We developed and validated a model to estimate the risks of mutations in the mismatch repair (MMR) genes MLH1, MSH2, and MSH6 based on personal and family history of cancer.Data were analyzed from 4539 probands tested for mutations in MLH1, MSH2, and MSH6. A multivariable polytomous logistic regression model (PREMM(1,2,6)) was developed to predict the overall risk of MMR gene mutations and the risk of mutation in each of the 3 genes. The discriminative ability of the model was validated in 1827 population-based colorectal cancer (CRC) cases.Twelve percent of the original cohort carried pathogenic mutations (204 in MLH1, 250 in MSH2, and 71 in MSH6). The PREMM(1,2,6) model incorporated the following factors from the probands and first- and second-degree relatives (odds ratio; 95% confidence intervals [CIs]): male sex (1.9; 1.5-2.4), a CRC (4.3; 3.3-5.6), multiple CRCs (13.7; 8.5-22), endometrial cancer (6.1; 4.6-8.2), and extracolonic cancers (3.3; 2.4-4.6). The areas under the receiver operating characteristic curves were 0.86 (95% CI, 0.82-0.91) for MLH1 mutation carriers, 0.87 (95% CI, 0.83-0.92) for MSH2, and 0.81 (95% CI, 0.69-0.93) for MSH6; in validation, they were 0.88 for the overall cohort (95% CI, 0.86-0.90) and the population-based cases (95% CI, 0.83-0.92).We developed the PREMM(1,2,6) model, which incorporates information on cancer history from probands and their relatives to estimate an individual's risk of mutations in the MMR genes MLH1, MSH2, and MSH6. This Web-based decision making tool can be used to assess risk of hereditary CRC and guide clinical management.

Molecular genetic testing is recommended for diagnosis of inherited cardiac disease, to guide prognosis and treatment, but access is often limited by cost and availability. Recently introduced high-throughput bench-top DNA sequencing platforms have the potential to overcome these limitations.We evaluated two next-generation sequencing (NGS) platforms for molecular diagnostics. The protein-coding regions of six genes associated with inherited arrhythmia syndromes were amplified from 15 human samples using parallelised multiplex PCR (Access Array, Fluidigm), and sequenced on the MiSeq (Illumina) and Ion Torrent PGM (Life Technologies). Overall, 97.9% of the target was sequenced adequately for variant calling on the MiSeq, and 96.8% on the Ion Torrent PGM. Regions missed tended to be of high GC-content, and most were problematic for both platforms. Variant calling was assessed using 107 variants detected using Sanger sequencing: within adequately sequenced regions, variant calling on both platforms was highly accurate (Sensitivity: MiSeq 100%, PGM 99.1%. Positive predictive value: MiSeq 95.9%, PGM 95.5%). At the time of the study the Ion Torrent PGM had a lower capital cost and individual runs were cheaper and faster. The MiSeq had a higher capacity (requiring fewer runs), with reduced hands-on time and simpler laboratory workflows. Both provide significant cost and time savings over conventional methods, even allowing for adjunct Sanger sequencing to validate findings and sequence exons missed by NGS.MiSeq and Ion Torrent PGM both provide accurate variant detection as part of a PCR-based molecular diagnostic workflow, and provide alternative platforms for molecular diagnosis of inherited cardiac conditions. Though there were performance differences at this throughput, platforms differed primarily in terms of cost, scalability, protocol stability and ease of use. Compared with current molecular genetic diagnostic tests for inherited cardiac arrhythmias, these NGS approaches are faster, less expensive, and yet more comprehensive.

ABSTRACT Background Androgen deprivation therapy (ADT) is a frontline treatment for prostate cancer but often leads to the development of castration resistant prostate cancer (CRPC). This causes tumors to regrow and metastasize, despite ongoing treatment, and impacts negatively on patient survival. ADT is known to stimulate the accumulation of immunosuppressive cells like protumoral tumor-associated macrophages (TAMs), myeloid-derived suppressor cells and regulatory T cells in prostate tumors, as well as hypofunctional T cells. Protumoral TAMs have been shown to accumulate around tumor blood vessels during chemotherapy and radiotherapy, where they drive tumor relapse. Our aim was to see if such perivascular (PV) TAMs accumulated in ADT-treated prostate tumors prior to CRPC, and, if so, to selectively target these PV cells with a potent immunostimulant, interferon beta (IFNβ), an attempt to stimulate anti-tumor immunity and delay CRPC. Methods We first used quantitative, multiplex immunofluorescence to assess the effects of ADT on distribution and activation status of TAMs, CD4+ T cells, CD8+ T cells and NK cells in mouse and human prostate tumors. We then used antibody-coated, lipid nanoparticles to selectively target a STING agonist, 2′3′-cGAMP (cGAMP), to PV TAMs in mouse prostate tumors during ADT. Results TAMs accumulated at high density around blood vessels in ADT-treated primary mouse and human prostate tumors prior to CRPC, where they expressed markers of a protumoral phenotype, folate receptor beta (FRβ), MRC1 (CD206), SIGLEC1 (CD169) and VISTA. Additionally, higher numbers of inactive (PD-1-) CD8+ T cells and reduced numbers of active (CD69+) NK cells were also present in PV tumor areas after ADT. LNPs coated with antibody to FRβ selectively delivered cGAMP to PV TAMs in ADT-treated tumors where they activated STING and expression of IFNβ by these cells. This resulted in a marked increase in the density of active CD4+ T cells, CD8+T cells and NK cells in PV tumor areas, and significantly delayed in the onset of CRPC. Conclusion Together, our data indicate that targeting a STING agonist to PV TAMs could be used to extend the treatment window for ADT in prostate cancer. KEY MESSAGES What is already known about the topic Androgen deprivation therapy (ADT) is a frontline treatment for prostate cancer. However, tumors often develop resistance and start to regrow and metastasize – a condition called castration resistance prostate cancer (CRPC). Prostate cancer is considered to be an immunologically ‘cold’ tumor type and while ADT stimulates tumor infiltration by cytotoxic (CD8+) T cells, they are largely hypofunctional, possibly due to the immunosuppressive tumor microenvironment. What this study adds This study is the first to demonstrate that FRβ+ macrophages with a immunosuppressive phenotype accumulate around blood vessels in mouse and human prostate tumors during ADT, prior to the onset of CRPC. Lipid nanoparticles coated with an antibody to FRβ+ were then used to deliver a STING agonist selectively to these perivascular (PV) cells during ADT. This triggered STING signalling and the release of the potent immunostimulant, interferon beta, by PV macrophages, which then activated tumour-infiltrating CD4+ and CD8+ T cells, and delayed the onset of CRPC. How this study might affect research, practice or policy The delivery of an immunostimulant specifically to PV regions of tumors represents a new, more targeted form of immunotherapy that ensures the activation of T cells as soon as they cross the vasculature into tumors. This new approach could be used to extend the treatment window for neoadjuvant ADT in men with localised prostate tumors. In doing so, it would delay/circumvent the need for additional treatments like radiotherapy and/or or prostatectomy.