Zika virus (ZIKV) is an emerging arbovirus of the Flaviviridae family, which includes dengue, West Nile, yellow fever, and Japanese encephalitis viruses, that causes a mosquito-borne disease transmitted by the Aedes genus, with recent outbreaks in the South Pacific. Here we examine the importance of human skin in the entry of ZIKV and its contribution to the induction of antiviral immune responses. We show that human dermal fibroblasts, epidermal keratinocytes, and immature dendritic cells are permissive to the most recent ZIKV isolate, responsible for the epidemic in French Polynesia. Several entry and/or adhesion factors, including DC-SIGN, AXL, Tyro3, and, to a lesser extent, TIM-1, permitted ZIKV entry, with a major role for the TAM receptor AXL. The ZIKV permissiveness of human skin fibroblasts was confirmed by the use of a neutralizing antibody and specific RNA silencing. ZIKV induced the transcription of Toll-like receptor 3 (TLR3), RIG-I, and MDA5, as well as several interferon-stimulated genes, including OAS2, ISG15, and MX1, characterized by strongly enhanced beta interferon gene expression. ZIKV was found to be sensitive to the antiviral effects of both type I and type II interferons. Finally, infection of skin fibroblasts resulted in the formation of autophagosomes, whose presence was associated with enhanced viral replication, as shown by the use of Torin 1, a chemical inducer of autophagy, and the specific autophagy inhibitor 3-methyladenine. The results presented herein permit us to gain further insight into the biology of ZIKV and to devise strategies aiming to interfere with the pathology caused by this emerging flavivirus.Zika virus (ZIKV) is an arbovirus belonging to the Flaviviridae family. Vector-mediated transmission of ZIKV is initiated when a blood-feeding female Aedes mosquito injects the virus into the skin of its mammalian host, followed by infection of permissive cells via specific receptors. Indeed, skin immune cells, including dermal fibroblasts, epidermal keratinocytes, and immature dendritic cells, were all found to be permissive to ZIKV infection. The results also show a major role for the phosphatidylserine receptor AXL as a ZIKV entry receptor and for cellular autophagy in enhancing ZIKV replication in permissive cells. ZIKV replication leads to activation of an antiviral innate immune response and the production of type I interferons in infected cells. Taken together, these results provide the first general insights into the interaction between ZIKV and its mammalian host.

Murine IL-10 has been reported originally to be produced by the Th2 subset of CD4+ T cell clones. In this study, we demonstrate that human IL-10 is produced by Th0, Th1-, and Th2-like CD4+ T cell clones after both Ag-specific and polyclonal activation. In purified peripheral blood T cells, low, but significant, levels of IL-10 were found to be produced by the CD4+CD45RA+ population, whereas CD4+CD45RA- "memory" cells secreted 5- to 20-fold higher levels of IL-10. In addition, IL-10 was produced by activated CD8+ peripheral blood T cells. Optimal induction of IL-10 was observed after activation by specific Ag and by the combination of anti-CD3 mAb and the phorbol ester tetradecanoyl phorbol acetate, whereas the combination of calcium ionophore A23187 and 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate acetate was a poor inducer of IL-10 production. Kinetic studies indicated that IL-10 was produced relatively late as compared with other cytokines. Maximal IL-10 mRNA expression in CD4+ T cell clones and purified peripheral blood T cells was obtained after 24 h, whereas maximal IL-10 protein synthesis occurred between 24 h and 48 h after activation. No differences were observed in the kinetics of IL-10 production among Th0, Th1-, and Th2-like subsets of CD4+ T cell clones. The results indicate a regulatory role for IL-10 in later phases of the immune response.

ZIKA virus (ZIKV) is an emerging pathogen responsible for neurological disorders and congenital microcephaly. However, the molecular basis for ZIKV neurotropism remains poorly understood. Here, we show that Axl is expressed in human microglia and astrocytes in the developing brain and that it mediates ZIKV infection of glial cells. Axl-mediated ZIKV entry requires the Axl ligand Gas6, which bridges ZIKV particles to glial cells. Following binding, ZIKV is internalized through clathrin-mediated endocytosis and traffics to Rab5+ endosomes to establish productive infection. During entry, the ZIKV/Gas6 complex activates Axl kinase activity, which downmodulates interferon signaling and facilitates infection. ZIKV infection of human glial cells is inhibited by MYD1, an engineered Axl decoy receptor, and by the Axl kinase inhibitor R428. Our results highlight the dual role of Axl during ZIKV infection of glial cells: promoting viral entry and modulating innate immune responses. Therefore, inhibiting Axl function may represent a potential target for future antiviral therapies.

Abstract Dengue viruses (DENV) are expanding global pathogens that are transmitted through the bite of mosquitoes, mostly Aedes aegypti . As RNA viruses, DENV rely on RNA-binding proteins (RBPs) to complete their life cycle. Alternatively, RBPs can act as restriction factors that prevent DENV multiplication. While the importance of RBPs is well-supported in humans, there is a dearth of information about their influence on DENV transmission by mosquitoes. Such knowledge could be harnessed to design novel, effective interventions against DENV. Here, we successfully adapted RNA-affinity chromatography coupled with mass spectrometry – a technique initially developed in mammalian cells – to identify RBPs in Ae. aegypti cells. We identified fourteen RBPs interacting with DENV serotype 2 3’UTR, which is involved in the viral multiplication and produces subgenomic flaviviral RNA (sfRNA). We validated the RNA affinity results for two RBPs by confirming that AePur binds the 3’UTR, whereas AeStaufen interacts with both 3’UTR and sfRNA. Using in vivo functional evaluation, we determined that RBPs like AeRan, AeExoRNase, and AeRNase have pro-viral functions, whereas AeGTPase, AeAtu, and AePur have anti-viral functions in mosquitoes. Furthermore, we showed that human and mosquito Pur homologs have a shared affinity to DENV2 RNA, although the anti-viral effect is specific to the mosquito protein. Importantly, we revealed that AeStaufen mediates a reduction of gRNA and sfRNA copies in several mosquito tissues, including the salivary glands and that AeStaufen-mediated sfRNA reduction diminishes the concentration of transmission-enhancing sfRNA in saliva, thereby revealing AeStaufen’s role in DENV transmission. By characterizing the first RBPs that bind to DENV2 3’UTR in mosquitoes, our study unravels new pro- and anti-viral targets for the design of novel therapeutic interventions as well as provides foundation for studying the role of RBPs in virus-vector interactions. Author abstract Dengue viruses are important human pathogens transmitted by mosquitoes. Currently, there are no effective control measures for dengue. The RNA-binding proteins (RBPs) in mosquitoes, which bind to the dengue virus genome to regulate viral multiplication, could serve as new targets for developing therapeutic interventions. In this study, we pioneered the use of RNA-affinity chromatography – a technique that identifies proteins binding to specific RNA sequences – in mosquito cells. This led to the detection of fourteen RBPs that bind to the 3’UTR of dengue virus serotype 2. We validated our results using immunoprecipitation method. Furthermore, we demonstrated that 6 of the 14 RBPs influence viral multiplication in mosquitoes. Among these six RBPs, we showed that the AePur mosquito and human homologs share an affinity to dengue virus RNA, whereas the anti-viral function is specific to the mosquito homolog. Importantly, we revealed that AeStaufen mediates a reduction of genomic and subgenomic flaviviral RNAs in multiple mosquito tissues. We also showed that the reduction of subgenomic flaviviral RNA in salivary glands diminishes the secretion of salivary subgenomic RNA, which facilitates infection at the bite site, thereby unveiling the function of AeStaufen in the virus transmission. By characterizing the first mosquito RBPs that bind to dengue virus genome, our study paves the way for leveraging these proteins as potential targets to block virus transmission.

Abstract Understanding transmission routes of arboviruses is key to control their epidemiology and global health burden. Using West Nile virus and Culex mosquitoes, we tested whether arboviruses are transmitted through mosquito excreta. First, we determined the presence of infectious virions in excreta and quantified a high concentration of infectious units per excreta. Second, we showed that virion excretion starts early after oral infection and remains constant for a long period, regardless of mosquito infection level. These results highlight the infectiousness of excreta from infected mosquitoes. Third, we found that both larvae and pupae were susceptible to infection, although pupae were highly permissive. Forth, we established the proof-of-concept that immature mosqui-toes can be infected by infectious excreta, demonstrating a new excreta-mediated mode of transmission. Finally, by mathematically modelling excreta-mediated transmission in the field, we demonstrated its potential impact on arbovirus epidemiology. Our study uncovers a new route of transmission for arboviruses, unveiling mechanisms of viral maintenance in mosquito reservoirs and of vector species shift that contribute to zoonotic emergence.

Abstract Background Rabies is a zoonotic disease of all warm-blooded animals including humans. Though, there is little knowledge of the status of rabies in wild animals in Cameroon, the disease is endemic in the country with dogs being the main source of transmission. Bat habitats are widespread in Cameroon, but there is little information on the prevalence of rabies-like viruses in bats, nor the role of bats as a potential reservoir of rabies. Methods A cross sectional study was carried out to determine the prevalence and risk factors of Lyssavirus in bats in the Northern region of Cameroon. A total of 212 bats belonging to three families (Pteropodidae, Vespertilionidae, Molossidae) and 5 species were randomly sampled in 7 localities in the North of Cameroon and were tested for Lyssavirus antigen using direct Immunofluorescence Test (IFA). Overall, 57 (26.89%) of the bats collected showed an IFA positive reaction. The prevalence was higher (P<0.05) in adult bats (33.33%, 95% CI: 25.15 – 42.66) compared to young individuals (20.19%). The main risk factors identified in the study for human exposure to bats were gender (Male), educational level (tertiary), religion (Christianity), ethnic group (Matal), the presence of bats in the area, the practice of bat hunting and consumption and the level of awareness on bat rabies-like viruses. Conclusion The study found the first evidence of Lyssavirus in bats in Cameroon. This finding revealed that bat rabies-like viruses are real and constitutes a potential human health problem in communities with bat habitats in the North region of Cameroon. Enhancing the level of public awareness and health education on the potential of bats as reservoirs of Lyssavirus in Cameroon as well as the integration of the “One Health” approach for effective management of animal and human rabies should be emphasized. Author summary Rabies is a zoonotic disease caused by a virus of the genus Lyssavirus. It affects all warm-blooded animals including humans. Canine and Human rabies are well documented as endemic in Cameroon, but little is known about this disease in wildlife, in particular among bats, despite their multiple interactions with the inhabitants of Northern Cameroon. Indeed, bats were hunted, sold and eaten as bush meat by local populations. We investigated the presence of Lyssavirus in bat and assessed the risk factors of human exposure to bats in the Northern region of Cameroon. The study highlights that Lyssavirus is present in bats in this area. The population was aware of human and canine rabies, however, the presence of the disease in bats was less known. Based on these findings, investigating bat populations on a large scale, to characterise the Lyssavirus strains circulating in the region, as well as educate the local population on the risks of rabies transmission from bats to humans and other animals.

Abstract Mosquito-borne viruses are a growing global threat. Initial viral inoculation occurs in the skin via the mosquito ‘bite’, eliciting immune responses that shape the establishment of infection and pathogenesis. We aimed to cutaneous innate and adaptive immune responses to mosquito bites in individuals from endemic areas. In this single-arm, cross-sectional interventional study, we enrolled 30 healthy adult participants aged 18 to 45 years of age from Cambodia between October 2020 and January 2021. We performed 3-mm skin biopsies at baseline as well as 30 minutes, 4 hours, and 48 hours after a controlled feeding by uninfected Aedes aegypti mosquitos. The primary endpoints were measurement of changes in early and late innate responses in bitten vs unbitten skin by gene expression profiling, immunophenotyping, and cytokine profiling. Results revealed induction of neutrophil degranulation and recruitment of skin-resident dendritic cells and M2-macrophages in ‘bitten’ skin. As the immune reaction progressed over time, T cell priming and regulatory pathways were upregulated along with a shift to a Th2-driven response and CD8+ T cell activation. In accordance, participants’ bitten skin cells produced less pro-inflammatory cytokines when stimulated by Ae. aegypti salivary gland extract. No unexpected adverse events occurred, and one patient was lost to follow-up at Day 14. These results identify key immune genes, cell types, and pathways in the human response to mosquito bites that can be leveraged to develop novel therapeutics and vector-targeted vaccine candidates to arboviral diseases. Graphical Abstract Panel shows evolution of the human skin response to Aedes aegypti bites over time .

The pioneering work of Dr. William Coley has shown that infections can stimulate the immune system and improve tumor growth control. However, the immune mechanisms responsible for the protective role of infectious agents have still not been identified. Here, we investigated the role of innate immune pathways in tumor regression by performing experimental infections in genetically modified Drosophila that develop invasive neoplastic tumors. After quantifying tumor size, through image processing, and immune gene expression with transcriptomic analyses, we analyzed the link between tumor size and pathogen-induced immune responses thanks to a combination of statistical and mathematical modeling. Drosophila larvae infected with a naturally-occurring bacterium showed a smaller tumor size compared to controls and fungus-infected larvae, thanks to an increase expression of Imd and Toll pathways. Our mathematical model reinforces this idea by showing that repeated acute infection could results in an even higher decrease in tumor size. Thus, our study suggests that infectious agents can induce tumor regression through the alteration of innate immune responses. This phenomenon, currently neglected in oncology, could have major implications for the elaboration of new preventive and immunotherapeutic strategies.

Abstract Astroviruses (AstVs) have been discovered in over 80 animal species including diverse bat species and avian species. A study on Astrovirus circulation and diversity in different insectivorous and frugivorous chiropteran species roosting in trees, caves and building basements was carried out at 11 different sites across Zimbabwe. Pooled and individual faecal sampling methods were used for this study, with collection dates ranging from June 2016 to July 2021. In two sites, Magweto and Chirundu, sampling was carried out at monthly intervals from August 2020 to July 2021. Astroviruses and bat mitochondrial genes were amplified using pan-AstVs and CytB /12S RNA PCR systems respectively. Phylogenetic analysis of the RdRp Astrovirus sequences revealed a high genetic diversity of astroviruses. All the bat astroviruses tested in this study clustered with the Mamastrovirus genus. Two distinct groups of amplified sequences were identified. One group was comprised of sequences isolated from Hipposideros, Rhinolophus and Eidolon helvum spp. clustered with Human Astrovirus strains: HuAstV types1-6, HuAstV -MLB1-3 and HuAstV -VA-1. The second group comprising the majority of the sequences clustered with different strains of Bat AstVs. Results from the longitudinal study at Magweto and Chirundu showed an overall AstV prevalence of 13.7% and 10.4% respectively. Peaks of AstV infection at Chirundu coincided with the period when juveniles are 4-6 months old. By combining data from our previous work on Coronaviruses, we also anaylzed co-infection of bats with Coronaviruses and Astroviruses at Magweto and Chirundu sites for which the prevalence of co-infection was 2.6% and 3.5% respectively.