ABSTRACT Background High-density lipoprotein (HDL) nanoagents have unrealized potential for atherosclerosis theranostics. Porphyrin-lipid HDL mimetic nanoparticles (Por-HDL-NPs) incorporate porphyrin-lipid which permits near infrared fluorescence imaging and positron emission tomography (PET) through chelation of Copper-64 ( 64 Cu). The outer shell contains apolipoprotein A-I mimetic peptide R4F that interacts with scavenger receptor SR-BI, enabling macrophage targeting and therapeutic effects. We leveraged the theranostic properties of Por-HDL-NPs for testing in atherosclerosis. Methods and Results In vitro , Por-HDL-NPs were internalised by immortalised bone marrow-derived macrophages (iBMDMs), visualised via fluorescence microscopy and flow cytometry. Por-HDL-NPs increased cholesterol efflux from [ 3 H]-cholesterol-loaded iBMDMs, (49%, P <0.05), compared to reconstituted HDL. Incubation of iBMDMs with Por-HDL-NPs reduced mRNA levels of inflammatory mediators Il-1β (88%), Il-18 (54%) and Ccl5 (75%), and protein secretion of IL-1β (69%) and CCL5 (82%), P <0.05. Por-HDL-NPs suppressed inflammasome components Nlrp3 (69%) and Asc (36%), P <0.05. Studies using siRNA deletion of SR-B1 and methyl-β-cyclodextrin, revealed the anti-inflammatory properties of Por-HDL-NPs were independent of SR-B1 and cholesterol efflux. However, Por-HDL-NPs suppressed activation of inflammatory transcription factor NF-κB (53%, P <0.05). In Apoe -/- mice, PET imaging showed 64 Cu-Por-HDL-NPs localised in hearts and detected increases in plaque over time with high-cholesterol diet. Por-HDL-NP fluorescence was visualised in aortic sinus plaques, co-localised with CD68 + macrophages, and by fluorescence IVIS imaging in aortic arch plaque. Por-HDL-NP-treated mice had smaller early-stage (22%) and unstable plaques (52%) and fewer circulating monocytes (32%) than control PBS-treated mice, P <0.05 for all. Conclusions Por-HDL-NPs have theranostic properties, exhibiting both multi-modal imaging capabilities for identifying plaque and athero-protective therapeutic effects. Clinical Perspective: What is new? Porphyrin high-density lipoprotein (HDL) mimetic nanoparticles (Por-HDL-NPs) have theranostic application in atherosclerosis. Por-HDL-NPs are internalized by macrophages in vitro and plaque macrophages in vivo , enabling the visualization of atherosclerosis by both positron emission tomography and multiple fluorescence imaging modalities. Por-HDL-NPs exhibit atheroprotective effects and suppress inflammation, promote cholesterol efflux, reduce atherosclerotic plaque development and lower the number of circulating monocytes. What are the clinical implications? The PET imaging and plaque targeting capabilities of Por-HDL-NPs have implications for improved non-invasive tracking of human atherosclerosis development. The excellent fluorescence imaging and plaque targeting properties of Por-HDL-NPs have clinical significance for improved detection of early-stage plaque using intravascular imaging strategies. Por-HDL-NPs provide therapeutic capabilities that target plaque directly, independent of lipid-lowering, suggestive of their potential to provide benefit on top of current lipid-lowering strategies.

Objective: Impaired angiogenic responses to ischemia underlie diabetic vascular complications. Reconstituted high-density lipoproteins (rHDL) have proangiogenic effects in diabetes. The pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4)/pyruvate dehydrogenase complex (PDC) axis is an oxygen-conserving mechanism that preserves EC functions in hypoxia. We aimed to determine the role of the PDK4/PDC axis in angiogenesis, the effect of diabetes on its regulation in response to ischemia, and in the proangiogenic properties of rHDL. Approach and Results: In a murine wound healing model, PDK4 and pPDC were elevated early (24h) post induction of wound ischemia in non-diabetic wounds, which did not occur in diabetic mice. Topical rHDL rescued this impairment, enhancing PDK4 (68%, P<0.05) and pPDC (165%, P<0.01) in diabetic wounds. In parallel, wound neovascularization (62%, P<0.05) and closure (154%, P<0.0001) were increased in diabetic rHDL-treated wounds. In vitro, PDK4 and pPDC levels were increased in ECs exposed to hypoxia (65%, 70% respectively, P<0.05). High glucose did not elicit a further step-wise induction in PDK4/pPDC, with aberrant increases in mitochondrial respiration (19%, P<0.05), coupled with impaired EC angiogenic functions. Importantly, rHDL increased PDK4 and pPDC two-fold, returning mitochondrial respiration and EC angiogenic functions to normal glucose levels. In vitro, PDK4 siRNA knockdown attenuated the proangiogenic effects of rHDL. In vivo PDK4 inhibition ameliorated topical rHDL-mediated increases in wound angiogenesis and closure. Using chromatin immunoprecipitation, rHDL increased forkhead box O1 (FOXO1) binding to the PDK4 promoter and suppressed FOXO1 phosphorylation, presenting FOXO1 as a mechanism for the induction of PDK4 by rHDL. Conclusion: The PDK4/PDC axis response to ischemia is impaired in diabetes and important for the proangiogenic effects of rHDL.