Mechanisms regulating self-renewal and cell fate decisions in mammalian stem cells are poorly understood. We determined global gene expression profiles for mouse and human hematopoietic stem cells and other stages of the hematopoietic hierarchy. Murine and human hematopoietic stem cells share a number of expressed gene products, which define key conserved regulatory pathways in this developmental system. Moreover, in the mouse, a portion of the genetic program of hematopoietic stem cells is shared with embryonic and neural stem cells. This overlapping set of gene products represents a molecular signature of stem cells.

Abstract High interleukin (IL)-6 levels are associated with more severe clinical manifestations in patients hospitalized with COVID-19, but the complex role of IL-6 in antiviral and inflammatory processes has made it difficult to decipher its involvement in the disease. IL-6 receptor blockade by tocilizumab (anti-IL6R; Actemra) is used globally for the treatment of severe COVID-19, yet a molecular understanding of the therapeutic benefit remains unclear. We characterized the immune profile and identified cellular and molecular pathways directly modified by tocilizumab in peripheral blood samples collected from patients enrolled in the COVACTA study, a phase 3, randomized, double-blind, placebo-controlled trial that assessed the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with severe COVID-19 pneumonia. We identified factors predicting disease severity and clinical outcomes, including markers of inflammation, lymphopenia, myeloid dysregulation, and organ injury. Proteomic analysis confirmed a pharmacodynamic effect for tocilizumab in addition to identifying novel pharmacodynamic biomarkers. Transcriptomic analysis revealed that tocilizumab treatment leads to faster resolution of lymphopenia and myeloid dysregulation associated with severe COVID-19, indicating greater anti-inflammatory activity relative to standard of care and potentially leading to faster recovery in patients hospitalized with COVID-19. One sentence summary Interleukin-6 receptor blockade with tocilizumab accelerated resolution of myeloid dysfunction and lymphopenia in patients hospitalized with COVID-19

Ulcerative colitis (UC) is an idiopathic chronic inflammatory disease of the colon with sharply rising global prevalence. Dysfunctional epithelial compartment (EC) dynamics are implicated in UC pathogenesis although EC-specific studies are sparse. Applying orthogonal high-dimensional EC profiling to a Primary Cohort (PC; n=222), we detail major epithelial and immune cell perturbations in active UC. Prominently, reduced frequencies of mature BEST4+OTOP2+ absorptive and BEST2+WFDC2+ secretory epithelial enterocytes were associated with the replacement of homeostatic, resident TRDC+KLRD1+HOPX+ γδ+ T cells with RORA+CCL20+S100A4+ TH17 cells and the influx of inflammatory myeloid cells. The EC transcriptome (exemplified by S100A8, HIF1A, TREM1, CXCR1) correlated with clinical, endoscopic, and histological severity of UC in an independent validation cohort (n=649). Furthermore, therapeutic relevance of the observed cellular and transcriptomic changes was investigated in 3 additional published UC cohorts (n=23, 48 and 204 respectively) to reveal that non-response to anti-Tumor Necrosis Factor (anti-TNF) therapy was associated with EC related myeloid cell perturbations. Altogether, these data provide high resolution mapping of the EC to facilitate therapeutic decision-making and personalization of therapy in patients with UC.

Ulcerative colitis (UC) is a chronic inflammatory large bowel disease characterized by immune cell infiltration and continuous erosion of intestinal crypts, causing severe ulceration and abdominal pain. In the etrolizumab Phase 3 studies, transcriptional analyses of colonic biopsies revealed reductions in genes associated with aEb7+ intraepithelial lymphocytes with etrolizumab but not adalimumab. Both treatments significantly reduced stromal and myeloid cell-associated genes, with changes associated with MCS remission status. Generation of a single-cell atlas from inflamed and uninflamed colonic biopsies from UC patients led to the identification of thirty-six discrete cell populations, including cells of the myeloid compartment. The UC atlas was used to generate cell-specific signatures, allowing for cellular deconvolution of the Phase 3 datasets. It revealed significant reductions in neutrophil subsets, monocyte-derived macrophages, and inflammatory fibroblasts, as well as increases in colonic epithelial cells common to both etrolizumab and adalimumab. Pseudo-time trajectory analyses identified four unique neutrophil subsets with unique cell phenotypes reflecting changes in cell state or differentiation from PADI4hi, OSMhi, MX1hi, and ultimately to CXCR4hi populations. PADI4hi and OSMhi neutrophils exhibited high levels of proteases (MMP9, LYZ), inflammatory cytokines (CXCL1, IL1B, OSM), and abundant cytokine or chemokine receptors (CXCR1, CXCR2). MX1 populations expressed markers indicating prior IFN exposure (MX1, IFIT1). In contrast, more differentiated or mature neutrophils exhibited high levels of CXCL2, TNF-a, and CXCR4, as well as angiogenic factors like VEGFA. PADI4hi and OSMhi neutrophils, we predict, have abundant cytokine and chemokine interactions with inflammatory fibroblasts within the inflamed colon, such as OSM: OSMR and IL1B: IL1R1 interactions. Changes in PADI4hi and OSMhi neutrophils were closely associated with MCS remission in both etrolizumab and adalimumab-treated patients. In contrast, only minor changes in CXCR4hi neutrophils were observed and not associated with clinical outcomes. Our results suggest that neutrophils are not only heterogeneous in phenotype but have abundant cell-cell interactions in inflamed colonic tissue that are likely implicated in maintaining chronic disease activity. We hypothesize that limiting the interactions between neutrophils and other myeloid cells with resident cells such as inflammatory fibroblasts may reduce the production of inflammatory mediators and limit activation and infiltration of neutrophils, which may be necessary for achieving greater rates of clinical remission in response to interventional agents.