We tested the hypothesis that reductions in the cellular deacetylase, sirtuin-1 (SIRT-1), contribute to vascular endothelial dysfunction with ageing via modulation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) acetylation/activation-associated nitric oxide (NO) production. In older (30 months, n = 14) vs. young (5-7 months, n = 16) B6D2F1 mice, aortic protein expression of SIRT-1 and eNOS phosphorylated at serine 1177 were lower (both P < 0.05), and acetylated eNOS was 6-fold higher (P < 0.05), whereas total eNOS did not differ (P = 0.65). Acetylcholine (ACh)-induced peak endothelium-dependent dilatation (EDD) was lower in isolated femoral arteries with ageing (P < 0.001). Incubation with sirtinol, a SIRT-1 inhibitor, reduced EDD in both young and older mice, abolishing age-related differences, whereas co-administration with l-NAME, an eNOS inhibitor, further reduced EDD similarly in both groups. Endothelium-independent dilatation to sodium nitroprusside (EID), was not altered by age or sirtinol treatment. In older (64 ± 1 years, n = 22) vs. young (25 ± 1 years, n = 16) healthy humans, ACh-induced forearm EDD was impaired (P = 0.01) and SIRT-1 protein expression was 37% lower in endothelial cells obtained from the brachial artery (P < 0.05), whereas EID did not differ. In the overall group, EDD was positively related to endothelial cell SIRT-1 protein expression (r = 0.44, P < 0.01). Reductions in SIRT-1 may play an important role in vascular endothelial dysfunction with ageing. SIRT-1 may be a key therapeutic target to treat arterial ageing.

Much of what we know about insulin resistance is based on studies from metabolically active tissues such as liver, adipose tissue, and skeletal muscle. Emerging evidence suggests that the vascular endothelium plays a crucial role in systemic insulin resistance, however, the underlying mechanisms remain incompletely understood. ADP ribosylation factor 6 (Arf6) is a small GTPase that plays a critical role in endothelial cell (EC) function. Here, we tested the hypothesis that the deletion of endothelial Arf6 will result in systemic insulin resistance.We used mouse models of constitutive EC-specific Arf6 deletion (Arf6 f/- Tie2Cre) and tamoxifen inducible Arf6 knockout (Arf6 f/f Cdh5Cre). Endothelium-dependent vasodilation was assessed using pressure myography. Metabolic function was assessed using a battery of metabolic assessments including glucose- and insulin-tolerance tests and hyperinsulinemic-euglycemic clamps. A fluorescence microsphere-based technique was used to measure tissue blood flow. Intravital microscopy was used to assess skeletal muscle capillary density.Endothelial Arf6 deletion impaired insulin-stimulated vasodilation in white adipose tissue (WAT) and skeletal muscle feed arteries. The impairment in vasodilation was primarily due to attenuated insulin-stimulated nitric oxide (NO) bioavailability but independent of altered acetylcholine- or sodium nitroprusside-mediated vasodilation. In vitro Arf6 inhibition resulted in suppressed insulin stimulated phosphorylation of Akt and endothelial NO synthase. Endothelial cell-specific deletion of Arf6 also resulted in systematic insulin resistance in normal chow fed mice and glucose intolerance in high fat diet fed obese mice. The underlying mechanisms of glucose intolerance were reductions in insulin-stimulated blood flow and glucose uptake in the skeletal muscle and were independent of changes in capillary density or vascular permeability.Results from this study support the conclusion that endothelial Arf6 signaling is essential for maintaining insulin sensitivity. Reduced expression of endothelial Arf6 impairs insulin-mediated vasodilation and results in systemic insulin resistance. These results have therapeutic implications for diseases that are associated with endothelial cell dysfunction and insulin resistance such as diabetes.

Abstract Increased arterial stiffness is a cardiovascular disease risk factor in the setting of advancing age and high-fat (HF) diet induced obesity. Increases in large artery stiffness, as measured by pulse wave velocity (PWV), occur within 8 weeks of HF feeding in mice. Sirtuin-1 (Sirt1), a NAD-dependent deacetylase, regulates cellular metabolic activity and activation of this protein has been associated with vasoprotection in aged mice. The aim of the present study was to elucidate the effect of global Sirt1 overexpression (Sirt tg ) on HF diet-induced arterial stiffening. Sirt1 overexpression did not influence PWV in normal chow (NC) fed mice (Sirt tg : 263 ± 6 vs WT: 274 ± 7, p=0.28). However, PWV was higher in wild-type (WT) mice (376 ± 22, p<0.04), but not Sirt tg (304 ± 2 cm/s, p=0.07), after 12 weeks of HF diet. Despite no effect of Sirt1 overexpression on aortic collagen content in NC (p=0.71), aortic elastin content was higher in Sirt tg mice compared with WT mice fed NC diet (P<0.05). Surprisingly, despite increased arterial stiffness, collagen content was lower (p<0.02) and elastin content was unchanged (p=0.05) in the aortas of WT mice after HF. Neither collagen (p=0.18) nor elastin content (p=0.56) were impacted by HF diet in the Sirt tg mice. Likewise, there was no difference in wall thickness in NC (Sirt tg : 40.7 ± 2 vs WT: 41.6 ± 2, p= 0.78). However, wall thickness was higher in mice WT mice fed a HF diet (51.7 ± 2, p<0.01) and there was no difference in Sirt tg mice after HF diet (p=0.66). Similarly, there was no difference in wall-to-lumen ratio in mice fed NC diet (Sirt tg : 0.08 vs WT: 0.08, p=0.48) was higher in HF diet fed WT mice (p<0.01), though, HF diet was associated with a higher wall-to-lumen ratio in WT (0.11, p<0.01), but not different in Sirt tg mice fed HF diet (0.08, p=0.59). These findings demonstrate a vasoprotective effect of Sirt1 overexpression that limits increases in arterial stiffness and protects against alterations in vessel morphology in response to HF feeding. As such, activation of Sirt1 may be a novel therapeutic target to prevent elevated CVD risk associated with HF-induced aortic stiffening.