Macrophages play an essential role in the resolution of tissue damage through removal of necrotic cells, thus paving the way for tissue regeneration. Macrophages also directly support the formation of new tissue to replace the injury, through their acquisition of an anti-inflammatory, or M2, phenotype, characterized by a gene expression program that includes IL-10, the IL-13 receptor, and arginase 1. We report that deletion of two CREB-binding sites from the Cebpb promoter abrogates Cebpb induction upon macrophage activation. This blocks the downstream induction of M2-specific Msr1 , Il10 , II13ra , and Arg-1 genes, whereas the inflammatory (M1) genes Il1 , Il6 , Tnfa , and Il12 are not affected. Mice carrying the mutated Cebpb promoter (βΔCre) remove necrotic tissue from injured muscle, but exhibit severe defects in muscle fiber regeneration. Conditional deletion of the Cebpb gene in muscle cells does not affect regeneration, showing that the C/EBPβ cascade leading to muscle repair is muscle-extrinsic. While βΔCre macrophages efficiently infiltrate injured muscle they fail to upregulate Cebpb , leading to decreased Arg-1 expression. CREB-mediated induction of Cebpb expression is therefore required in infiltrating macrophages for upregulation of M2-specific genes and muscle regeneration, providing a direct genetic link between these two processes.

Abstract Aged haematopoietic stem cells (HSCs) generate more myeloid cells and fewer lymphoid cells compared with young HSCs, contributing to decreased adaptive immunity in aged individuals. However, it is not known how intrinsic changes to HSCs and shifts in the balance between biased HSC subsets each contribute to the altered lineage output. Here, by analysing HSC transcriptomes and HSC function at the single-cell level, we identify increased molecular platelet priming and functional platelet bias as the predominant age-dependent change to HSCs, including a significant increase in a previously unrecognized class of HSCs that exclusively produce platelets. Depletion of HSC platelet programming through loss of the FOG-1 transcription factor is accompanied by increased lymphoid output. Therefore, increased platelet bias may contribute to the age-associated decrease in lymphopoiesis.

Basophils constitute a rare population of granulocytes with key functions in allergies, immunodeficiencies and cancer. The scarcity of basophils in the human blood and tissues constitutes a considerable limit for the study of these cells. Interleukin-3 (IL-3) is a cytokine that stimulates both the differentiation and the expansion of basophils from bone marrow (BM) precursors by positively regulating the expression of the IL3Ra receptor. We have standardized an in vitro differentiation protocol of mouse basophils (mBaso) from BM precursors through culture in presence of IL-3 for 10 days followed by cell sorting. At the end of the 10-day differentiation, a considerable number of mBaso can be obtained and cell sorting procedures further improved the isolation of an extraordinarily pure (>98%) and vital FcεR1+ CD11c- c-kit- mBaso population. Phenotypic analysis revealed that terminally differentiated (day 10) unsorted mBaso cultured for 24 hours showed a decrease in basophilic lineage (c-kit-) and an increase of mastocytic lineage (c-kit+) and reduced the expression of basophil markers FcεRI, CD49b and CD200R either in absence of stimuli or following activation with the alarmin IL-33, indicating cell dedifferentiation. In contrast, terminally differentiated and FcεR1+ CD11c- c-kit- sorted mBaso do not dedifferentiate in mast cells when placed in culture, and responded to IL-33 stimulation by up-regulating the activation marker CD63 without down-modulation of FcεRI and CD200R3. These evidences highlight that in vitro differentiation followed by cell sorting is a useful method to obtain elevated numbers of highly pure mBaso that preserve their lineage markers and thus are suitable for conducting the desired functional studies.