Abstract Gram-negative bacteria release outer membrane vesicles (OMVs) into the extracellular environment. Recent studies recognized these vesicles as vectors to horizontal gene transfer, however the parameters that mediate OMVs transfer within bacterial communities remain unclear. The present study highlights for the first time the transfer of plasmids containing resistance genes via OMVs derived from Klebsiella pneumoniae ( K. pneumoniae ). This mechanism confers DNA protection and it is plasmid copy number dependent with a ratio of 3.6 time among high copy-number plasmid (pGR) versus low copy number plasmid (PRM) and the transformation efficiency was 3.6 times greater. Therefore, the DNA amount in the vesicular lumen and the efficacy of horizontal gene transfer was strictly dependent on the identity of the plasmid. Moreover, the role of K. pneumoniae -OMVs in interspecies transfer was described. The transfer ability was not related to the phylogenetic characteristics between the donor and the recipient species. K. pneumoniae -OMVs transferred plasmid to Escherichia coli , Salmonella enterica , Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia cepacia . These findings address the pivotal role of K. pneumoniae -OMVs as vectors for antimicrobial resistance genes spread, contributing to the development of antibiotic resistance in the microbial communities. Author summary K. pneumoniae is an important opportunistic pathogen that affects several host districts, in particular respiratory and urinary tracts. Hospital-acquired K. pneumoniae infections lead to a 50% mortality rate correlated with rapid acquisition of antibiotic resistance. Currently, the increasing rate of antibiotic resistance among K. pneumoniae isolates is a major concern worldwide. The spread of multidrug-resistant K. pneumoniae strains renders current therapeutic options ineffective. Like all Gram-negative bacteria, K. pneumoniae secretes OMVs. OMVs are spherical structures, with a diameter between 50-250 nm, originating from the outer membrane. OMVs biogenesis allows bacteria to interact with the external environment, increasing bacterial survival under stressful conditions and regulating microbial interactions within bacterial communities. Few evidence recognized OMVs as vectors for horizontal gene transfer, contributing to the spread of resistance. In this scenario, the present study examines the potential role of K. pneumoniae -OMVs in inter- and intra-species diffusion of ß-lactam resistance.

Background and Purpose Accumulating evidence suggests circulating microRNAs (miRNAs) are important regulators of biological processes involved in COVID‐19 complications. We sought to assess whether circulating miRNAs are associated with COVID‐19 clinical phenotype and outcome. Experimental Approach To discover signatures of circulating miRNAs associated with COVID‐19 disease severity and mortality, miRNA quantification was performed on plasma samples collected at hospital admission from a cohort of 106 patients with mild or severe COVID‐19. Variable importance projection scoring with partial least squared discriminant analysis and Random Forest Classifier were employed to identify key miRNAs associated with COVID‐19 severity. ROC analysis was performed to detect promising miRNA able to discriminate between mild and severe COVID status. Key Results Hsa‐miR‐1‐3p was the most promising miRNA in differentiating COVID‐19 patients who developed severe, rather than mild, disease. Hsa‐miR‐1‐3p levels rose with increasing disease severity, and the highest levels were associated with prolonged hospital length of stay and worse survival. Longitudinal miRNA profiling demonstrated that plasma hsa‐miR‐1‐3p expression levels were significantly increased in patients during acute infection compared with those observed 6 months after the disease onset. Specific blockade of miR‐1‐3p in SARS‐CoV‐2–infected endothelial cells decreased up‐regulation of genes involved in endothelial‐to‐mesenchymal transition, inflammation and thrombosis. Furthermore, miR‐1‐3p inhibition reversed the impaired angiogenic capacity induced by plasma from patients with severe COVID‐19. Conclusion and Implications Our data establish a novel role for miR‐1‐3p in the pathogenesis of COVID‐19 infection and provide a strong rationale for its usefulness as early prognostic biomarkers of severity status and survival.

The growing threat of viral infections requires innovative therapeutic approaches to safeguard human health. Nanomaterials emerge as a promising solution to overcome the limitations associated with conventional therapies. The eco-friendly synthesis of silver nanoparticles (AgNPs) currently represents a method that guarantees antimicrobial efficacy, safety, and cost-effectiveness. This study explores the use of AgNPs derived from the peel (Lp-AgNPs) and juice (Lj-AgNPs) Citrus limon "Ovale di Sorrento", cultivars of the Campania region. The antiviral potential was tested against viruses belonging to the Coronaviridae and Herpesviridae. AgNPs were synthesized by reduction method using silver nitrate solution mixed with aqueous extract of C. limon peel and juice. The formation of Lp-AgNPs and Lj-AgNPs was assessed using a UV-Vis spectrophotometer. The size, ζ-potential, concentration, and morphology of AgNPs were evaluated by dynamic light scattering (DLS), nanoparticle tracking analysis (NTA), and field emission-scanning electron microscopy (FE-SEM). Cytotoxicity was evaluated in a concentration range between 500 and 7.8 µg/mL on VERO-76 and HaCaT cells, with the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium test bromide (MTT). Antiviral activity consisted of virus pre-treatment, co-treatment, cellular pre-treatment, and post-infection tests versus HSV-1 and SARS-CoV-2 at a multiplicity of infections (MOI) of 0.01. Plaque reduction assays and real-time PCR provided data on the antiviral potential of tested compounds. Lp-AgNPs and Lj-AgNPs exhibited spherical morphology with respective diameters of 60 and 92 nm with concentrations of 4.22 and 4.84 × 10

Background/Objectives: ESKAPE pathogens (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, and Enterobacter spp.) pose a serious public health threat as they are resistant to multiple antimicrobial agents. Bloodstream infections (BSIs) caused by ESKAPE bacteria have high mortality rates due to the limited availability of effective antimicrobials. This study aimed to evaluate the prevalence and susceptibility of ESKAPE pathogens causing BSIs over three years in a large tertiary hospital in Salerno. Methods: Conducted at the Clinical Microbiology Laboratory of San Giovanni di Dio e ‘‘Ruggi D’Aragona’’ Hospital from January 2020 to December 2022, blood culture samples from different departments were incubated in the BD BACTEC™ system for 5 days. Species identification was performed using MALDI-TOF MS, and antimicrobial resistance patterns were determined by the VITEK2 system. Results: Out of 3197 species isolated from positive blood cultures, 38.7% were ESKAPE bacteria. Of these, 59.9% were found in blood culture samples taken from men, and the most affected age group was those aged >60 years. (70.6%). Staphylococcus aureus was the main BSI pathogen (26.3%), followed by Klebsiella pneumoniae (15.8%). Significant resistance rates were found, including 35% of Staphylococcus aureus being resistant to oxacillin and over 90% of Acinetobacter baumannii being resistant to carbapenems. Conclusions: These results highlight the urgent need for antimicrobial stewardship programs to prevent incurable infections.

Not available.