Abstract CD24 confers features of stemness and enhances cell motility in colorectal cancer. It contains numerous O -glycosylation sites but just two putative N -glycosylation sites. The study aimed to mutate N -glycosylation as it thought to be important in mediating many glycoproteins’ function. Site-directed mutagenesis performed to mutate N -glycosylation sites by converting asparagine residues to glutamine. Each site was mutated individually (CD24 N36Q and CD24 N52Q ) and in combination (CD24 N[36,52]Q ) and were overexpressed in HCT116 and SW480 cell lines. The effect of the mutant CD24 on cell viability, cell motility and induction of downstream targets was compared to wild-type CD24 and empty vector control (EVC). Overexpression of the individually mutated clones increased cell motility compared to EVC but was significantly less than that induced by CD24 WT . Overexpression of the double mutant clone resulted in near-complete abrogation of cell motility induction. Unexpectedly, the expression of mutant clones (single and double) increased cell viability. Analysis of downstream targets and F-actin staining demonstrated reduced induction of known CD24 targets by mutant vectors and reduced epithelial-mesenchymal transition. In conclusion, each N -glycosylation site on CD24 contributes partially to induce motility by CD24, and these are additive. Loss of the N -glycosylation results in an unexpected gain of proliferative function. Highlights CD24 is a heavily glycosylated molecule that contains two N-glycosylation sites, and these contribute to the activation of downstream targets and induction of cell motility Each N-glycosylation site contributes partially, and their effects appear to be additive The N-glycosylation sites may exert an inhibitory effect on cell proliferation Much of the CD24 activity is mediated through post-transcriptional effects

Abstract Autoimmune myocarditis is a complex inflammatory response in the heart caused by abnormal immune system activity. We used modern single-cell technologies to analyze the complex gene expression patterns in autoimmune myocarditis tissue samples during several stages of inflammation: acute, subacute, and chronic. We identified the presence of T cell-monocyte complexes in both control and myocarditis samples from different phases using detailed analysis of vast single-cell RNA sequencing data. These complexes were notably more prevalent throughout the acute and subacute stages. Our investigation of gene ontology revealed their involvement in important processes as signal transduction, immune response control, and T cell proliferation and activation. We conducted a thorough analysis of trajectories, uncovering the step-by-step changes of macrophages into clusters linked to antigen presentation, oxidative stress responses, complement activation, and phagocytosis. Furthermore, our examination of neutrophil paths revealed their development and maturation from the bone marrow to distinct functional stages. Our analysis of cellular communication networks revealed consistent and phase-specific patterns, providing valuable information on how immune responses change as the disease progresses. We noted a substantial increase in BAFF signaling from normal to acute phases, while CHEMERIN signaling was upregulated from acute to chronic phases. The discoveries greatly improve our understanding of autoimmune myocarditis on a molecular level, providing a strong basis for creating personalized precision medicine treatments for each patient. Graphical Abstract