Increased levels of lactate, an end-product of glycolysis, have been proposed as a potential surrogate marker for metabolic changes during neuronal excitation. These changes in lactate levels can result in decreased brain pH, which has been implicated in patients with various neuropsychiatric disorders. We previously demonstrated that such alterations are commonly observed in five mouse models of schizophrenia, bipolar disorder, and autism, suggesting a shared endophenotype among these disorders rather than mere artifacts due to medications or agonal state. However, there is still limited research on this phenomenon in animal models, leaving its generality across other disease animal models uncertain. Moreover, the association between changes in brain lactate levels and specific behavioral abnormalities remains unclear. To address these gaps, the International Brain pH Project Consortium investigated brain pH and lactate levels in 109 strains/conditions of 2,294 animals with genetic and other experimental manipulations relevant to neuropsychiatric disorders. Systematic analysis revealed that decreased brain pH and increased lactate levels were common features observed in multiple models of depression, epilepsy, Alzheimer's disease, and some additional schizophrenia models. While certain autism models also exhibited decreased pH and increased lactate levels, others showed the opposite pattern, potentially reflecting subpopulations within the autism spectrum. Furthermore, utilizing large-scale behavioral test battery, a multivariate cross-validated prediction analysis demonstrated that poor working memory performance was predominantly associated with increased brain lactate levels. Importantly, this association was confirmed in an independent cohort of animal models. Collectively, these findings suggest that altered brain pH and lactate levels, which could be attributed to dysregulated excitation/inhibition balance, may serve as transdiagnostic endophenotypes of debilitating neuropsychiatric disorders characterized by cognitive impairment, irrespective of their beneficial or detrimental nature.

Abstract Lactate is known to have diverse roles in the brain at the molecular and behavioral levels under both physiological and pathophysiological conditions, such as learning and memory and regulation of mood. Recently, a novel post-translational modification called lysine lactylation has been found in histone H3 of mouse macrophages, and the lactylation levels paralleled the intracellular lactate levels 1 . However, it is unknown whether lysine lactylation occurs in brain cells, and if it does, whether lactylation is induced by the stimuli that accompany changes in lactate levels. Herein, we reveal that lysine lactylation in brain cells is regulated by systemic changes in lactate levels, neural excitation, and behaviorally relevant stimuli. Lysine lactylation levels were increased by lactate treatment and by high-potassium-induced depolarization in cultured primary neurons; these increases were attenuated by pharmacological inhibition of monocarboxylate transporter 2 and lactate dehydrogenase, respectively, suggesting that both cell-autonomous and non-cell-autonomous neuronal mechanisms are involved in overall lysine lactylation. In vivo , electroconvulsive stimulation increased lysine lactylation levels in the prefrontal cortices of mice, and its levels were positively correlated with the expression levels of the neuronal activity marker c-Fos on an individual cell basis. In the social defeat stress model of depression in which brain lactate levels increase, lactylation levels were increased in the prefrontal cortices of the defeated mice, which was accompanied by increased c-Fos expression, decreased social behaviors, and increased anxiety-like behaviors, suggesting that stress-induced neuronal excitation may induce lysine lactylation, thereby affecting mood-related behaviors. Further, we identified 63 candidate lysine-lactylated proteins in the mouse cortex and found that lactylation levels in histone H1 increased in response to defeat stress. This study may open up an avenue for exploration of a novel role of neuronal activity-induced lactate mediated by protein lactylation in the brain.

Lower pH is a well-replicated finding in the postmortem brains of patients with schizophrenia and bipolar disorder. Interpretation of the data, however, is controversial as to whether this finding reflects a primary feature of the diseases or is a result of confounding factors such as medication, postmortem interval, and agonal state. To date, systematic investigation of brain pH has not been undertaken using animal models, which can be studied without confounds inherent in human studies. In the present study, we first confirmed that the brains of patients with schizophrenia and bipolar disorder exhibit lower pH values by conducting a meta-analysis of existing datasets. We then utilized neurodevelopmental mouse models of psychiatric disorders in order to test the hypothesis that lower brain pH exists in these brains compared to controls due to the underlying pathophysiology of the disorders. We measured pH, lactate levels, and related metabolite levels in brain homogenates from three mouse models of schizophrenia (Schnurri-2 KO, forebrain-specific calcineurin KO, and neurogranin KO mice) and one of bipolar disorder (Camk2a HKO mice), and one of autism spectrum disorders (Chd8 HKO mice). All mice were drug-naive with the same postmortem interval and agonal state at death. Upon postmortem examination, we observed significantly lower pH and higher lactate levels in the brains of model mice relative to controls. There was a significant negative correlation between pH and lactate levels. These results suggest that lower pH associated with increased lactate levels is a pathophysiology of such diseases rather than mere artifacts.

Abstract The human vesicular monoamine transporter 1 ( VMAT1 ) harbors unique substitutions (Asn136Thr/Ile) that affect monoamine uptake into synaptic vesicles. These substitutions are absent in all known mammals, suggesting their contributions to distinct aspects of human behavior modulated by monoaminergic transmission, such as emotion and cognition. To directly test the impact of these human-specific mutations, we introduced the humanized residues into mouse Vmat1 via CRISPR/Cas9-mediated genome editing and examined changes at the behavioral, neurophysiological and molecular levels. Behavioral tests revealed reduced anxiety-related traits of Vmat1 Ile mice, consistent with human studies, and electrophysiological recordings showed altered oscillatory activity in the amygdala under anxiogenic conditions. Transcriptome analyses further identified amygdala-specific changes in the expression of genes involved in neurodevelopment and emotional regulation, which may corroborate the observed phenotypes. This knock-in mouse model hence provides compelling evidence that the mutations affecting monoaminergic signaling and amygdala circuits have contributed to the evolution of human socio-emotional behaviors.

Biomarkers are needed to improve the diagnosis of neuropsychiatric disorders. Promising candidates are imbalance of excitation and inhibition in the brain, and maturation abnormalities. Here, we characterized different disease conditions by mapping changes in the expression patterns of maturation-related genes whose expression was altered by experimental neural hyperexcitation in published studies. This revealed two gene expression patterns: decreases in maturity markers and increases in immaturity markers. These two groups of genes were characterized by the overrepresentation of genes related to synaptic function and chromosomal modification, respectively. We used these two groups in a transdiagnostic analysis of 80 disease datasets for eight neuropsychiatric disorders and 12 datasets from corresponding animal models, and found that transcriptomic pseudoimmaturity inducible by neural hyperexcitation is shared by multiple neuropsychiatric disorders, such as schizophrenia, Alzheimer disorders, and ALS. Our results suggest that this endophenotype may serve as a basis for transdiagnostic characterization of these disorders.

The selective serotonin reuptake inhibitor fluoxetine (FLX) is widely used to treat depression and anxiety disorders. Chronic FLX treatment reportedly induces cellular responses in the brain, including increased adult hippocampal and cortical neurogenesis and reversal of neuron maturation in the hippocampus, amygdala, and cortex. However, because most previous studies have used rodent models, it remains unclear whether these FLX-induced changes occur in the primate brain. To evaluate the effects of FLX in the primate brain, we used immunohistological methods to assess neurogenesis and the expression of neuronal maturity markers following chronic FLX treatment (3 mg/kg/day for 4 weeks) in adult marmosets (n = 3 per group). We found increased expression of doublecortin and calretinin, markers of immature neurons, in the hippocampal dentate gyrus of FLX-treated marmosets. Further, FLX treatment reduced parvalbumin expression and the number of neurons with perineuronal nets, which indicate mature fast-spiking interneurons, in the hippocampus, but not in the amygdala or cerebral cortex. We also found that FLX treatment increased the generation of cortical interneurons; however, significant up-regulation of adult hippocampal neurogenesis was not observed in FLX-treated marmosets. These results suggest that dematuration of hippocampal neurons and increased cortical neurogenesis may play roles in FLX-induced effects and/or side effects. Our results are consistent with those of previous studies showing hippocampal dematuration and increased cortical neurogenesis in FLX-treated rodents. In contrast, FLX did not affect hippocampal neurogenesis or dematuration of interneurons in the amygdala and cerebral cortex.