Abstract Trichromacy is unique to primates among mammals, enabled by blue (short/S), green (medium/M), and red (long/L) cones. In humans and Old World monkeys, cones make a poorly understood choice between M and L cone subtype fates. To determine mechanisms specifying M and L cones, we developed an approach to visualize expression of the highly similar M - and L - opsin mRNAs. M - opsin , but not L - opsin , was observed during early human eye development, suggesting that M cones are generated before L cones. In adult human tissue, the early-developing central retina contained a mix of M and L cones compared to the late-developing peripheral region, which contained a high proportion of L cones. Retinoic acid (RA)-synthesizing enzymes are highly expressed early in retinal development. High RA signaling early was sufficient to promote M cone fate and suppress L cone fate in retinal organoids. Across a human population sample, natural variation in the ratios of M and L cone subtypes was associated with a noncoding polymorphism in the NR2F2 gene, a mediator of RA signaling. Our data suggest that RA promotes M cone fate early in development to generate the pattern of M and L cones across the human retina.

Midget retinal ganglion cells (RGCs) are the most common RGC type in the primate retina. Their responses mediate both color and spatial vision, yet the specific links between midget RGC responses and visual perception are unclear. Previous research on the dual roles of midget RGCs has focused on those comparing long (L) vs. middle (M) wavelength sensitive cones. However, there is evidence for several other rare midget RGC subtypes receiving S-cone input, but their role in color and spatial vision is uncertain. Here, we confirm the existence of the single S-cone center OFF midget RGC circuit in the central retina of macaque monkey both structurally and functionally, by combining single cell electrophysiology with 3D electron microscopy reconstructions of the upstream circuitry. Like the well-studied L vs. M midget RGCs, the S-OFF midget RGCs have a center-surround receptive field consistent with a role in spatial vision. While spectral opponency in a primate RGC is classically assumed to contribute to hue perception, a role supporting edge detection is more consistent with the S-OFF midget RGC receptive field structure and studies of hue perception.

Photoreceptors in the retina convert light into electrical signals through a phototransduction cycle that consists of multiple electrical and biochemical events. Phase-resolved optical coherence tomography (pOCT) measurements of the optical path length (OPL) change in the cone photoreceptor outer segments after a light stimulus (optoretinogram) reveal a fast, ms-scale contraction by tens of nm, followed by a slow (hundreds of ms) elongation reaching hundreds of nm. Ultrafast measurements with a line-scan pOCT system show that the contractile response amplitude increases logarithmically with the number of incident photons, and its peak shifts earlier at higher stimulus intensities. We present a model that accounts for these features of the contractile response. Conformational changes in opsins after photoisomerization result in the fractional shift of charge across the disk membrane, leading to a transmembrane voltage change, known as the early receptor potential (ERP). Lateral repulsion of the ions on both sides of the membrane affects its surface tension and leads to its lateral expansion. Since the volume of the disks does not change much on a ms time scale, their lateral expansion leads to an axial contraction of the outer segment. With increasing stimulus intensity and resulting tension, the area expansion coefficient of the disk membrane also increases as thermally-induced fluctuations are pulled flat, resisting further expansion. This results in a logarithmic saturation of the deformation and a peak shift to earlier with brighter stimuli. Slow expansion of the photoreceptors is explained by the influx of water due to osmotic changes during phototransduction. Both effects closely match measurements in healthy human volunteers.

Limited accessibility of retinal neurons to electrophysiology on a cellular scale in-vivo has restricted studies of their signaling to in-vitro preparations and animal models. Physiological changes underlying neural activity are mediated by variations in electrical potential that alter the surface tension of the cell membrane. In addition, physiological processes affect concentration of the cell's constituents that results in variation of osmotic pressure. Both these phenomena affect the neuron's shape which can be detected using interferometric imaging, thereby enabling non-invasive label-free imaging of physiological activity in-vivo with cellular resolution. Here, we apply high-speed phase-resolved optical coherence tomography in line-field configuration to image the biophysical phenomena associated with phototransduction in human cone photoreceptors in vivo. We demonstrate that individual cones exhibit a biphasic response to light: an early ms-scale fast contraction of the outer segment immediately after the onset of the flash stimulus followed by a gradual (hundreds of ms) expansion. We demonstrate that the contraction can be explained by rapid charge movement accompanying the isomerization of cone opsins, consistent with the early receptor potential observed in the electroretinogram and classical electrophysiology in-vitro. We demonstrate the fidelity of such all-optical recording of light-induced activity in the human retina, namely the optoretinogram, across a range of spatiotemporal scales. This approach incorporates functional evaluation into a routine clinical examination of retinal structure and thus holds enormous potential to serve as a biomarker for early disease diagnosis and monitoring therapeutic efficacy.

Abstract Optoretinography – the non-invasive, optical imaging of light-induced functional activity in the retina – stands to provide a critical biomarker for testing the safety and efficacy of new therapies as well as their rapid translation to the clinic. Optical phase change in response to light, as readily accessible in phase-resolved OCT, offers a path towards all-optical imaging of retinal function. However, typical human eye motion adversely affects phase stability and precludes the recording of fast light-induced retinal events. Here we introduce a high-speed line-scan spectral domain OCT with adaptive optics (AO), aimed at volumetric imaging and phase-resolved acquisition of retinal responses to light. By virtue of parallel acquisition of an entire retinal cross-section (B-scan) in a single high-speed camera frame, depth-resolved tomograms at speeds up to 16 kHz were achieved with high sensitivity and phase stability. To optimize spectral and spatial resolution, an anamorphic detection paradigm was introduced enabling improved light collection efficiency and signal roll-off compared to traditional methods. The benefits in speed, resolution and sensitivity were exemplified in imaging nanometer-millisecond scale light-induced optical path length changes in cone photoreceptor outer segments. With 660 nm stimuli, individual cone responses readily segregated into three clusters, corresponding to long, middle and short-wavelength cones. Recording such optoretinograms on spatial scales ranging from individual cones, to 100 μm-wide retinal patches offers a robust and sensitive biomarker for cone function in health and disease. Furthermore, incorporating this capability into an easy-to-use and ubiquitous diagnostic platform of OCT enables its widespread application to patient care and drug development.

Abstract Photosensitivity to ultraviolet (UV) light affects up to ~80% of lupus patients and can exacerbate local skin disease as well as systemic disease, including lupus nephritis. While neutrophils have been implicated in local tissue injury in lupus in response to immune complex deposition, whether and how they play a role in photosensitivity induced systemic disease is unknown. Here, we show that following skin exposure to UV light, neutrophils migrate not only to the skin, but also to the kidney, in an IL-17A-dependent manner. Kidney infiltrating neutrophils produced reactive oxygen species and their presence was associated with upregulation of endothelial adhesion molecules and inflammatory cytokines as well as the induction of kidney injury markers, including transient proteinuria. Neutrophils were responsible for inflammation and renal injury as demonstrated by experiments that inhibited neutrophil mobilization. Exploiting a mouse model containing photoactivatable immune cells, we observed that a subset of neutrophils found in the kidney had transited through UV light-exposed skin suggesting reverse transmigration. These findings demonstrate that neutrophils mediate transient kidney injury following skin exposure to UV light and, coupled with observations identifying similar neutrophil phenotypes in human lupus, could provide a mechanistic link to explain sun-induced systemic lupus flares.

Abstract Line-scan OCT, incorporated with adaptive optics (AO), offers high resolution, speed and sensitivity for imaging retinal structure and function in vivo . Here, we introduce its implementation with reflective mirror-based afocal telescopes, optimized for imaging light-induced retinal activity (optoretinography) and weak retinal reflections at the cellular scale. A non-planar optical design was followed based on previous recommendations with key differences specific to a line-scan geometry. The three beam paths fundamental to an OCT system – illumination/sample, detection, and reference – were modeled in Zemax optical design software to yield theoretically diffraction-limited performance over a 2.2 deg. field-of-view and 1.5 D vergence range at the eye’s pupil. The performance for imaging retinal structure was exemplified by cellular-scale visualization of retinal ganglion cells, macrophages, foveal cones, and rods in human observers. The performance for functional imaging was exemplified by resolving the light-evoked optical changes in foveal cone photoreceptors where the spatial resolution was sufficient for cone spectral classification at an eccentricity 0.3 deg. from the foveal center. This enabled the first in vivo demonstration of reduced S-cone (short-wavelength cone) density in the human foveola, thus far observed only in ex vivo histological preparations. Together, the feasibility for high resolution imaging of retinal structure and function demonstrated here holds significant potential for basic science and translational applications.