ER tubes within contracting cell plate fenestrae create energy barriers preventing full closure. Contraction ceases upon encountering a metastable ER-plasma membrane tubular structure, leading to plasmodesmata formation. This process relies on the ER-tethers multiple C2 domains and transmembrane domain proteins 3, 4, and 6, which act as ER stabilizers, preserving ER position and integrity in nascent bridges. Our findings unveil the mechanisms through which plants undergo incomplete division to promote intercellular communication. One-Sentence Summary Uninterrupted ER connections obstruct abscission, causing incomplete cytokinesis and plasmodesmata formation in plants.

ABSTRACT In the course of their growth and development plants have to constantly perceive and react to their environment. This is achieved in cells, by the coordination of complex combinatorial signaling networks. However, how signal integration and specificity are achieved in this context is unknown. With a focus on the hyperosmotic stimulus, we use live super-resolution light imaging methods to demonstrate that a Rho GTPase, Rho-of-Plant 6 (ROP6), forms stimuli-dependant nanodomains within the PM. These nanodomains are necessary and sufficient to transduce production of reactive oxygen species (ROS),that act as secondary messengers and trigger several plant adaptive responses to osmotic constraints. Furthermore, ROP6 activation triggers the nanoclustering of two NADPH oxidases that subsequently generates ROS. ROP6 nanoclustering is also needed for cell surface auxin signaling, but short-time auxin treatment does not induce ROS accumulation. We show that auxin-induced ROP6 nanodomains, unlike osmotically-driven ROP6 clusters, do not recruit the NADPH oxidase, RBOHD. Together, our results suggest that Rho GTPase nano-partitioning at the PM ensure signal specificity downstream of independent stimuli.