Cyclophosphamide induction regimens for antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)–associated vasculitis are effective in 70 to 90% of patients, but they are associated with high rates of death and adverse events. Treatment with rituximab has led to remission rates of 80 to 90% among patients with refractory ANCA-associated vasculitis and may be safer than cyclophosphamide regimens.

Abstract

 Mouse models are critical in pre-clinical studies of cancer therapy, allowing dissection of mechanisms through chemical and genetic manipulations that are not feasible in the clinical setting. In studies of the tumour microenvironment (TME), novel highly multiplexed imaging methods can provide a rich source of information. However, the application of such technologies in mouse tissues is still in its infancy. Here we present a workflow for studying the TME using imaging mass cytometry with a panel of 27 antibodies on frozen mouse tissues. We optimised and validated image segmentation strategies and automated the process in a Nextflow-based pipeline (imcyto) that is scalable and portable, allowing for parallelised segmentation of large multi-image datasets. Incorporating user-specific plugins, imcyto can be flexibly tailored to a wide range of segmentation needs. With these methods we interrogated the dramatic remodelling of the TME induced by a KRAS G12C inhibitor in an immune competent mouse orthotopic lung cancer model, showcasing their potential as key discovery tools to enhance understanding of the interplay between tumour, stroma, and immune cells in the spatial context of the tissue.

Abstract Objective Current treatments for systemic lupus erythematosus (SLE) and vasculitis contribute to mortality and incapacity and are only partially effective; thus, newer therapies are clearly needed. Depletion of B cells has led to disease control in patients with autoimmune disorders. We sought to assess the long‐term efficacy and safety of a B cell–depleting therapy in patients with SLE and patients with vasculitis. Methods In a prospective study with a median followup of 24 months, 11 patients with active or refractory SLE and 11 patients with active or refractory antineutrophil cytoplasmic antibody–associated vasculitis (AAV) received a course of therapy with rituximab (an anti‐CD20 monoclonal antibody) along with a single dose of intravenous cyclophosphamide. Results Remission followed rapid B cell depletion, with response rates of 100% among the 11 patients with SLE (6 patients had a complete response, and 5 patients had a partial response) and 91% among the 11 patients with AAV (9 patients had a complete response, and 1 patient had partial remission). A renal response occurred in all 6 patients with lupus nephritis. Clinical improvement was accompanied by significant reductions in the daily dose of prednisolone. Relapse occurred in 64% of the patients with SLE and in 60% of those with AAV. B cell return preceded relapse in the majority of patients, and further treatment with rituximab proved effective. IgG and IgM levels were maintained in the normal range. The incidence of infective complications was low; however, infusion reactions were common, and human antichimeric antibodies developed in 5 of 14 patients. Conclusion B cell depletion offers the prospect of sustained disease remission and improved disease control combined with low toxicity in patients with active or refractory SLE or AAV. Relapse following treatment is common, but re‐treatment is rapidly effective.

Abstract Objective B cell depletion with rituximab has allowed remissions in relapsing or refractory antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)–associated vasculitis in small studies. The aim of this study was to determine the efficacy and safety of rituximab for ANCA‐associated vasculitis in a larger multicenter cohort. This permitted comparison of rituximab dosing regimens, the value of continuing immunosuppression, and investigation of ANCA and B cell levels as re‐treatment biomarkers. Methods Retrospective, standardized data collection from 65 sequential patients receiving rituximab for refractory ANCA‐associated vasculitis at 4 centers in the UK was used. Results All patients achieved B cell depletion. Complete remission occurred in 49 of the 65 patients (75%), partial remission in 15 (23%), and no response in 1 (2%). The prednisolone dosage was reduced from 12.5 mg/day (median) to 9.0 mg/day at 6 months ( P = 0.0006). Immunosuppressive therapy was withdrawn in 37 of 60 patients (62%). Twenty‐eight of 49 patients who achieved full remission (57%) experienced relapse (median 11.5 months). B cell return preceded relapse in 14 of 27 patients (52%). Although ANCA levels fell after rituximab therapy, relapse was not associated with ANCA positivity or a rise in ANCA levels. Neither the initial rituximab regimen (4 infusions of 375 mg/m 2 each given 1 week apart or 2 infusions of 1 gm each given 2 weeks apart) nor withdrawal of immunosuppressive therapy (37 of 60 patients [62%]) influenced the timing of relapse. Thirty‐eight patients received ≥2 courses of rituximab, and complete remission was induced or maintained in 32 of them (84%). IgM levels fell, although IgG levels remained stable. Forty‐six serious adverse events occurred, including 2 episodes of late‐onset neutropenia, which were attributed to rituximab. Conclusion Rituximab was effective remission induction therapy for refractory ANCA‐associated vasculitis in this study. There was no difference in efficacy between the 2 main treatment regimens. Continuing immunosuppression did not reduce relapses. Relapses occurred, but re‐treatment was effective and safe. There was no clear influence of rituximab on the frequency of serious adverse events. ANCA and B cell levels lacked sufficient sensitivity to guide the timing of re‐treatment.

Rituximab is effective induction therapy in refractory or relapsing antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis (AAV). However, further relapse is common, and maintenance strategies are required. The aim of this study was to reduce relapse rates using a fixed-interval rituximab re-treatment protocol.Retrospective, standardized collection of data from sequential patients receiving rituximab for refractory or relapsing AAV at a single center was studied. Group A patients (n = 28) received rituximab induction therapy (4 infusions of 375 mg/m(2) or 2 infusions 1 gm) and further rituximab at the time of subsequent relapse. Group B patients (n = 45) received routine rituximab re-treatment for 2 years: 2 doses of 1 gm each for remission induction, then 1 gm every 6 months (total of 6 gm). Group C patients (n = 19) comprised patients in group A who subsequently relapsed and began routine re-treatment for 2 years.Response (complete/partial remission) occurred in 26 of the 28 patients (93%) in group A, 43 of the 45 patients (96%) in group B, and 18 of the 19 patients (95%) in group C. At 2 years, relapses had occurred in 19 of 26 patients (73%) in group A, 5 of 43 (12%) in group B (P < 0.001), and 2 of 18 (11%) in group C (P < 0.001). At the last followup (median of 44 months), relapses had occurred in 85% of those in group A (22 of 26), 26% of those in group B (11 of 43; P < 0.001), and 56% of those in group C (10 of 18; P = 0.001). Glucocorticoid dosages were decreased and immunosuppression therapy was withdrawn in the majority of patients. Routine rituximab re-treatment was well tolerated, and no new safety issues were identified.Two-year, fixed-interval rituximab re-treatment was associated with a reduction in relapse rates during the re-treatment period and a more prolonged period of remission during subsequent followup. In the absence of biomarkers that accurately predict relapse, routine rituximab re-treatment may be an effective strategy for remission maintenance in patients with refractory and relapsing AAV.

Objectives The RITUXVAS trial reported similar remission induction rates and safety between rituximab and cyclophosphamide based regimens for antineutrophil cytoplasm antibody (ANCA)-associated vasculitis at 12 months; however, immunosuppression maintenance requirements and longer-term outcomes after rituximab in ANCA-associated renal vasculitis are unknown. Methods Forty-four patients with newly diagnosed ANCA-associated vasculitis and renal involvement were randomised, 3:1, to glucocorticoids plus either rituximab (375 mg/m 2 /week×4) with two intravenous cyclophosphamide pulses (n=33, rituximab group), or intravenous cyclophosphamide for 3–6 months followed by azathioprine (n=11, control group). Results The primary end point at 24 months was a composite of death, end-stage renal disease and relapse, which occurred in 14/33 in the rituximab group (42%) and 4/11 in the control group (36%) (p=1.00). After remission induction treatment all patients in the rituximab group achieved complete B cell depletion and during subsequent follow-up, 23/33 (70%) had B cell return. Relapses occurred in seven in the rituximab group (21%) and two in the control group (18%) (p=1.00). All relapses in the rituximab group occurred after B cell return. Conclusions At 24 months, rates of the composite outcome of death, end-stage renal disease and relapse did not differ between groups. In the rituximab group, B cell return was associated with relapse. Trial registration number ISRCTN28528813.

Cyclophosphamide induction regimens are effective for antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-associated vasculitis (AAV), but are associated with infections, malignancies and infertility. Mycophenolate mofetil (MMF) has shown high remission rates in small studies of AAV.We conducted a randomised controlled trial to investigate whether MMF was non-inferior to cyclophosphamide for remission induction in AAV. 140 newly diagnosed patients were randomly assigned to MMF or pulsed cyclophosphamide. All patients received the same oral glucocorticoid regimen and were switched to azathioprine following remission. The primary endpoint was remission by 6 months requiring compliance with the tapering glucocorticoid regimen. Patients with an eGFR <15 mL/min were excluded from the study.At baseline, ANCA subtype, disease activity and organ involvement were similar between groups. Non-inferiority was demonstrated for the primary remission endpoint, which occurred in 47 patients (67%) in the MMF group and 43 patients (61%) in the cyclophosphamide group (risk difference 5.7%, 90% CI -7.5% to 19%). Following remission, more relapses occurred in the MMF group (23 patients, 33%) compared with the cyclophosphamide group (13 patients, 19%) (incidence rate ratio 1.97, 95% CI 0.96 to 4.23, p=0.049). In MPO-ANCA patients, relapses occurred in 12% of the cyclophosphamide group and 15% of the MMF group. In PR3-ANCA patients, relapses occurred in 24% of the cyclophosphamide group and 48% of the MMF group. Serious infections were similar between groups (26% MMF group, 17% cyclophosphamide group) (OR 1.67, 95% CI 0.68 to 4.19, p=0.3).MMF was non-inferior to cyclophosphamide for remission induction in AAV, but resulted in higher relapse rate.NCT00414128.

Background: Patients with autoimmune/inflammatory conditions on anti-CD20 therapies, such as Rituximab, have suboptimal humoral responses to vaccination and are vulnerable to poorer clinical outcomes following SARS-CoV-2 infection. We aimed to examine how the fundamental parameters of antibody responses, namely affinity and concentration, shape the quality of humoral immunity after vaccination in these patients. Methods: We performed in depth antibody characterisation in sera collected four to six weeks after each of three vaccine doses to wild-type (WT) SARS-CoV-2 in Rituximab-treated primary vasculitis patients (n=14) using Luminex and pseudovirus neutralisation assays, whereas a novel microfluidic-based immunoassay was used to quantify polyclonal antibody affinity and concentration against both WT and Omicron (B.1.1.529) variants. Comparative antibody profiling was performed at equivalent time points in healthy individuals after three antigenic exposures to WT SARS-CoV-2 (one infection and two vaccinations; n=15) and in convalescent patients after WT SARS-CoV-2 infection (n=30). Results: Rituximab-treated patients had lower antibody levels and neutralisation titres against both WT and Omicron SARS-CoV-2 variants compared to healthy individuals. Neutralisation capacity was weaker against Omicron versus WT both in Rituximab-treated patients and in healthy individuals. In the Rituximab cohort, this was driven by lower antibody affinity against Omicron versus WT (median [range] KD: 21.6 [9.7-38.8] nM vs 4.6 [2.3-44.8] nM, p=0.0004). By contrast, healthy individuals with hybrid immunity produced a broader antibody response, a subset of which recognised Omicron with higher affinity than antibodies in Rituximab-treated patients (median [range] KD: 1.05 [0.45-1.84] nM vs 20.25 [13.2-38.8] nM, p=0.0002), underpinning the stronger serum neutralisation capacity against Omicron in the former group. Rituximab-treated patients had similar anti-WT antibody levels and neutralisation titres to unvaccinated convalescent individuals, despite two more exposures to SARS-CoV-2 antigen. Temporal profiling of the antibody response showed evidence of affinity maturation in healthy convalescent patients after a single SARS-CoV-2 infection which was not observed in Rituximab-treated patients, despite repeated vaccination. Discussion: Our results enrich previous observations of impaired humoral immune responses to SARS-CoV-2 in Rituximab-treated patients and highlight the significance of quantitative assessment of serum antibody affinity and concentration in monitoring anti-viral immunity, viral escape, and the evolution of the humoral response.

Abstract Introduction It remains unclear whether persisting proteinuria in ANCA-associated glomerulonephritis (AAGN) reflects damage from the initial injury or ongoing inflammation. Methods A retrospective, single-centre study of biopsy-proven AAGN. The study defines the “albuminuria” group as urine albumin-to-creatinine ratio (ACR) greater than 300 mg/g and the “no albuminuria” group as ACR less than or equal to 300 mg/g at 6 months. We sought the clinical and histopathological characteristics of both the initial and subsequent biopsies and long-term kidney outcomes stratified by albuminuria levels. Results 218 patients were included. Within the first six months, 28 (13%) died or progressed to end-stage kidney disease (ESKD). Among the remaining 190 patients, 37% had an ACR&gt; 300 mg/g at 6 months. The albuminuria group more frequently presented with a Berden mixed or crescentic class and had higher glomerular activity on the initial biopsy. They were more often male (odds ratio [OR] 2.75; 95% CI 1.15-6.54), younger age (OR 0.96; 95% CI, 0.93 to 0.99) and had fewer normal glomeruli in the biopsy (OR 0.96; 95% CI, 0.93 to 0.99) compared to the group without albuminuria. Over the initial 5-year period, the recovery in glomerular filtration rate (eGFR) was lower in the albuminuria group (adjusted mean difference in delta eGFR -12.5 ml/min per 1.73m2; 95% CI, -15.8 to -9.1). In multivariable analysis, ACR greater than 300 mg/g was associated with a higher risk of ESKD, even after adjusting for Berden classification and eGFR at diagnosis (Hazard ratio 6.53; 95% CI, 1.49 to 28.50). Conclusions In a well-defined cohort of AAGN, one-third of the patients, primarily younger males with a lower percentage of normal glomeruli, had persisting albuminuria after induction treatment which was associated with worse kidney outcomes independent of Berden class and eGFR at diagnosis.