Healthy Research Rewards
ResearchHub is incentivizing healthy research behavior. At this time, first authors of open access papers are eligible for rewards. Visit the publications tab to view your eligible publications.
Got it
AB
Antonia Banyard
Author with expertise in Integrin Signaling in Inflammation and Cancer
Achievements
Cited Author
Open Access Advocate
Key Stats
Upvotes received:
0
Publications:
2
(50% Open Access)
Cited by:
222
h-index:
9
/
i10-index:
9
Reputation
Biology
< 1%
Chemistry
< 1%
Economics
< 1%
Show more
How is this calculated?
Publications
0

Large extracellular vesicles can be characterised by multiplex labelling using imaging flow cytometry

Suzanne Johnson et al.Feb 7, 2020
Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous in size (30nm-10μm), content (lipid, RNA, DNA, protein) and potential function(s). Many isolation techniques routinely discard the large EVs at the early stages of small EV or exosome isolation protocols. We describe here a standardised method to isolate large EVs and examine EV marker expression and diameter using imaging flow cytometry. Methods: We describe step-wise isolation and characterisation of a subset of large EVs from the medulloblastoma cell line UW228-2 assessed by fluorescent light microscopy, transmission electron microscopy (TEM) and TRPS. Viability of parent cells was assessed by Annexin V exposure by flow cytometry. Imaging flow cytometry (Imagestream Mark II) identified EVs by direct fluorescent membrane labelling with Cell Mask Orange (CMO) in conjunction with EV markers. A stringent gating algorithm based on side scatter and fluorescence intensity was applied and expression of EV markers CD63, CD9 and LAMP 1 assessed. Results: UW228-2 cells prolifically release EVs of up to 6 μ. We show that the Imagestream Mark II imaging flow cytometer allows robust and reproducible analysis of large EVs, including assessment of diameter. We also demonstrate a correlation between increasing EV size and co-expression of markers screened. Conclusions: We have developed a labelling and stringent gating strategy which is able to explore EV marker expression (CD63, CD9 and LAMP1) on individual EVs within a widely heterogeneous population. Taken together data presented here strongly support the value of exploring large EVs in clinical samples for potential biomarkers, useful in diagnostic screening and disease monitoring.