Abstract Meningeal lymphatic vessels (MLVs) contribute to waste product elimination and immune surveillance in brain tissues. MLVs were identified in the dorsal and caudo-basal regions of the dura mater, where they ensure the clearance of cerebrospinal fluid (CSF). Whether MLVs exist in the complex anterior part of the murine and human skull, and how they connect with the glymphatic system and extracranial lymphatic vasculature remained unclear. Here, we generated three-dimensional (3D) maps of MLV drainage by light-sheet fluorescence microscopy (LSFM) imaging of mouse whole-head preparations following fluorescent OVA-A 555 tracer injections into the CSF. In humans, we performed real-time magnetic resonance vessel wall imaging (MR-VWI) after systemic gadobutrol injections. We observed a conserved 3D-anatomy of MLVs in mice and humans, and we discovered an extended anterior network around the dural cavernous sinus including multiple capillary beds and exit routes through the foramina of emissary veins. MR-VWI may provide a diagnostic tool for patients with CSF drainage defects and neurological diseases. Short abstract We established the 3D-anatomy of meningeal lymphatic vasculature and associated CSF drainage by postmortem light-sheet imaging in mice and by real-time magnetic resonance imaging in humans, demonstrating conserved lymphatic circuitries in contact with dural venous sinuses.

Abstract SLIT2 is a secreted polypeptide that guides migration of cells expressing ROBO1&2 receptors. Herein, we investigated SLIT2/ROBO signaling effects in gliomas. In patients with glioblastoma (GBM), SLIT2 expression increased with malignant progression and correlated with poor survival and immunosuppression. Knockdown of SLIT2 in mouse glioma cells and patient derived GBM xenografts reduced tumor growth and synergized with immunotherapy to prolong survival. Tumor cell SLIT2 knockdown inhibited macrophage invasion and promoted a cytotoxic gene expression profile, which improved tumor vessel function and enhanced efficacy of chemotherapy and immunotherapy. Mechanistically, SLIT2 promoted microglia/macrophage chemotaxis and tumor-supportive polarization via ROBO1&2-mediated PI3Kγ activation. Macrophage Robo1&2 deletion and systemic SLIT2 trap delivery mimicked SLIT2 knockdown effects on tumor growth and the tumor microenvironment (TME), revealing SLIT2 signaling through macrophage ROBOs as a novel regulator of the GBM microenvironment and a potential immunotherapeutic target for brain tumors.

Abstract Blood-brain barrier (BBB) integrity is critical for proper function of the central nervous system (CNS). Here, we showed that the endothelial Netrin1 receptor Unc5B controls BBB integrity by maintaining Wnt/β–catenin signaling. Inducible endothelial-specific deletion of Unc5B in adult mice led to region and size-selective BBB opening. Loss of Unc5B decreased BBB Wnt/β–catenin signaling, and β–catenin overexpression rescued Unc5B mutant BBB defects. Mechanistically, Netrin1 enhanced Unc5B interaction with the Wnt co-receptor LRP6, induced its phosphorylation and activated Wnt/β–catenin downstream signaling. Intravenous delivery of antibodies blocking Netrin1 binding to Unc5B caused a transient disruption of Wnt signaling and BBB breakdown, followed by neurovascular barrier resealing. These data identify Netrin-Unc5B signaling as a novel regulator of BBB integrity with potential therapeutic utility for CNS diseases.