ABSTRACT COVID-19 pandemic has highlighted the need of antiviral molecules against coronaviruses. Plants are an endless source of active compounds. In the current study, we investigated the potential antiviral effects of Hypericum perforatum L.. Its extract contained two major metabolites belonging to distinct chemical classes, hypericin (HC) and hyperforin (HF). First, we demonstrated that HC inhibited HCoV-229E at the entry step by directly targeting the viral particle in a light-dependent manner. While antiviral properties have already been described for HC, the study here showed for the first time that HF has pan-coronavirus antiviral capacity. Indeed, HF was highly active against Alphacoronavirus HCoV-229E (IC 50 value of 1.10 µM), and Betacoronaviruses SARS-CoV-2 (IC 50 value of of 0.24 to 0.98 µM), SARS-CoV (IC 50 value of 1.01 µM) and MERS-CoV (IC 50 value of 2.55 µM). Unlike HC, HF was active at a post-entry step, most likely the replication step. Antiviral activity of HF on HCoV-229E and SARS-CoV-2 was confirmed in primary human respiratory epithelial cells. Furthermore, in vitro combination assay of HF with remdesivir showed that their association was additive, which was encouraging for a potential therapeutical association. As HF was active on both Alpha- and Betacoronaviruses, a cellular target was hypothesized. Heme oxygenase 1 (HO-1) pathway, a potential target of HF, has been investigated but the results showed that HF antiviral activity against HCoV-229E was not dependent on HO-1. Collectively, HF is a promising antiviral candidate in view of our results and pharmacokinetics studies already published in animal models or in human.

Recent emergence of direct acting antivirals (DAAs) targeting hepatitis C virus (HCV) proteins has considerably enhanced the success of antiviral therapy. However, the appearance of DAA resistant-associated variants is a cause of treatment failure, and the high cost of DAAs renders the therapy not accessible in countries with inadequate medical infrastructures. Therefore, search for new inhibitors and with lower cost of production should be pursued. In this context, crude extract of Juncus maritimus Lam. was shown to exhibit high antiviral activity against HCV in cell culture. Bio-guided fractionation allowed isolating and identifying the active compound, dehydrojuncusol. A time-of-addition assay showed that dehydrojuncusol significantly inhibited HCV infection when added after virus inoculation of HCV genotype 2a (EC50 = 1.35 µM). This antiviral activity was confirmed with a HCV subgenomic replicon and no effect on HCV pseudoparticle entry was observed. Antiviral activity of dehydrojuncusol was also demonstrated in primary human hepatocytes. No in vitro toxicity was observed at active concentrations. Dehydrojuncusol is also efficient on HCV genotype 3a and can be used in combination with sofosbuvir. Interestingly, dehydrojuncusol was able to inhibit replication of two frequent daclatasvir resistant mutants (L31M or Y93H in NS5A). Finally, resistant mutants to dehydrojuncusol were obtained and showed that HCV NS5A protein is the target of the molecule. In conclusion, dehydrojuncusol, a natural compound extracted from J. maritimus, inhibits infection of different HCV genotypes by targeting NS5A protein and is active against HCV resistant variants frequently found in patients with treatment failure.