Abstract Rumen contents have considerable utility in converting plant biomass to short- chain fatty acids (SCFAs) when used as inoculum for in vitro fermentation. To better understand the microbial communities and their functions when in vitro ruminal fermentation, the microbiome and SCFAs production were investigated using rumen simulation technique (RUSITEC) system which was inoculated/co- inoculated with rumen contents from goat and cow. This study reconstructed 1677 microbial metagenome-assembled genomes (MAGs) from metagenomic sequencing. The copresent microbiome containing 298 MAGs were found in metagenomic data of these contents and previous ruminal representative samples. These copresent MAGs were overrepresented in decomposing various substrates, especially pectin and xylan. Additionally, the SCFAs productions in RUSITEC were linked with copresent MAGs. Copresent MAGs obtained from this study shows promise to point out the direction for further research on in vitro ruminal fermentation, and enables a better understanding of rumen microbiotal structures and functions under in vitro condition. Graphical Abstract

Sequencing of viral infections has become increasingly common over the last decade. Deep sequencing data in particular have proven useful in characterizing the roles that genetic drift and natural selection play in shaping within-host viral populations. They have also been used to estimate transmission bottleneck sizes from identified donor-recipient pairs. These bottleneck sizes quantify the number of viral particles that establish genetic lineages in the recipient host and are important to estimate due to their impact on viral evolution. Current approaches for estimating bottleneck sizes exclusively consider the subset of viral sites that are observed as polymorphic in the donor individual. However, allele frequencies can change dramatically over the course of an individual's infection, such that sites that are polymorphic in the donor at the time of transmission may not be polymorphic in the donor at the time of sampling and allele frequencies at donor-polymorphic sites may change dramatically over the course of a recipient's infection. Because of this, transmission bottleneck sizes estimated using allele frequencies observed at a donor's polymorphic sites may be considerable underestimates of true bottleneck sizes. Here, we present a new statistical approach for instead estimating bottleneck sizes using patterns of viral genetic variation that arose de novo within a recipient individual. Specifically, our approach makes use of the number of clonal viral variants observed in a transmission pair, defined as the number of viral sites that are monomorphic in both the donor and the recipient but carry different alleles. We first test our approach on a simulated dataset and then apply it to both influenza A virus sequence data and SARS-CoV-2 sequence data from identified transmission pairs. Our results confirm the existence of extremely tight transmission bottlenecks for these two respiratory viruses, using an approach that does not tend to underestimate transmission bottleneck sizes.

Abstract Acquired resistance to temozolomide (TMZ) is a major obstacle in glioblastoma treatment. MGMT, a DNA repair protein, and the methylation at its gene promoter, plays an important role in TMZ resistance. However, some evidences have suggested a MGMT-independent mechanisms underlying TMZ resistance. Here, we used MGMT enhancer as a model and discovered that its deletion in glioma cells of low MGMT expression induced increased sensitivity to temozolomide. Analysis of a combination of RNA-seq and Capture Hi-C further suggested multiple long-range target genes regulated by the MGMT enhancer and that interactions may play important roles in glioma cell sensitivity to TMZ. This study reveals a novel mechanism of regulation of TMZ sensitivity in glioma cells.