Yes-associated protein (YAP) is a potent transcription coactivator acting via binding to the TEAD transcription factor, and plays a critical role in organ size regulation. YAP is phosphorylated and inhibited by the Lats kinase, a key component of the Hippo tumor suppressor pathway. Elevated YAP protein levels and gene amplification have been implicated in human cancer. In this study, we report that YAP is inactivated during embryonic stem (ES) cell differentiation, as indicated by decreased protein levels and increased phosphorylation. Consistently, YAP is elevated during induced pluripotent stem (iPS) cell reprogramming. YAP knockdown leads to a loss of ES cell pluripotency, while ectopic expression of YAP prevents ES cell differentiation in vitro and maintains stem cell phenotypes even under differentiation conditions. Moreover, YAP binds directly to promoters of a large number of genes known to be important for stem cells and stimulates their expression. Our observations establish a critical role of YAP in maintaining stem cell pluripotency.

The slow kinetics and low efficiency of reprogramming methods to generate human induced pluripotent stem cells (iPSCs) impose major limitations on their utility in biomedical applications. Here we describe a chemical approach that dramatically improves (200-fold) the efficiency of iPSC generation from human fibroblasts, within seven days of treatment. This will provide a basis for developing safer, more efficient, nonviral methods for reprogramming human somatic cells.

Abstract Induced pluripotent stem cell technology has attracted enormous interest for potential application in regenerative medicine. Here, we report that a specific glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) inhibitor, CHIR99021, can induce the reprogramming of mouse embryonic fibroblasts transduced by only two factors, Oct4 and Klf4. When combined with Parnate (also named tranylcypromine), an inhibitor of lysine-specific demethylase 1, CHIR99021 can cause the reprogramming of human primary keratinocyte transduced with the two factors, Oct4 and Klf4. To our knowledge, this is the first time that human iPS cells have been generated from somatic cells without exogenous Sox2 expression. Our studies suggest that the GSK-3 inhibitor might have a general application to replace transcription factors in both mouse and human reprogramming. Disclosure of potential conflicts of interest is found at the end of this article.

The production of autologous T cells expressing a chimaeric antigen receptor (CAR) is time-consuming, costly and occasionally unsuccessful. T-cell-derived induced pluripotent stem cells (TiPS) are a promising source for the generation of 'off-the-shelf' CAR T cells, but the in vitro differentiation of TiPS often yields T cells with suboptimal features. Here we show that the premature expression of the T-cell receptor (TCR) or a constitutively expressed CAR in TiPS promotes the acquisition of an innate phenotype, which can be averted by disabling the TCR and relying on the CAR to drive differentiation. Delaying CAR expression and calibrating its signalling strength in TiPS enabled the generation of human TCR- CD8αβ+ CAR T cells that perform similarly to CD8αβ+ CAR T cells from peripheral blood, achieving effective tumour control on systemic administration in a mouse model of leukaemia and without causing graft-versus-host disease. Driving T-cell maturation in TiPS in the absence of a TCR by taking advantage of a CAR may facilitate the large-scale development of potent allogeneic CD8αβ+ T cells for a broad range of immunotherapies.

SUMMARY Allogeneic cell therapies hold promise for broad clinical implementation, but face limitations due to potential rejection by the recipient immune system. Silencing of beta-2-microglobulin ( B2M ) expression is commonly employed to evade T cell-mediated rejection, although absence of B2M triggers missing-self responses by recipient natural killer (NK) cells. Here, we demonstrate that deletion of the adhesion ligands CD54 and CD58 on targets cells robustly dampens NK cell reactivity across all sub-populations. Genetic deletion of CD54 and CD58 in B2M -deficient allogeneic chimeric antigen receptor (CAR) T and multi-edited induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived NK cells reduces their susceptibility to rejection by NK cells in vitro and in vivo without affecting their anti-tumor effector potential. Thus, these data suggest that genetic ablation of adhesion ligands effectively alleviates rejection of allogeneic immune cells for immunotherapy.