Abstract Oxysterols (i.e., oxidized cholesterol species) have complex roles in biology. 25-hydroxycholesterol (25HC), a product of activity of cholesterol-25-hydroxylase (CH25H) upon cholesterol, has recently been shown to be broadly antiviral, suggesting therapeutic potential against SARS-CoV-2. However, 25HC can also amplify inflammation and tissue injury and be converted by CYP7B1 to 7α,25HC, a lipid with chemoattractant activity via the G protein-coupled receptor, EBI2/GPR183. Here, using in vitro studies and two different murine models of SARS-CoV-2 infection, we investigate the effects of these two oxysterols on SARS-CoV-2 pneumonia. We show that while 25HC and enantiomeric-25HC are antiviral in vitro against human endemic coronavirus-229E, they did not inhibit SARS-CoV-2; nor did supplemental 25HC reduce pulmonary SARS-CoV-2 titers in the K18-human ACE2 mouse model in vivo . 25HC treatment also did not alter immune cell influx into the airway, airspace cytokines, lung pathology, weight loss, symptoms, or survival but was associated with increased airspace albumin, an indicator of microvascular injury, and increased plasma pro-inflammatory cytokines. Conversely, mice treated with the EBI2/GPR183 inhibitor NIBR189 displayed a modest increase in lung viral load only at late time points, but no change in weight loss. Consistent with these findings, although Ch25h was upregulated in the lungs of SARS-CoV-2-infected WT mice, lung viral titers and weight loss in Ch25h −/– and Gpr183 −/– mice infected with the beta variant were similar to control animals. Taken together, endogenous 25-hydroxycholesterols do not significantly regulate early SARS-CoV-2 replication or pathogenesis and supplemental 25HC may have pro-injury rather than therapeutic effects in SARS-CoV-2 pneumonia.

Major Histocompatibility Complex I (MHC-I) molecules classically present peptides derived from endogenous antigens, but exogenous antigens can also gain access to the MHC-I machinery in dendritic cells (DCs), which can activate antigen-specific CD8+ T cells. This process, termed cross-presentation, can be triggered by the uptake of dying autologous cells, including tumor cells, by DCs. The molecular mechanisms that underlie efficient cross-presentation remain largely uncharacterized, and an improved understanding of these mechanisms might reveal novel strategies for anti-tumor therapies. Rubicon (RUBCN) is a molecule required for LC3-associated phagocytosis (LAP), but dispensable for canonical autophagy, and mice lacking this protein develop an autoimmune inflammatory pathology with age. Here, we demonstrate that Rubcn-deficient DCs have increased retention of engulfed cellular cargo in immature phagosomes resulting in increased phagosome-to-cytosol escape and antigen access to proteasome-mediated degradation. As a result, mice selectively lacking Rubcn in DCs mount stronger tumor antigen-specific CD8+ T cell responses and exhibit decreased tumor burden compared to wild type littermates. These findings identify LAP as a key regulator of cross-presentation and suggest that targeting RUBCN might represent a novel strategy for anti-tumor therapy.

GATA3 is frequently mutated in breast cancer; these mutations are widely presumed to be loss of function. Here, we address molecular alterations downstream of a novel class of GATA3 mutations, revealing both gain and loss of function. Mutation of one allele of GATA3 led to loss of binding and decreased expression at a subset of genes, including Progesterone Receptor. At other loci, associated with epithelial to mesenchymal transition, gain of binding at a novel sequence motif correlated with increased gene expression. These results demonstrate that not all GATA3 mutations are equivalent and that these mutations impact breast cancer through gain and loss of function.

Abstract Hypertension is estimated to affect almost 1 billion people globally and significantly increases risk of myocardial infarction, heart failure, stroke, retinopathy and kidney disease. One major front line therapy that has been used for over 50 years involves L-type Ca 2+ channel blockers (LCCBs). One class of LCCBs is the dihydropyridine family, with amlodipine being widely prescribed regardless of gender, race, ethnicity or age. In 2020, Johnson et al. 7 reported that all LCCBs significantly increased the risk of heart failure, and attributed this effect to non-canonical activation of store-operated Ca 2+ entry. A major approach on which they based many of their arguments was to measure cytosolic Ca 2+ using the fluorescent Ca 2+ indicator dye fura-2. We recently demonstrated that amlodipine is highly fluorescent within cells and overwhelms the fura-2 signal, precluding the use of the indicator dye with amlodipine 24 . Our meta-analyses and prospective real world study showed that dihydropyridines were not associated with an increase in heart failure, likely explained by the lack of consideration by Johnson et al. 7 of well-known confounding factors such as age, race, obesity, prior anti-hypertensive treatment or diabetes 24 . Trebak and colleagues have responded to our paper with a forthright and unwavering defence of their work 27 . In this paper, we carry out a forensic dissection of Johnson et al., 7 and conduct new experiments that address directly points raised by Trebak et al. 27 . We show that there are major flaws in the design and interpretation of their key experiments, that fura-2 cannot be used with amlodipine, that there are fundamental mathematical misunderstandings and mistakes throughout their study leading to critical calculations on heart failure that are demonstrably wrong, and several of their own results are inconsistent with their interpretation. We therefore believe the study by Johnson et al. 7 is flawed at many levels and we stand by our conclusions.