Abstract Laminin N-terminus α31 (LaNt α31), a member of the laminin superfamily, expressed at low levels in intact epithelium but upregulated during wound repair. Increased expression of LaNt α31 reduced migration rate of corneal keratinocytes through an unknown mechanism. Here, we investigated whether LaNt α31 influences cell behaviour through modulating laminin-mediated processes. Adenoviral delivery of LaNt α31 into corneal epithelial cells led to reduced migration speed and increased cell spreading and changed laminin 332 organisation from diffuse arcs to tight clusters. Enhanced recruitment of collagen XVII and bullous pemphigoid antigen 1e to β4 integrin, indicating early maturation of hemidesmosomes, and changed focal adhesion distribution were also identified. LaNt α31 and laminin β3 co-immunoprecipitated from doubly transduced cells and were deposited together in live imaging experiment. Moreover, LaNt α31 expression led to increased matrix metalloproteinase (MMP) activity and proteolytic processing of laminin α3, and the inhibition of MMP activity rescued the laminin and hemidesmosome phenotypes. Provision of cell-derived extracellular matrix rescued the cell spreading and motility effects. These findings reveal LaNt α31 as a new player in regulating cell-to-matrix adhesion through its ability to influence laminin organisation and proteolytic processing.

Abstract Laminins are essential components of all basement membranes where they regulate an extensive array of tissue functions. Alternative splicing from the laminin α3 gene produces a non-laminin but netrin-like protein, Laminin N terminus α31 (LaNt α31). LaNt α31 is widely expressed in intact tissue and is upregulated in epithelial cancers and during wound healing. In vitro functional studies have shown that LaNt α31 can influence numerous aspects of epithelial cell behaviour via modifying matrix organisation, suggesting a new model of laminin auto-regulation. However, the function of this protein has not been established beyond the epithelium and it has never been studied in vivo. Here, a mouse transgenic line was generated using the ubiquitin C promoter to drive inducible expression of LaNt α31. When expression was induced at embryonic day 15.5, LaNt α31 transgenic animals were not viable at birth, exhibiting localised regions of erythema. Numerous striking defects were apparent histologically, including extra-vascular erythrocytes in multiple tissues, kidney epithelial detachment, tubular dilation, interstitial bleeding, and thickening of tubule basement membranes, disruption of the epidermal basal cell layer and of the hair follicle outer root sheath, and ~50% reduction of cell numbers in the liver associated with depletion of hematopoietic erythrocytic foci. These findings demonstrate that LaNt α31 can influence tissue morphogenesis during development. More broadly, these data provide the first in vivo evidence to support an emerging model of laminin self-regulation and provide a valuable model for onward investigation into this important area. Summary Statement Expression during development of Laminin N-terminus α31, a netrin-like laminin splice isoform, caused defects indicating basement membrane disruption in multiple tissues; providing the first in vivo evidence for laminin self-regulation.

Introduction. Lu-PRRT in NETs is usually delivered with a total cumulative activity (TCA) of 29.6 GBq, divided into 4 cycles and with fixed interval between cycles (IBC) of 8 weeks. Based on prevoius radiobiological studies, reducing IBC could improve efficacy without increasing toxicity. The purpose of this study is to evaluate safety of Lu-PRRT with two different IBC: intensive (every 5 weeks) or standard (every 8-10 weeks). Methods. From May 2016 to July 2018 patients with advanced and progressive GEP and bronchial NENs were enrolled in a prospective randomized phase II study. Patients with risk factors for toxicity (RF) were planned for a TCA of 18.5 GBq, patients without RF of 27.8 GBq, divided into 5 cycles. Patients were then randomly assigned to be treated according to the intensive or to the standard IBC. Toxicity was monitored according to CTCAE. Results. 120 patients (61 in the intensive group and 59 in the standard one) were evaluable for overall toxicity. 5 patients (4.1%) had major (G3) hematological toxicity, 2 in the intensive group and 3 in the standard one. Other G3 toxicities related to creatinine, alanine aminotransferase, nausea, and asthenia were observed in the intensive group. 112 patients (54 in the intensive group and 58 in the standard one) performed at least 2 cycles and were also evaluable for cycle-by-cycle toxicity, resulting similar between the two groups. Conclusion. According to our preliminary results, Lu-PRRT administered intensively could be considered as safe as the standard schedule, when TCA is chosen according to the RF. Further data are needed to confirm these results.