Abstract The hippocampus is involved in processing a variety of mnemonic computations specifically the spatiotemporal components and emotional dimensions of contextual memory. 1–3 Recent studies have demonstrated vast structural and functional heterogeneity along the dorsal-ventral axis 1, 5 of the hippocampus. The ventral hippocampus has been shown to be important in the processing of emotion and valence. 6–9 Here, we combine transgenic and all-virus based activity-dependent tagging strategies to visualize multiple valence-specific engrams in the vHPC and demonstrate two partially segregated cell populations and projections that respond to appetitive and aversive experiences. Next, using RNA sequencing and DNA methylation sequencing approaches, we find that vHPC appetitive and aversive engram cells display distinct transcriptional programs and DNA methylation landscapes compared to a neutral engram population. Additionally, while optogenetic manipulation of tagged cell bodies in vHPC is not sufficient to drive appetitive or aversive behavior in real-time place preference, stimulation of tagged vHPC terminals projecting to the amygdala and nucleus accumbens (NAc), but not the prefrontal cortex (PFC), had the capacity drive preference and avoidance. These terminals can also undergo a “switch” or “reset” in their capacity to drive either, thereby demonstrating their adaptable contributions to behavior. We conclude that the vHPC contains genetically, cellularly, and behaviorally distinct populations of cells processing appetitive and aversive memory engrams. Together, our findings provide a novel means by which to visualize multiple engrams within the same brain and point to their unique genetic signatures as reference maps for the future development of new therapeutic strategies. One sentence summary The hippocampus contains neurons that correspond to positive and negative engrams, which are segregated by their molecular, cellular, and projection-specific features.

I. Abstract The theta rhythm, a quasi-periodic 4-10 Hz oscillation, is observed during memory processing in the hippocampus, with different phases of theta hypothesized to separate independent streams of information related to the encoding and recall of memories. At the cellular level, the discovery of hippocampal memory cells (engram neurons), as well as the modulation of memory recall through optogenetic activation of these cells, has provided evidence that certain memories are stored, in part, in a sparse ensemble of neurons in the hippocampus. In previous research, however, engram reactivation has been carried out using open loop stimulation at fixed frequencies; the relationship between engram neuron reactivation and ongoing network oscillations has not been taken into consideration. To address this concern, we implemented a closed-loop reactivation of engram neurons that enabled phase-specific stimulation relative to theta oscillations in the local field potential. Using this real-time approach, we tested the impact of activating engram neurons during the peak (encoding phase) and trough (recall phase) of theta oscillations. Consistent with previously hypothesized functions of theta oscillations in memory function, we show that stimulating engram neurons at the trough of theta is more effective in eliciting behavioral recall than either fixed frequency stimulation or stimulation at the peak of theta. Moreover, phase-specific trough stimulation is accompanied by an increase in the coupling between gamma and theta oscillations in CA1 hippocampus. Oure results provide a causal link between phase-specific activation of engram cells and the behavioral expression of memory.

Abstract Theta and gamma oscillations in the hippocampus have been hypothesized to play a role in the encoding and retrieval of memories. Recently, it was shown that an intrinsic fast gamma mechanism in medial entorhinal cortex can be recruited by optogenetic stimulation at theta frequencies, which can persist with fast excitatory synaptic transmission blocked, suggesting a contribution of interneuronal network gamma (ING). We calibrated the passive and active properties of a 100-neuron model network to capture the range of passive properties and frequency/current relationships of experimentally recorded PV+ neurons in the medial entorhinal cortex (mEC). The strength and probabilities of chemical and electrical synapses were also calibrated using paired recordings, as were the kinetics and short-term depression (STD) of the chemical synapses. Gap junctions that contribute a noticeable fraction of the input resistance were required for synchrony with hyperpolarizing inhibition; these networks exhibited theta-nested high frequencies (∼200 Hz) similar to the putative ING observed experimentally in the optogenetically-driven PV-ChR2 mice. With STD included in the model, fast oscillations were only observed before the peak of the theta drive, whereas without STD, they were observed symmetrically before and after the peak. Because hyperpolarizing synapses provide a synchronizing drive that contributes to robustness in the presence of heterogeneity, synchronization decreases as the hyperpolarizing inhibition becomes weaker. In contrast, networks with shunting inhibition required non-physiological levels of gap junctions to synchronize using conduction delays within the measured range; synaptic depression of shunting synapses facilitated fast oscillations, suggesting that shunting inhibition in mEC is desynchronizing. Author Summary Fast oscillations nested within slower oscillations have been hypothesized to play a role in the encoding and retrieval of memories by chunking information within each fast cycle; networks of parvalbumin positive inhibitory interneurons contribute to the generation of fast oscillations. We show that, in the entorhinal cortex, the intrinsic dynamical properties of these neurons are sufficiently heterogeneous that electrical synapses are likely required to synchronize fast oscillations. Moreover, synchrony likely requires the chemical synapses to have a reversal potential that is negative relative to the action potential threshold of individual neurons during these oscillations. We show that the range of slow phases that support a fast oscillation is controlled by short term synaptic depression. The precise phase locking of the fast oscillation within the slow oscillations is hypothesized to allow for multiplexing of information.