Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is the leading cause of death from infection worldwide1. The only available vaccine, BCG (Bacillus Calmette-Guérin), is given intradermally and has variable efficacy against pulmonary tuberculosis, the major cause of mortality and disease transmission1,2. Here we show that intravenous administration of BCG profoundly alters the protective outcome of Mtb challenge in non-human primates (Macaca mulatta). Compared with intradermal or aerosol delivery, intravenous immunization induced substantially more antigen-responsive CD4 and CD8 T cell responses in blood, spleen, bronchoalveolar lavage and lung lymph nodes. Moreover, intravenous immunization induced a high frequency of antigen-responsive T cells across all lung parenchymal tissues. Six months after BCG vaccination, macaques were challenged with virulent Mtb. Notably, nine out of ten macaques that received intravenous BCG vaccination were highly protected, with six macaques showing no detectable levels of infection, as determined by positron emission tomography-computed tomography imaging, mycobacterial growth, pathology and granuloma formation. The finding that intravenous BCG prevents or substantially limits Mtb infection in highly susceptible rhesus macaques has important implications for vaccine delivery and clinical development, and provides a model for defining immune correlates and mechanisms of vaccine-elicited protection against tuberculosis.

The grading of recommendation, assessment, development and evaluation (GRADE) approach is widely implemented in health technology assessment and guideline development organisations throughout the world. GRADE provides a transparent approach to reaching judgements about the quality of evidence on the effects of a health care intervention, but is complex and therefore challenging to apply in a consistent manner.We developed a checklist to guide the researcher to extract the data required to make a GRADE assessment. We applied the checklist to 29 meta-analyses of randomised controlled trials on the effectiveness of health care interventions. Two reviewers used the checklist for each paper and used these data to rate the quality of evidence for a particular outcome.For most (70%) checklist items, there was good agreement between reviewers. The main problems were for items relating to indirectness where considerable judgement is required.There was consistent agreement between reviewers on most items in the checklist. The use of this checklist may be an aid to improving the consistency and reproducibility of GRADE assessments, particularly for inexperienced users or in rapid reviews without the resources to conduct assessments by two researchers independently.

ABSTRACT We previously described that low-dose Mycobacterium tuberculosis infection in cynomolgus macaques results in a spectrum of disease similar to that of human infection: primary disease, latent infection, and reactivation tuberculosis (S. V. Capuano III, D. A. Croix, S. Pawar, A. Zinovik, A. Myers, P. L. Lin, S. Bissel, C. Fuhrman, E. Klein, and J. L. Flynn, Infect. Immun. 71: 5831-5844, 2003). This is the only established model of latent infection, and it provides a unique opportunity to understand host and pathogen differences across of range of disease states. Here, we provide a more extensive and detailed characterization of the gross pathology, microscopic histopathology, and immunologic characteristics of monkeys in each clinical disease category. The data underscore the similarities between human and nonhuman primate M. tuberculosis infection. Furthermore, we describe novel methods of quantifying gross pathology and bacterial burden that distinguish between active disease and latent infection, and we extend the usefulness of this model for comparative studies. Early in infection, an abnormal chest X ray, M. tuberculosis growth by gastric aspirate, and increased mycobacterium-specific gamma interferon (IFN-γ) in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and bronchoalveolar lavage (BAL) cells were associated with the development of active disease. At necropsy, disease was quantified with respect to pathology and bacterial numbers. Microscopically, a spectrum of granuloma types are seen and differ with disease type. At necropsy, monkeys with active disease had more lung T cells and more IFN-γ from PBMC, BAL, and mediastinal lymph nodes than monkeys with latent infection. Finally, we have observed a spectrum of disease not only in monkeys with active disease but also in those with latent infection that provides insight into human latent tuberculosis.

The objective was to assess the impact of new guidance on the conduct of narrative synthesis in systematic reviews of effectiveness, by means of a blinded comparison of guidance-led narrative synthesis against a meta-analysis of the same study data.The conclusions of the two syntheses were broadly similar. However, differences between the approaches meant that conclusions about the impact of moderators of effect appeared stronger when derived from the meta-analysis, whereas implications for future research appeared more extensive when derived from the narrative synthesis. These findings emphasize that a rigorously conducted narrative synthesis can add meaning and value to the findings of meta-analysis.The guidance framework provided a useful vehicle for structuring a narrative synthesis and increasing transparency and rigour of the process.While there may be risks with overinterpretation of study data, the framework, tools and techniques described in the guidance appear to increase the transparency and reproducibility of narrative synthesis.

The sensitivity of the MVista Histoplasma antigen enzyme immunoassay (MiraVista Diagnostics) has been evaluated in disseminated histoplasmosis in patients with AIDS and in the "epidemic" form of acute pneumonia. Moreover, there has been no evaluation of the sensitivity of antigenemia detection in disseminated histoplasmosis after the implementation of methods to dissociate immune complexes and denature released antibodies. The goal of this study was to determine the sensitivity of the current antigen assay in different categories of histoplasmosis.Urine and serum specimens obtained from 218 patients with histoplasmosis and 229 control subjects, including 30 with blastomycosis, were tested.Antigenuria was detected in 91.8% of 158 patients with disseminated histoplasmosis, 83.3% of 6 patients with acute histoplasmosis, 30.4% of 46 patients with subacute histoplasmosis, and 87.5% of 8 patients with chronic pulmonary histoplasmosis; antigenemia was present in 100% of 31 tested cases of disseminated histoplasmosis. Among patients with disseminated cases, antigenuria was detected more often and at higher concentrations in immunocompromised patients and those with severe disease. Specificity was 99.0% for patients with nonfungal infections (n = 130) and in healthy subjects (n = 69), but cross-reactivity occurred in 90% of patients with blastomycosis.The sensitivity of antigen detection in disseminated histoplasmosis is higher in immunocompromised patients than in immunocompetent patients and in patients with more severe illness. The sensitivity for detection of antigenemia is similar to that for antigenuria in disseminated infection.

Human challenge experiments could greatly accelerate the development of a tuberculosis (TB) vaccine. Human challenge for tuberculosis requires a strain that can both replicate in the host and be reliably cleared. To accomplish this, we designed Mycobacterium tuberculosis (Mtb) strains featuring up to three orthogonal kill switches, tightly regulated by exogenous tetracyclines and trimethoprim. The resultant strains displayed immunogenicity and antibiotic susceptibility similar to wild-type Mtb under permissive conditions. In the absence of supplementary exogenous compounds, the strains were rapidly killed in axenic culture, mice and nonhuman primates. Notably, the strain that contained three kill switches had an escape rate of less than 10 -10 per genome per generation and displayed no relapse in a SCID mouse model. Collectively, these findings suggest that this engineered Mtb strain could be a safe and effective candidate for a human challenge model.

Mucosal associated invariant T (MAIT) cells recognize and can directly destroy bacterially infected cells. While a role for MAIT cells has been suggested in several in vitro and in vivo models of M.tuberculosis (Mtb) infection, these studies have often focused on MAIT cells within the peripheral blood or are cross-sectional studies rather than longitudinal studies. The role of MAIT cells within granulomas and other sites of Mtb infection is relatively unknown. Furthermore, how HIV/SIV infection might impair MAIT cells at the sites of Mtb infection has not been determined. Using a Mauritian cynomolgus macaque (MCM) model system, we phenotyped MAIT cells in the peripheral blood and BAL prior to and during infection with SIVmac239. To characterize the role of MAIT cells within granulomas, SIV+ and -naive MCM were infected with a low dose of Mtb for 6 weeks. MAIT cell frequency and function was examined within the peripheral blood, distal airways, as well as within Mtb-affected lymph nodes (LN) and tissues. Surprisingly, we found no evidence of MAIT cell responsiveness to Mtb within granulomas. Additionally, MAIT cells only minimally responded to mycobacterial stimulus in ex vivo functional assays. In contrast, most MAIT cell activation seemed to occur in samples with highly active SIV replication, including blood and SIV-infected LN. Finally, the ability of MAIT cells to secrete TNFalpha; (TNF) was impaired during SIV and Mtb co-infection, indicating that the two pathogens together could have a synergistically deleterious effect on MAIT cell function. The effect of this functional impairment on overall TB disease burden was unclear, but might be deleterious if MAIT cells are needed to fully activate antimycobacterial immune cells within the granulomas.

Abstract Tuberculosis (TB) is a major cause of morbidity and mortality worldwide despite widespread intradermal (ID) BCG vaccination in newborns. We previously demonstrated that changing the route and dose of BCG vaccination from 5ξ10 5 CFU ID to 5ξ10 7 CFU intravenous (IV) resulted in prevention of infection and disease in a rigorous, highly susceptible non-human primate model of TB. Identifying the immune mechanisms of protection for IV BCG will facilitate development of more effective vaccines against TB. Here, we depleted select lymphocyte subsets in IV BCG vaccinated macaques prior to Mtb challenge to determine the cell types necessary for that protection. Depletion of CD4 T cells or all CD8α expressing lymphoycytes (both innate and adaptive) resulted in loss of protection in most macaques, concomitant with increased bacterial burdens (∼4-5 log10 thoracic CFU) and dissemination of infection. In contrast, depletion of only adaptive CD8αβ+ T cells did not significantly reduce protection against disease. Our results demonstrate that CD4 T cells and innate CD8α+ lymphocytes are critical for IV BCG-induced protection, supporting investigation of how eliciting these cells and their functions can improve future TB vaccines. One Sentence Summary Antibody depletion of lymphocytes in rhesus macques demonstrates key roles for CD4 T cells and innate-like CD8α+ lymphocytes in conferring sterilizing immunity against tuberculosis following intravenous BCG vaccination.

ABSTRACT Immunological priming – either in the context of prior infection or vaccination – elicits protective responses against subsequent Mycobacterium tuberculosis ( Mtb ) infection. However, the changes that occur in the lung cellular milieu post-primary Mtb infection and their contributions to protection upon reinfection remain poorly understood. Here, using clinical and microbiological endpoints in a non-human primate reinfection model, we demonstrate that prior Mtb infection elicits a long-lasting protective response against subsequent Mtb exposure and that the depletion of CD4 + T cells prior to Mtb rechallenge significantly abrogates this protection. Leveraging microbiologic, PET-CT, flow cytometric, and single-cell RNA-seq data from primary infection, reinfection, and reinfection-CD4 + T cell depleted granulomas, we identify differential cellular and microbial features of control. The data collectively demonstrate that the presence of CD4 + T cells in the setting of reinfection results in a reduced inflammatory lung milieu characterized by reprogrammed CD8 + T cell activity, reduced neutrophilia, and blunted type-1 immune signaling among myeloid cells, mitigating Mtb disease severity. These results open avenues for developing vaccines and therapeutics that not only target CD4 + and CD8 + T cells, but also modulate innate immune cells to limit Mtb disease.