VA
Victoria Alonso
Author with expertise in Epidemiology and Treatment of Chagas Disease
Achievements
Open Access Advocate
Key Stats
Upvotes received:
0
Publications:
4
(100% Open Access)
Cited by:
2
h-index:
14
/
i10-index:
15
Reputation
Biology
< 1%
Chemistry
< 1%
Economics
< 1%
Show more
How is this calculated?
Publications
0

Alpha-tubulin acetylation in Trypanosoma cruzi: a dynamic instability of microtubules is required for replication and cell cycle progression

Victoria Alonso et al.Dec 15, 2020
Abstract Trypanosomatids have a cytoskeleton arrangement that is simpler than what is found in most eukaryotic cells. However, it is precisely organized and constituted by stable microtubules. Such microtubules compose the mitotic spindle during mitosis, the basal body, the flagellar axoneme and the subpellicular microtubules, which are connected to each other and also to the plasma membrane forming a helical arrangement along the central axis of the parasite cell body. Subpellicular, mitotic and axonemal microtubules are extensively acetylated in Trypanosoma cruzi . Acetylation on lysine (K) 40 of α-tubulin is conserved from lower eukaryotes to mammals and is associated with microtubule stability. It is also known that K40 acetylation occurs significantly on flagella, centrioles, cilia, basal body and the mitotic spindle in eukaryotes. Several tubulin posttranslational modifications, including acetylation of K40, have been catalogued in trypanosomatids, but the functional importance of these modifications for microtubule dynamics and parasite biology remains largely undefined. The primary tubulin acetyltransferase that delivers this modification was recently identified in several eukaryotes as Mec-17/ATAT, a Gcn5-related N-acetyltransferase. Here, we report that T. cruzi ATAT acetylates α-tubulin in vivo and is capable of auto-acetylation. Tc ATAT is located in the cytoskeleton and flagella of epimastigotes and colocalizes with acetylated α-tubulin in these structures. We have expressed Tc ATAT with an HA tag using the inducible vector p Tc INDEX-GW in T. cruzi . Over-expression of Tc ATAT causes increased levels of the acetylated isoform, induces morphological and ultrastructural defects, especially in the mitochondrion, and causes a halt in the cell cycle progression of epimastigotes, which is related to an impairment of the kinetoplast division. Finally, as a result of Tc ATAT over-expression we observed that parasites became more resistant to microtubule depolymerizing drugs. These results support the idea that α-tubulin acetylation levels are finely regulated for the normal progression of T. cruzi cell cycle.
0
Citation1
0
Save
14

Essential bromodomain TcBDF2 as a drug target against Chagas disease

Alejandro Pezza et al.Jan 27, 2022
Abstract Trypanosoma cruzi is a unicellular parasite that causes Chagas disease, which is endemic in the American continent but also worldwide distributed by migratory movements. A striking feature of trypanosomatids is the polycistronic transcription associated with post-transcriptional mechanisms that regulate the levels of translatable mRNA. In this context, epigenetic regulatory mechanisms have been revealed of great importance, since they are the only ones that would control the access of RNA polymerases to chromatin. Bromodomains are epigenetic protein readers that recognize and specifically bind to acetylated lysine residues, mostly at histone proteins. There are seven coding sequences for BD-containing proteins in trypanosomatids, named Tc BDF1 to Tc BDF7, and a putative new protein-containing a bromodomain that was recently described. Using the Tet regulated overexpression plasmid p Tc INDEX-GW and CRISPR/Cas9 genome editing we were able to demonstrate the essentiality of Tc BDF2 in T cruzi . This bromodomain is located in the nucleus, through a bipartite nuclear localization signal. Tc BDF2 was shown to be important for host cell invasion, amastigote replication, and differentiation from amastigotes to trypomastigotes. Overexpression of Tc BDF2 diminished epimastigote replication. Also, some processes involved in pathogenesis were altered in these parasites, such as infection of mammalian cells, replication of amastigotes, and the number of trypomastigotes released from host cells. In in vitro studies, Tc BDF2 was also able to bind inhibitors showing a specificity profile different from that of the previously characterized Tc BDF3. These results, point to Tc BDF2 as a druggable target against T. cruzi .
14
Citation1
0
Save
0

Identification of novel Bromodomain inhibitors ofTrypanosoma cruziBromodomain Factor 2 (TcBDF2) using a fluorescence polarization-base high-throughput assay

Esteban Serra et al.Feb 18, 2024
Bromodomains are structural folds present in all eukaryotic cells that bind to other proteins recognizing acetylated lysines. Most proteins with bromodomains are part of nuclear complexes that interact with acetylated histone residues and participate in regulating DNA replication, transcription, and repair through chromatin structure remodeling. Bromodomain inhibitors are small molecules that bind to the hydrophobic pocket of bromodomains, interfering with the interaction with acetylated histones. Using a fluorescent probe, we have developed an assay to select inhibitors of the bromodomain factor 2 of Trypanosoma cruzi ( Tc BDF2) using fluorescence polarization. Initially, a library of 28,251 compounds was screened in an endpoint assay. The top 350 ranked compounds were further analyzed in a dose-response assay. From this analysis, 7 compounds were obtained that had not been previously characterized as bromodomain inhibitors. Although these compounds did not exhibit significative trypanocidal activity, all showed bona fide interaction with Tc BDF2 with dissociation constants between 1 and 3 uM validating these assays to search for bromodomain inhibitors.