Abstract Here, we show the possible correlation between the anatomical characteristics of epidermal cells of Arabidopsis thaliana with the stomata transient opening, which is commonly called the Wrong-Way Response (WWR). The WWR was induced by either reduced air humidity or leaf excision. Five genotypes of A. thaliana Col8, epf1epf2, lcd1-1 , SALK069, and UBP, respectively, with anatomical differences in epidermal cells such as stomatal density, stomata size, size, and shape of the pavement cells were selected. These genotypes allowed us to investigate the mutual effects of stomata density and size on WWR. Scanning Electron Microscopy (SEM) was applied for image acquisition of the abaxial and adaxial surface of the leaves and the main features of the epidermal cells were extracted by one of the additions to the MiToBo plugin of ImageJ/Fiji called PaCeQuant. The stomatal conductance to water vapor (gs) was measured using the portable photosynthesis measurement system LICor-6800. Our linear models showed that the size of the stomata explained the rate of WWR induced by reduced air humidity, so genotypes with smaller stomata showed a smaller rate of the WWR. After leaf excision, however, there was no correlation between the size of the stomata and the rate of the WWR. Moreover, we found that after both, reduced air humidity and leaf excision, the size of the pavement cells on the abaxial surface is correlated to the rate of the WWR; genotypes with smaller pavement cells on the abaxial surface had a smaller rate of WWR.

A central challenge in plant ecology is to define the major axes of plant functional variation with direct consequences for fitness. Central to the three main components of plant fitness (growth, survival, and reproduction) is the rate of metabolic conversion of CO2 into carbon that can be allocated to various structures and functions. Here we (1) argue that a primary constraint on the maximum rate of photosynthesis per unit leaf area is the size and packing density of cells and (2) show that variation in genome size is a strong predictor of cell sizes, packing densities, and the maximum rate of photosynthesis across terrestrial vascular plants. Regardless of the genic content associated with variation in genome size, the simple biophysical constraints of encapsulating the genome define the lower limit of cell size and the upper limit of cell packing densities, as well as the range of possible cell sizes and densities. Genome size, therefore, acts as a first-order constraint on carbon gain and is predicted to define the upper limits of allocation to growth, reproduction, and defense. The strong effects of genome size on metabolism, therefore, have broad implications for plant biogeography and for other theories of plant ecology, and suggest that selection on metabolism may have a role in genome size evolution.

Premise of the study X-ray microcomputed tomography (microCT) can be used to measure 3D leaf internal anatomy, providing a holistic view of tissue organisation. Previously, the substantial time needed for segmenting multiple tissues limited this technique to small datasets, restricting its utility for phenotyping experiments and limiting our confidence in the conclusion of these studies due to low replication numbers.Methods and Results We present a Python codebase for random-forest machine learning segmentation and 3D leaf anatomical trait quantification which dramatically reduces the time required to process single leaf microCT scans into detailed segmentations. By training the model on each scan using 6 hand segmented image slices out of >1500 in the full leaf scan, it achieves >90% accuracy in background and tissue segmentation.Conclusion Overall, this 3D segmentation and quantification pipeline can reduce one of the major barriers to using microCT imaging in high-throughput plant phenotyping.

Maintaining high rates of photosynthesis in leaves requires efficient movement of CO2 from the atmosphere to the chloroplasts inside the leaf where it is converted into sugar. Throughout the evolution of vascular plants, CO2 diffusion across the leaf surface was maximized by reducing the sizes of the guard cells that form stomatal pores in the leaf epidermis. Once inside the leaf, CO2 must diffuse through the intercellular airspace and into the mesophyll cells where photosynthesis occurs. However, the diffusive interface defined by the mesophyll cells and the airspace and its coordinated evolution with other leaf traits are not well described. Here we show that among vascular plants variation in the total amount of mesophyll surface area per unit mesophyll volume is driven primarily by cell size, the lower limit of which is defined by genome size. The higher surface area enabled by smaller cells allows for more efficient CO2 diffusion into photosynthetic mesophyll cells. Our results demonstrate that genome downsizing among the flowering plants6 was critical to restructuring the entire pathway of CO2 diffusion, facilitating high rates of CO2 supply to the leaf mesophyll cells despite declining atmospheric CO2 levels during the Cretaceous.

Abstract Mesophyll conductance ( g m ) determines the diffusion of CO 2 from the substomatal cavities to the site of carboxylation in the chloroplasts and represents a critical limiting factor to photosynthesis. In this study, we evaluated the average effect sizes of different environmental constraints on g m in Populus spp., a forest tree model. We collected raw data of 815 A-C i response curves from 26 datasets to estimate g m , using a single curve-fitting method to alleviate method-related bias. We performed a meta-analysis to assess the effects of different abiotic stresses on g m . We found a significant increase in g m from the bottom to the top of the canopy that was concomitant with the increase of maximum rate of carboxylation and light-saturated photosynthetic rate ( A max ). g m was positively associated with increases in soil moisture and nutrient availability, but insensitive to increasing soil copper concentration, and did not vary with atmospheric CO 2 concentration. Our results showed that g m was strongly related to A max and to a lesser extent to stomatal conductance ( g s ). Also, a negative linear relation was obtained between g m and specific leaf area, which may be used to scale-up g m within the canopy.

The spongy mesophyll layer in leaves is ubiquitous among vascular plants, yet its structure is relatively unknown and typically described as a disordered assemblage of isodiametric cells. We characterized spongy mesophyll structure among diverse taxa using X-ray microCT imaging and found that leaves with small cell sizes, high cell packing densities, and close vein spacing were congruent with the isodiametric paradigm. When these structural traits exceeded well-defined thresholds, the spongy mesophyll domain was instead tessellated with an emergent topological motif of an irregular honeycomb that minimizes cellular investment and obeys Euler’s Law of space filling. Our data suggest spongy mesophyll is governed by allometric scaling laws, with two distinct topologies optimized for either photosynthetic performance or minimal resource investment.One Sentence Summary Conserved topological motifs in the spongy mesophyll are coordinated with leaf photosynthetic performance.

Summary Conifers prevail in the canopies of many terrestrial biomes, holding a great ecological and economic importance globally. Current increases in temperature and aridity are imposing high transpirational demands and resulting in conifer mortality. Therefore, identifying leaf structural determinants of water use efficiency is essential in predicting physiological impacts due to environmental variation. Using synchrotron-generated microCT imaging, we extracted leaf volumetric anatomy and stomatal traits in 34 species across conifers with a special focus on Pinus , the richest conifer genus. We show that intrinsic water use efficiency (WUE i ) is positively driven by leaf vein volume. Needle-like leaves of Pinus , as opposed to flat leaves or flattened needles of other genera, showed lower mesophyll porosity, decreasing the relative mesophyll volume. This led to increased ratios of stomatal pore number per mesophyll or intercellular airspace volume, which emerged as powerful explanatory variables, predicting both stomatal conductance and WUE i . Our results clarify how the three-dimensional organization of tissues within the leaf has a direct impact on plant water use and carbon uptake. By identifying a suit of structural traits that influence important physiological functions, our findings can help to understand how conifers may respond to the pressures exerted by climate change.