Mitochondrial intermembrane space proteins CHCHD2 and CHCHD10 have roles in diseases affecting motor neurons such as amyotrophic lateral sclerosis, spinal muscular atrophy and axonal neuropathy and in Parkinson's disease, and form a complex of unknown function. Here we address the importance of these two proteins in human motor neurons. We show that gene edited human induced pluripotent stem cells (iPSC) lacking either CHCHD2 or CHCHD10 are viable and can be differentiated into functional motor neurons that fire spontaneous and evoked action potentials. Knockout iPSC and motor neurons sustain mitochondrial ultrastructure and show reciprocal compensatory increases in CHCHD2 or CHCHD10. Knockout motor neurons have largely overlapping transcriptome profiles compared to isogenic control line, in particular for synaptic gene expression. Our results show that absence of CHCHD2 or CHCHD10 does not disrupt functionality, but induces similar modifications in human motor neurons. Thus pathogenic mechanisms may involve loss of synaptic function.

Kindia tick virus (KITV) is a novel multicomponent virus first detected by direct sequencing of Rhipicephalus geigyi ticks in Guinea in 2017. Here, we present a complete coding genome sequence for all four segments of KITV/2017/1. This virus appears to be evolutionarily related to unclassified flaviviruses, such as Alongshan virus### Competing Interest StatementThe authors have declared no competing interest.

ABSTRACT Peroxisomes are single membrane-bound organelles essential for human health, yet the mechanism of peroxisomal biogenesis remains poorly described. Here using a systematic double screening approach, we identified ribosome-binding protein 1, RRBP1, as a novel peroxisomal biogenesis factor in human cells. We showed that the number of peroxisomes and the levels of peroxisomal proteins are reduced by RRBP1 KO in HEK293T cells. In addition, the processing of peroxisomal matrix proteins, such as ACOX1 and thiolase was affected in RRBP1 KO HEK293T cells. Using electron microscopy, we showed that RRBP1, an ER membrane protein, is involved in the maintaining of the long-distance contact sites between ER and peroxisomal membranes, suggesting that the role of RRBP1 in peroxisomal biogenesis is mediated through inter-organellar contact sites. Altogether our results showed that RRBP1 promotes peroxisomal biogenesis in human cells highlighting the power of systematic approaches in discovering novel factors of organellar biogenesis.

ABSTRACT Human nucleotide exchange factors GRPEL1 and GRPEL2 play pivotal roles in the ADP-ATP exchange within the protein folding cycle of mitochondrial HSP70 (mtHSP70), a crucial chaperone facilitating protein import into the mitochondrial matrix. Studies in human cells and mice have indicated that while GRPEL1 serves as an essential co-chaperone for mtHSP70, GRPEL2 has a role regulated by stress. However, the precise structural and biochemical mechanisms underlying the distinct functions of the GRPEL proteins have remained elusive. In our study, we present evidence revealing that ADP-bound mtHSP70 exhibits remarkably higher affinity for GRPEL1 compared to GRPEL2, with the latter experiencing a notable decrease in affinity upon ADP binding. Utilizing Alphafold modelling, we propose that the interaction between GRPEL1 and mtHSP70 can induce the opening of the nucleotide binding cleft of the chaperone, thereby facilitating the release of ADP, whereas GRPEL2 lacks this capability. This study elucidates how ADP binding to mtHSP70 enhances its affinity for GRPEL1, contrasting with its interaction with GRPEL2. Additionally, our findings suggest that the redox-regulated Cys87 residue in GRPEL2 does not play a role in dimerization but rather reduces its affinity for mtHSP70. Our findings on the structural and functional disparities between GRPEL1 and GRPEL2 may have implications for mitochondrial protein folding and import processes under varying cellular conditions.

ABSTRACT Peroxisomes are membrane-enclosed organelles with important roles in fatty acid breakdown, glycolysis, and biosynthesis of sterols and ether lipids. Defects in peroxisome biogenesis result in severe neurological diseases, such as Zellweger syndrome, neonatal adrenoleukodystrophy, infantile Refsum disease, and myelopathies. However, many aspects of peroxisomal biogenesis are not well understood. Here we investigated delivery of tail-anchored (TA) proteins to peroxisomes in mammalian cells. Using glycosylation assays we showed that peroxisomal TA proteins do not enter ER in both WT and peroxisome-lacking cells. We observed that in cells lacking the essential peroxisome biogenesis factor, PEX19, peroxisomal TA proteins localize mainly to mitochondria. However, in PEX3 KO cells, which lack peroxisomes as well, the endogenous TA protein, ACBD5, does not target mitochondria, suggesting that PEX3 plays an important role in targeting of peroxisomal TA proteins to mitochondria. Finally, to investigate peroxisomal TA protein targeting in cells with fully functional peroxisomes we used a proximity biotinylation approach. We showed that while ER-targeted TA construct was exclusively inserted into the endoplasmic reticulum (ER), peroxisome-targeted TA construct was inserted to both peroxisomes and mitochondria. Thus, in contrast to previous studies, our data suggest that peroxisomal TA proteins do not insert to the ER prior to their delivery to peroxisomes. Instead, mitochondria can play a role in the targeting of TA proteins to peroxisomes.

ABSTRACT Cardiolipin (CL) is an essential phospholipid for mitochondrial structure and function. Here we present a small mitochondrial protein, NERCLIN, as a negative regulator of CL homeostasis and mitochondrial ultrastructure. Primate-specific NERCLIN is expressed ubiquitously from GRPEL2 locus on a tightly regulated low level, but induced by heat stress. NERCLIN overexpression severely disrupts mitochondrial cristae structure and induces mitochondrial fragmentation. Proximity labeling suggested interactions of NERCLIN with CL synthesis and prohibitin complexes on the matrix side of the inner mitochondrial membrane. Lipid analysis indicated that NERCLIN regulates mitochondrial CL content. The regulation may occur directly through interaction with PTPMT1, a proximal partner on the CL synthesis pathway, as its product phosphatidylglycerol was also reduced by NERCLIN. We propose that NERCLIN contributes to stress-induced adaptation of mitochondrial dynamics and turnover by regulating the mitochondrial CL content. Our findings add NERCLIN to the group of recently identified small mitochondrial proteins with important regulatory functions.