In the present study, we have investigated the distribution of HIV-specific and HIV-infected CD4 T cells within different populations of memory CD4 T cells isolated from lymph nodes of viremic HIV-infected subjects. Four memory CD4 T cell populations were identified on the basis of the expression of CXCR5, PD-1, and Bcl-6: CXCR5−PD-1−Bcl-6−, CXCR5+PD-1−Bcl-6−, CXCR5−PD-1+Bcl-6−, and CXCR5+PD-1+Bcl-6+. On the basis of Bcl-6 expression and functional properties (IL-21 production and B cell help), the CXCR5+PD-1+Bcl-6+ cell population was considered to correspond to the T follicular helper (Tfh) cell population. We show that Tfh and CXCR5−PD-1+ cell populations are enriched in HIV-specific CD4 T cells, and these populations are significantly increased in viremic HIV-infected subjects as compared with healthy subjects. The Tfh cell population contained the highest percentage of CD4 T cells harboring HIV DNA and was the most efficient in supporting productive infection in vitro. Replication competent HIV was also readily isolated from Tfh cells in subjects with nonprogressive infection and low viremia (<1,000 HIV RNA copies). However, only the percentage of Tfh cells correlated with the levels of plasma viremia. These results demonstrate that Tfh cells serve as the major CD4 T cell compartment for HIV infection, replication, and production.

Abstract Background Kidney transplantation using deceased donors still suffers from high post-operative dysfunction rate. During implantation into the recipient, the kidney rewarms. This second warm ischemia time, which is not monitored, is harmful especially if prolonged. We recently developed an intra-abdominal cooling device that efficiently prevents kidney rewarming during robotic transplantation, and prevent ischemia-reperfusion injuries. Here, we tested the benefits of this cooling device during open kidney transplantation in pigs. Materials Kidneys were procured from large pigs by open bilateral nephrectomy. Following procurement, kidneys were flushed with 4°C Institut Georges Lopez-1 preservation solution, and placed on ice for 128.5 ± 23.2 min. The cooling device was used to continuously cool down the kidney during the vascular anastomosis time. Methods Animals underwent double sequential autologous open renal transplantation with (n = 7) and without (n = 6) intra-abdominal cooling. Renal cortex temperature and urine output were monitored. The severity of the ischemia reperfusion lesions was analyzed by histology (modified Goujon score). Results Mean anastomosis time was similar between groups (43.9 ± 13 min). At reperfusion, the renal cortex temperature was lower in the group with cooling (4.3 ± 1.1°C vs 26.5 ± 5.5°C p <0.001 ). The cooled kidneys tended to be protected from injury, including some histopathological ischemia–reperfusion lesions. With the device, kidneys had a better immediate post-operative urine output ( p=0.05 ). Conclusions Our results indicate that the intra-abdominal cooling device significantly reduces second warm ischemic time during transplantation, is technically safe, and does not prolong anastomotic time.

Abstract Background Intimal hyperplasia (IH) remains a major limitation in the long-term success of any type of revascularization. IH is due to vascular smooth muscle cell (VSMC) dedifferentiation, proliferation and migration. The gasotransmitter Hydrogen Sulfide (H 2 S) inhibits IH in pre-clinical models. However, there is currently no clinically approved H 2 S donor. Here we used sodium thiosulfate (STS), a clinically-approved source of sulfur, to limit IH. Methods Hypercholesterolemic LDLR deleted (LDLR -/- ), WT or CSE -/- male mice randomly treated with 4g/L STS in the water bottle were submitted to focal carotid artery stenosis to induce IH. Human vein segments were maintained in culture for 7 days to induce IH. Further in vitro studies were conducted in primary human vascular smooth muscle cell (VSMC). Findings STS inhibited IH in mice and in human vein segments. STS inhibited cell proliferation in the carotid artery wall and in human vein segments. STS increased polysulfides in vivo and protein persulfidation in vitro , which correlated with microtubule depolymerization, cell cycle arrest and reduced VSMC migration and proliferation. Interpretation STS, a drug used for the treatment of cyanide poisoning and calciphylaxis, protects against IH in a mouse model of arterial restenosis and in human vein segments. STS acts as an H 2 S donor to limit VSMC migration and proliferation via microtubule depolymerization. Funding This work was supported by the Swiss National Science Foundation (grant FN-310030_176158 to FA and SD and PZ00P3-185927 to AL); the Novartis Foundation to FA; and the Union des Sociétés Suisses des Maladies Vasculaires to SD. Graphical Abstract Research in context Evidence before this study Intimal hyperplasia (IH) is a complex process leading to vessel restenosis, a major complication following cardiovascular surgeries and angioplasties. Therapies to limit IH are currently limited. Pre-clinical studies suggest that hydrogen sulfide (H 2 S), an endogenous gasotransmitter, limits restenosis. However, despite these potent cardiovascular benefits in pre-clinical studies, H 2 S-based therapeutics are not available yet. Sodium thiosulfate (Na 2 S 2 O 3 ) is an FDA-approved drug used for the treatment of cyanide poisoning and calciphylaxis, a rare condition of vascular calcification affecting patients with end-stage renal disease. Evidence suggest that thiosulfate may generate H 2 S in vivo in pre-clinical studies. Added value of this study Here, we demonstrate that STS inhibit IH in a surgical mouse model of IH and in an ex vivo model of IH in human vein culture. We further found that STS increases circulating polysulfide levels in vivo and inhibits IH via decreased cell proliferation via disruption of the normal cell’s cytoskeleton. Finally, using CSE knockout mice, the main enzyme responsible for H 2 S production in the vasculature, we found that STS rescue these mice from accelerated IF formation. Implications of all the available evidence These findings suggest that STS holds strong translational potentials to limit IH following vascular surgeries and should be investigated further.

Abstract Objectives Hypertension is a major risk factor for intimal hyperplasia (IH) and restenosis following vascular and endovascular interventions. Pre-clinical studies suggest that hydrogen sulfide (H 2 S), an endogenous gasotransmitter, limits restenosis. While there is no clinically available pure H 2 S releasing compound, the sulfhydryl-containing angiotensin-converting enzyme inhibitor Zofenopril is a source of H 2 S. Here, we hypothesized that Zofenopril, due to H 2 S release, would be superior to other non-sulfhydryl containing angiotensin converting enzyme inhibitor (ACEi), in reducing intimal hyperplasia. Materials Spontaneously hypertensive male Cx40 deleted mice (Cx40 −/− ) or WT littermates were randomly treated with Enalapril 20 mg (Mepha Pharma) or Zofenopril 30 mg (Mylan SA). Discarded human vein segments and primary human smooth muscle cells (SMC) were treated with the active compound Enalaprilat or Zofenoprilat. Methods IH was evaluated in mice 28 days after focal carotid artery stenosis surgery and in human vein segments cultured for 7 days ex vivo . Human primary smooth muscle cell (SMC) proliferation and migration were studied in vitro . Results Compared to control animals (intima/media thickness=2.3±0.33), Enalapril reduced IH in Cx40 −/− hypertensive mice by 30% (1.7±0.35; p=0.037), while Zofenopril abrogated IH (0.4±0.16; p<.0015 vs. Ctrl and p>0.99 vs. sham-operated Cx40 −/− mice). In WT normotensive mice, enalapril had no effect (0.9665±0.2 in control vs 1.140±0.27; p>.99), while Zofenopril also abrogated IH (0.1623±0.07, p<.008 vs. Ctrl and p>0.99 vs. sham-operated WT mice). Zofenoprilat, but not Enalaprilat, also prevented intimal hyperplasia in human veins segments ex vivo . The effect of Zofenopril on carotid and SMC correlated with reduced SMC proliferation and migration. Zofenoprilat inhibited the MAPK and mTOR pathways in SMC and human vein segments. Conclusion Zofenopril provides extra beneficial effects compared to non-sulfhydryl ACEi to reduce SMC proliferation and restenosis, even in normotensive animals. These findings may hold broad clinical implications for patients suffering from vascular occlusive diseases and hypertension. Graphical Abstract What this paper adds The current strategies to reduce intimal hyperplasia (IH) principally rely on local drug delivery, in endovascular approach. The oral angiotensin converting enzyme inhibitor (ACEi) Zofenopril has additional effects compared to other non-sulfyhydrated ACEi to prevent intimal hyperplasia and restenosis. Given the number of patients treated with ACEi worldwide, these findings call for further prospective clinical trials to test the benefits of sulfhydrated ACEi over classic ACEi for the prevention of restenosis in hypertensive patients.

A recent study conducted in blood has proposed CD32 as the marker identifying the 'elusive' HIV reservoir. We have investigated the distribution of CD32+ CD4 T cells in blood and lymph nodes (LNs) of healthy HIV-1 uninfected, viremic untreated and long-term treated HIV-1 infected individuals and their relationship with PD-1+ CD4 T cells. The frequency of CD32+ CD4 T cells was increased in viremic as compared to treated individuals in LNs and a large proportion (up to 50%) of CD32+ cells co-expressed PD-1 and were enriched within T follicular helper cells (Tfh) cells. We next investigated the role of LN CD32+ CD4 T cells in the HIV reservoir. Total HIV DNA was enriched in CD32+ and PD-1+ CD4 T cells as compared to CD32- and PD-1- cells in both viremic and treated individuals but there was no difference between CD32+ and PD-1+ cells. There was not enrichment of latently infected cells with inducible HIV-1 in CD32+ versus PD-1+ cells in ART treated individuals. HIV-1 transcription was then analyzed in LN memory CD4 T cell populations sorted on the basis of CD32 and PD-1 expression. CD32+PD-1+ CD4 T cells were significantly enriched in cell associated HIV RNA as compared to CD32-PD-1- (average 5.2 fold in treated and 86.6 fold in viremics), to CD32+PD-1- (2.2 fold in treated and 4.3 fold in viremics) and to CD32-PD-1+ cell populations (2.2 fold in ART treated and 4.6 fold in viremics). Similar levels of HIV-1 transcription were found in CD32+PD-1- and CD32-PD-1+ CD4 T cells. Interestingly, the proportion of CD32+ and PD-1+ CD4 T cells negatively correlated with CD4 T cell counts and length of therapy while positively correlated with viremia. Therefore, the expression of CD32 identifies, independently of PD-1, a CD4 T cell population with persistent HIV-1 transcription and CD32 and PD-1 co-expression the CD4 T cell population with the highest levels of HIV-1 transcription in both viremic and treated individuals.