Abstract Alongshan virus (ALSV) is a newly discovered pathogen of the Flaviviridae family, characterized by a multi-segmented genome distantly related to the canonical flaviviruses. Understanding the pathogenic mechanism of the emerging segmented flavivirus is crucial for the development of intervention strategies. Here we show that ALSV can infect multiple mammalian cells and induces the expression of antiviral genes. Moreover, ALSV is sensitive to IFN-β and possesses the ability to counteract type I IFN response. Mechanistically, ALSV’s nonstructural protein NSP1 binds to and degrades human STAT2 through an autophagy pathway in a species-dependent manner, resulting in direct inhibition of the expression of interferon-stimulated genes (ISGs). Specifically, NSP1 methyltransferase domain binds to the key sites of F175/R176 located in coiled-coil domain of STAT2. Moreover, NSP1-mediated degradation of STAT2 results in a reduction in mitochondrial mass by disrupting mitochondrial dynamics to induce mitophagy and inhibiting mitochondrial biogenesis, thereby suppressing the innate immune response. Interestingly, inhibiting mitophagy using 3-Methyladenine and enhancing mitochondrial biogenesis using the PPARγ agonist pioglitazone can reverse NSP1-mediated inhibition of ISGs, suggesting that promoting mitochondrial mass presents an effective antiviral strategy. Our findings elucidate the intricate regulatory crosstalk between ALSV and the host’s innate immune response, providing valuable insights into the pathogenesis and intervention strategy of emerging segmented flavivirus.

e14600 Background: HB0025 is a recombinant humanized bispecific molecule built on IgG1 that targets the human programmed death ligand 1 (PD-L1) and vascular endothelial growth factor (VEGF, VEGF-A, VEGF165). Here we present the NSCLC results in Phase 1 study. Methods: This ongoing, open-label, multicenter, dose escalation and dose expansion, phase 1 trial to evaluate the safety and efficacy of HB0025 for pts with advanced solid tumors. HB0025 is administered intravenously every 14 days (Q2W). Response was evaluated by RECIST v.1.1 every 8 weeks. Results: As of Dec 25, 2023, 12 (7M/5F) NSCLC pts have received HB0025 at doses of 3mg/kg (n=1), 6mg/kg (n=2), 10mg/kg (n=2), 12mg/kg (n=1), 20mg/kg (n=5), 30mg/kg (n=1). Overall, the median age was 61.5 years, the median number of prior treatment lines was 4. The histologic types include squamous cell (Sq)-NSCLC (2 pts) without EGFR/ALK mutation and non- squamous cell (Nonsq)-NSCLC (10 pts), among of Nonsq-NSCLC 9 pts carrying EGFR/ALK mutation. The 3 pts with EGFR/ALK wild-type gene fail to prior anti-PD-1 treatment, 9 pts with EGFR/ALK gene mutation fail to prior TKI therapy. Among the 12 pts having imaging tumor assessment, the ORR was 25% and DCR was 66.7%, which included 3 partial responses (PR) ,5 stable disease (SD), and 4 progressive disease (PD) according to RECIST v1.1.For the 2 Sq-NSCLC pts, one pt achieved PR with 3mg/kg HB0025 treatment, the other pt achieved SD. For the10 Nonsq-NSCLC pts, there were 2 PR (20mg/kg and 30mg/kg treatment, respectively), 4 SD and 4 PD. Till the report date, the PR status and HB0025 treatment are ongoing to 3 PR pts, which includes 1 Sq-NSCLC pt, and 2 Nonsq-NSCLC pts which one pt doesn’t carry EGFR/ALK mutation. The Sq-NSCLC pt whose maximum tumor regression is 60% achieves PR after 4 cycles of treatment, and the duration of response (DOR) is more than 22 months. The one Nonsq-NSCLC pt whose maximum tumor regression is 74% achieves PR after 2 cycles of treatment, and the DOR is more than 11 months. The other Nonsq-NSCLC pt whose tumor regression is 32% achieves PR after 4 cycles of treatment, and the DOR is more than 2 months. Among the 5 SD pts, 1 Sq-NSCLC pt’s progression-free survival (PFS) is more than 14 months and continusous, 2 Nonsq-NSCLC pts’ PFS is more than 6 months and ongoing. For the 12 pts, 11 pts (91.7%) experienced a treatment related adverse events (TRAEs). The most common TRAEs included proteinuria (50%, 6/12), lymphocyte count decrease (50%, 6/12), blood bilirubin increased (33.3%, 4/12), and blood pressure increased (33.3%, 4/12). TRAEs ≥ grade 3 occurred in 2 (16.7%) pts. No TRAE leading to discontinuation and death. Conclusions: HB0025 monotherapy showed an acceptable safety profile and promising anti-tumor activity for prior heavily treated NSCLC, no matter in TKI-resistant population with EGFR/ALK mutation or population failed to anti-PD-1 treatment. Now Phase II studies of combination chemotherapy are ongoing. Clinical trial information: NCT04678908 .

Abstract Colon cancer ranks as the third most prevalent form of cancer globally, with chemotherapy remaining the primary treatment modality. To mitigate drug resistance and minimize adverse effects associated with chemotherapy, selection of appropriate adjuvants assumes paramount importance. Caffeic acid phenethyl ester (CAPE), a naturally occurring compound derived from propolis, exhibits a diverse array of biological activities. We observed that the addition of CAPE significantly augmented the drug sensitivity of colon cancer cells to oxaliplatin. In SW480 and HCT116 cells, oxaliplatin combined with 10 µM CAPE reduced the IC 50 of oxaliplatin from 14.24 ± 1.03 and 84.16 ± 3.02 µM to 2.11 ± 0.15 and 3.92 ± 0.17 µM, respectively. We then used proteomics to detect differentially expressed proteins in CAPE-treated SW480 cells and found that the main proteins showing changes in expression after CAPE treatment were p62 (SQSTM1) and LC3B (MAP1LC3B). Gene ontology analysis revealed that CAPE exerted antitumor and chemotherapy-sensitization effects through the autophagy pathway. We subsequently verified the differentially expressed proteins using immunoblotting. Simultaneously, the autophagy inhibitor bafilomycin A1 and the mCherry-EGFP-LC3 reporter gene were used as controls to detect the effect of CAPE on autophagy levels. Collectively, the results indicate that CAPE may exert antitumor and chemotherapy-sensitizing effects by inhibiting autophagy, offering novel insights for the development of potential chemosensitizing agents.

Recent advances in targeted protein degradation (TPD) have propelled it to the forefront of small molecular drug discovery. Among these, hydrophobic tagging (HyT) strategies have garnered significant interest. Carbon-based hydrophobic tags have been recognized as effective Hyts for degrading a variety of target proteins. In this study, we introduce a novel class of potential EGFR degraders for the first time, which combine Gefitinib with silicon-based hydrophobic tags (SiHyT). The most promising candidate, degrader 7, which links Gefitinib to a simple TBDPS silyl ether, has shown efficacy in degrading mutant EGFRs via the ubiquitin-proteosome system (UPS) both in vitro and in vivo. Notably, degrader 7 exhibits enhanced oral bioavailability owing to its superior metabolic stability compared to traditional carbon-based Hyts. Mechanistically, it was revealed that degrader 7 disrupts EGFR stability by dissociating the EGFR-HSP90 complex and recruiting E3 ligase, RNF149. More importantly, the potent and selective PD-L1 and BTK degraders were discovered successfully by utilizing the SiHyT strategy. The development of these innovative SiHyT compounds could broaden the repertoire of HyTs, enhancing the future design of TPD agents.

Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) is a zoonotic pathogen primarily transmitted by rodents. Recently, LCMV has been detected in ticks from northeastern China; however, the pathogenicity of this virus in murine models remains to be elucidated. Here, we examined the tick-derived LCMV strain JX14 by inoculating BALB/c mice with 3.5 × 105 pfu of virus. The mice infected with LCMV displayed clinical manifestations including unkempt fur, anorexia, depression, and oliguria, which subsequently resolved by 10 days post infection (dpi) leading to survival of the infection. During the early phase of infection, low viral titers were detected in throat and anal swabs. The excreted virions demonstrated proliferation in Vero cells and were capable of inducing infection in mock-infected mice. Viral RNA was detected in the blood and organs, with detectable levels persisting for up to six months specifically in the heart. A total of 16 amino acid substitutions were identified in the L, Z, and GPC proteins between the original JX14 strain and the strain obtained after six months of infection in BALB/c mice. Pathological lesions were identified in most organs within 5 dpi except for the kidneys and testicles. Interferon gamma (IFN-γ) level was significantly elevated during the early stage of infection and returned to baseline levels within 10 days. This study furnishes significant insights into the pathogenic traits of the tick-derived LCMV strain JX14, thereby potentially providing a valuable in vivo research model for examining the immunological responses elicited by chronic viral infections.