ABSTRACT Peroxisomes are single membrane-bound organelles essential for human health, yet the mechanism of peroxisomal biogenesis remains poorly described. Here using a systematic double screening approach, we identified ribosome-binding protein 1, RRBP1, as a novel peroxisomal biogenesis factor in human cells. We showed that the number of peroxisomes and the levels of peroxisomal proteins are reduced by RRBP1 KO in HEK293T cells. In addition, the processing of peroxisomal matrix proteins, such as ACOX1 and thiolase was affected in RRBP1 KO HEK293T cells. Using electron microscopy, we showed that RRBP1, an ER membrane protein, is involved in the maintaining of the long-distance contact sites between ER and peroxisomal membranes, suggesting that the role of RRBP1 in peroxisomal biogenesis is mediated through inter-organellar contact sites. Altogether our results showed that RRBP1 promotes peroxisomal biogenesis in human cells highlighting the power of systematic approaches in discovering novel factors of organellar biogenesis.

ABSTRACT Peroxisomes are membrane-enclosed organelles with important roles in fatty acid breakdown, glycolysis, and biosynthesis of sterols and ether lipids. Defects in peroxisome biogenesis result in severe neurological diseases, such as Zellweger syndrome, neonatal adrenoleukodystrophy, infantile Refsum disease, and myelopathies. However, many aspects of peroxisomal biogenesis are not well understood. Here we investigated delivery of tail-anchored (TA) proteins to peroxisomes in mammalian cells. Using glycosylation assays we showed that peroxisomal TA proteins do not enter ER in both WT and peroxisome-lacking cells. We observed that in cells lacking the essential peroxisome biogenesis factor, PEX19, peroxisomal TA proteins localize mainly to mitochondria. However, in PEX3 KO cells, which lack peroxisomes as well, the endogenous TA protein, ACBD5, does not target mitochondria, suggesting that PEX3 plays an important role in targeting of peroxisomal TA proteins to mitochondria. Finally, to investigate peroxisomal TA protein targeting in cells with fully functional peroxisomes we used a proximity biotinylation approach. We showed that while ER-targeted TA construct was exclusively inserted into the endoplasmic reticulum (ER), peroxisome-targeted TA construct was inserted to both peroxisomes and mitochondria. Thus, in contrast to previous studies, our data suggest that peroxisomal TA proteins do not insert to the ER prior to their delivery to peroxisomes. Instead, mitochondria can play a role in the targeting of TA proteins to peroxisomes.

This study aimed to assess the efficacy of nasal continuous positive airway pressure (CPAP) in term and preterm neonates with respiratory distress by evaluating successful outcomes, identifying factors contributing to treatment failure, and documenting associated complications.