ABSTRACT BACKGROUND & AIMS Acinar to ductal metaplasia (ADM) occurs in the pancreas in response to tissue injury and is a potential precursor for adenocarcinoma. The goal of these studies was to define the populations arising from ADM, the associated transcriptional changes, and markers of disease progression. METHODS Acinar cells were lineage-traced with enhanced yellow fluorescent protein (EYFP) to follow their fate upon injury. Transcripts of over 13,000 EYFP+ cells were determined using single-cell RNA sequencing (scRNA-seq). Developmental trajectories were generated. Data were compared to gastric metaplasia, Kras G12D -induced neoplasia, and human pancreatitis. Results were confirmed by immunostaining and electron microscopy. Kras G12D was expressed in injury-induced ADM using several inducible Cre drivers. Surgical specimens of chronic pancreatitis from 15 patients were evaluated by immunostaining. RESULTS scRNA-seq of ADM revealed emergence of a mucin/ductal population resembling gastric pyloric metaplasia. Lineage trajectories suggest that some pyloric metaplasia cells can generate tuft and enteroendocrine cells (EECs). Comparison to Kras G12D -induced ADM identifies populations associated with disease progression. Activation of Kras G12D expression in HNF1B+ or POU2F3+ ADM populations leads to neoplastic transformation and formation of MUC5AC+ gastric-pit-like cells. Human pancreatitis samples also harbor pyloric metaplasia with a similar transcriptional phenotype. CONCLUSIONS Under conditions of chronic injury, acinar cells undergo a pyloric-type metaplasia to mucinous progenitor-like populations, which seed disparate tuft cell and EEC lineages. ADM-derived EEC subtypes are diverse. Kras G12D expression is sufficient to drive neoplasia from injury-induced ADM and offers an alternative origin for tumorigenesis. This program is conserved in human pancreatitis, providing insight into early events in pancreas diseases.

Abstract Organ homeostasis is maintained by regulated proliferation of distinct cell populations. In mouse liver, cyclin D1-positive hepatocytes in the midlobular zone repopulate the parenchyma at a constant rate to preserve liver homeostasis. The mitogenic cues that underlie this process are unknown. Hepatic stellate cells, the liver’s pericytes, are in close proximity to hepatocytes and have been implicated in supporting hepatocyte proliferation, but their role in liver homeostasis is unknown. Here, we employ a T cell-mediated hepatic stellate cell ablation model to remove nearly all hepatic stellate cells in the murine liver, enabling the unbiased characterization of hepatic stellate cell functions. In the normal murine liver, complete loss of hepatic stellate cells persists for up to 6 weeks and reduces liver mass. Our results show that hepatic stellate cells induce cyclin D1 in midlobular hepatocytes by release of neurotrophin-3 to promote hepatocyte proliferation via tropomyosin receptor kinase B signaling. These findings establish that hepatic stellate cells form the niche for midlobular hepatocytes and reveal a novel hepatocyte growth factor signaling pathway. One-Sentence Summary Hepatic stellate cells provide mitogenic cues for midlobular hepatocyte proliferation and metabolic zonation by secreting neurotrophin-3.

8577 Background: Sotevtamab is an investigational humanized monoclonal antibody that binds to tumor associated secreted clusterin (TA-sCLU). TA-sCLU is a potent inducer of the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT), a process known to contribute to tumor invasion, metastasis, chemoresistance and immune evasion. Sotevtamab abrogates the EMT-promoting activity of TA-sCLU by inhibiting its ability to be internalized in cancer cells. Methods: An open-label, single-arm, multi-center Phase II clinical study of sotevtamab administered in combination with docetaxel was performed in subjects with metastatic non-small cell lung cancer who had experienced progression following frontline immunochemotherapy. 35 subjects were enrolled from March 2021 to November 2022 and the study was completed in December 2023. Sotevtamab was administered at a dose of 12 mg/kg once weekly on Days 1, 8 and 15 combined with docetaxel at a dose of 75 mg/m 2 once every 3 weeks on Day 1. One cycle of treatment consisted of 21 days. The primary objectives were to determine the objective response rate (ORR) and the safety and tolerability of the combination. Tumor biopsies were performed prior to study initiation and after two cycles of therapy for pharmacodynamicevaluation. Results: As per interim data obtained from a rolling database lock performed in February 2023, the mean subject age was 63 and 22 patients (63%) were female. Of the 35 subjects, 28 were diagnosed with adenocarcinoma, 6 with squamous cell carcinoma and 1 with adenosquamous carcinoma; 11 were ECOG 0, 22 ECOG 1 and 2 ECOG 2. Six subjects with adenocarcinoma had a partial response for an ORR of 17.1%. Stable disease (SD) was experienced in an additional 10 subjects (9 adenocarcinomas and one squamous cell carcinoma) for an SD rate of 28.6%. The observed responses were sustained with a median duration of over one year (405 days). The estimated one-year survival rate was 33.9%. The most frequent adverse events were fatigue, infusion related reaction (IRR), diarrhea, nausea and anemia. The incidence of IRR was significantly decreased following the implementation of a premedication protocol. Analysis of paired tumour biopsies revealed in certain patients that sotevtamab induced a strong intratumoral immune response with the formation of Tertiary Lymphoid Structures (TLS). Various pharmacodynamic evaluations are being performed to better define the profile of responding patients. Conclusions: This phase II study showed promising response and overall tumor control. Duration of response was particularly encouraging and relevant to further exploration. The sotevtamab and docetaxel combination may enhance immune-mediated anti-tumor response through induction of TLS. Data from the final database lock will be presented. Clinical trial information: NCT04364620 .

Intraductal Papillary Mucinous Neoplasms (IPMNs) are cystic lesions and bona fide precursors for pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC). Recently, we showed that acinar to ductal metaplasia, an injury repair program, is characterized by a transcriptomic program similar to gastric spasmolytic polypeptide expressing metaplasia (SPEM), suggesting common mechanisms of reprogramming between the stomach and pancreas. The aims of this study were to assay IPMN for pyloric markers and to identify molecular drivers of this program.

ABSTRACT Eicosanoids, oxidized fatty acids that serve as cell-signaling molecules, have been broadly implicated in tumorigenesis. To identify eicosanoids relevant to pancreatic tumorigenesis, we profiled normal pancreas and pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) in mouse models and patient samples using mass spectrometry. We interrogated RNA sequencing datasets for eicosanoid synthase or receptor expression. Findings were confirmed by immunostaining. In murine models, we identified elevated levels of PGD 2 , prostacyclin, and thromboxanes in neoplasia while PGE 2 , 12-HHTre, HETEs, and HDoHEs are elevated specifically in tumors. Analysis of scRNA-seq datasets suggests that PGE 2 and prostacyclins are derived from fibroblasts, PGD 2 and thromboxanes from myeloid cells, and PGD 2 and 5-HETE from tuft cells. In patient samples, we identified a transition from PGD 2 to PGE 2 -producing enzymes in the epithelium during the transition to PDAC, fibroblast/tumor expression of PTGIS, and myeloid/tumor cell expression of TBXAS1. Altogether, our analyses identify key changes in eicosanoid species during pancreatic tumorigenesis and the cell types responsible for their synthesis.

Vulvar and vaginal melanomas (VVMs) are rare and aggressive malignancies with limited prognostic models available and there is no standard reporting protocol. VVMs were selected from six tertiary Canadian hospitals from 2000-2021, resected from patients aged ≥18 years, with 6 months or longer follow-up data, and confirmation of melanocytic differentiation by at least two immunohistochemical markers. Cases were reviewed by pathologists to identify histological biomarkers. Survival outcomes were tested with Kaplan-Meier log-rank, univariate Cox, and multivariate Cox regression. There were 79 VVMs with median follow-up at 26 months. Univariate analysis revealed that tumour necrosis, tumour ulceration, positive lymph nodes, and metastasis at diagnosis were significantly associated with disease-specific mortality, progression, and metastasis. Multivariate analysis identified tumour necrosis as an independent prognostic factor for disease-specific mortality (HR 4.803, 95% CI 1.954-11.803, p<0.001), progression (HR 2.676, 95% CI 1.403-5.102, p=0.003), and time-to-metastasis for non-metastatic patients at diagnosis (HR 3.761, 95%CI 1.678-8.431, p=0.001). Kaplan-Meier survival analyses demonstrated that tumour necrosis was a poor prognostic factor for disease-specific, progression-free, and metastasis-free survival (p<0.001 for all comparisons). Vaginal melanomas displayed decreased survival compared to vulvar or clitoral melanomas. This study identifies tumour necrosis as an independent prognostic factor for VVMs. Vaginal melanomas specifically showed worse survival outcomes compared to vulvar or clitoral melanomas, consistent with previously reported findings in the literature, emphasising the importance of differentiating between these primary tumour epicentres for prognostication and treatment planning in the care of genital melanoma patients.