Rationale & ObjectiveEpidemiologic and clinical studies have suggested that urate-lowering therapy may slow the progression of chronic kidney disease (CKD). However, definitive evidence is lacking.Study DesignRandomized, double-blind, placebo-controlled trial.Setting & Participants467 patients with stage 3 CKD and asymptomatic hyperuricemia at 55 medical institutions in Japan.InterventionParticipants were randomly assigned in a 1:1 ratio to receive febuxostat or placebo for 108 weeks.OutcomesThe primary end point was the slope (in mL/min/1.73 m2 per year) of estimated glomerular filtration rate (eGFR). Secondary end points included changes in eGFRs and serum uric acid levels at 24, 48, 72, and 108 weeks of follow-up and the event of doubling of serum creatinine level or initiation of dialysis therapy.ResultsOf 443 patients who were randomly assigned, 219 and 222 assigned to febuxostat and placebo, respectively, were included in the analysis. There was no significant difference in mean eGFR slope between the febuxostat (0.23 ± 5.26 mL/min/1.73 m2 per year) and placebo (−0.47 ± 4.48 mL/min/1.73 m2 per year) groups (difference, 0.70; 95% CI, −0.21 to 1.62; P = 0.1). Subgroup analysis demonstrated a significant benefit from febuxostat in patients without proteinuria (P = 0.005) and for whom serum creatinine concentration was lower than the median (P = 0.009). The incidence of gouty arthritis was significantly lower (P = 0.007) in the febuxostat group (0.91%) than in the placebo group (5.86%). Adverse events specific to febuxostat were not observed.LimitationsGFR was estimated rather than measured, and patients with stages 4 and 5 CKD were excluded.ConclusionsCompared to placebo, febuxostat did not mitigate the decline in kidney function among patients with stage 3 CKD and asymptomatic hyperuricemia.FundingFunded by Teijin Pharma Limited.Trial RegistrationRegistered at the UMIN (University Hospital Medical Information Network) Clinical Trials Registry with study number UMIN000008343. Epidemiologic and clinical studies have suggested that urate-lowering therapy may slow the progression of chronic kidney disease (CKD). However, definitive evidence is lacking. Randomized, double-blind, placebo-controlled trial. 467 patients with stage 3 CKD and asymptomatic hyperuricemia at 55 medical institutions in Japan. Participants were randomly assigned in a 1:1 ratio to receive febuxostat or placebo for 108 weeks. The primary end point was the slope (in mL/min/1.73 m2 per year) of estimated glomerular filtration rate (eGFR). Secondary end points included changes in eGFRs and serum uric acid levels at 24, 48, 72, and 108 weeks of follow-up and the event of doubling of serum creatinine level or initiation of dialysis therapy. Of 443 patients who were randomly assigned, 219 and 222 assigned to febuxostat and placebo, respectively, were included in the analysis. There was no significant difference in mean eGFR slope between the febuxostat (0.23 ± 5.26 mL/min/1.73 m2 per year) and placebo (−0.47 ± 4.48 mL/min/1.73 m2 per year) groups (difference, 0.70; 95% CI, −0.21 to 1.62; P = 0.1). Subgroup analysis demonstrated a significant benefit from febuxostat in patients without proteinuria (P = 0.005) and for whom serum creatinine concentration was lower than the median (P = 0.009). The incidence of gouty arthritis was significantly lower (P = 0.007) in the febuxostat group (0.91%) than in the placebo group (5.86%). Adverse events specific to febuxostat were not observed. GFR was estimated rather than measured, and patients with stages 4 and 5 CKD were excluded. Compared to placebo, febuxostat did not mitigate the decline in kidney function among patients with stage 3 CKD and asymptomatic hyperuricemia.

Fabry disease (FD) is an X-linked disorder resulting in a deficiency of α-galactosidase A (GLA) activity. The R112H mutation of GLA is relatively common in Japanese FD patients, characterized by a late-onset phenotype, almost normal to mild lyso-Gb3 elevation, and mild clinical symptoms, despite low GLA activity. This is due to the structural features of the R112H GLA protein. We herein report the case of a 42-year-old male patient with late-onset FD with a R112H mutation. The patient exhibited only renal involvement with no other organ damage and was successfully treated with galactosidase beta and subsequent migalastat for approximately 10 years. Especially, migalastat was clinically effective in normalizing plasma lyso-Gb3 levels and inhibiting the progression of renal damage associated with FD. Therefore, the use of migalastat in the FD patients with R112H mutation is highly recommended based on this case report.

Objective: In patients of diabetes mellitus (DM), heart rate variability (HRV), an index of autonomic nervous system activity, tends to be lower than in healthy individuals. This reduction in HRV is associated with an increased risk of cardiovascular diseases. We aimed to evaluate HRV under varying conditions with novel indicators in patients with DM. Methods: The patients were recruited from patients with type 2 DM (T2DM) aged 20 to 79 years old from two facilities from January 2020 to December 2023. The control comprised patients without DM. Patients taking oral corticosteroids, adrenergic agonists and antagonists, and those with malignant tumors were excluded. Heart rate (HR) was measured under varying conditions of rest, standing and deep breathing (inhalation and exhalation alternating every 5 seconds). The R-R interval variation was continuously recorded in each segment of 33 beats. Subsequently, the peak HRs for each load were obtained: minimum HR during rest (mHr), maximum HR during standing (MHs), and minimum HR during deep breathing (mHb). Additionally, the SD-RR for each load was calculated. Results: We analyzed a total of 117 subjects, including 75 with T2DM and 42 without DM. The participant demographics were as follows: mean age of 55.4±13.9 years, BMI of 25.9±5.6, eGFR of 71.5±26.1 mL/min/1.73m 2 , HbA1c of 7.31±2.26 %, with 46 % of male, and duration of T2DM in patient group at 8.2±8.3 years. The subjects were categorized into three groups: G1 - non DM with CV-RR≧2, G2 - T2DM with CV-RR≧2, and G3 - T2DM with CV-RR<2.mHr was G1: 64.5±7.4, G2: 69.4±7.7, G3: 75.2±13.1 (beats/minute, p<0.001). G3 is markedly higher than G1 and G2. Furthermore, the HR change ratio from mHr to MHs was: G1: 1.36±0.12, G2: 1.31±0.11, G3: 1.22±0.10 (p<0.001). G3 is markedly lower than G1 and G2. The HR change ratio from mHr to mHb was: G1: 0.99±0.04, G2: 0.96±0.05, G3: 0.96±0.05 (p=0.043), with G3 being markedly lower than G1. The SD-RR during rest was: G1: 26.4±18.6, G2: 28.0±12.5, G3: 10.1±4.4 (p<0.001), with G3 being markedly lower than G1 and G2. Conclusion: Assessing R-R intervals under varying conditions of rest, standing, and deep breathing can indicate autonomic nervous system dysfunction among patients with T2DM.

Abstract Oxidative stress plays a significant role in the progression of chronic kidney disease. Thioredoxin 1 (Txn1) is one of the enzymatic antioxidants to regulate redox balance. However, the molecular mechanisms by Txn1 affects renal homeostasis remain unclear. This study aimed at elucidating the pathophysiology of Txn1 mutations in renal function. We used rats with the Txn1- F54L mutation generated by N-ethyl-N-nitrosourea mutagenesis. Laboratory tests and pathological examinations were performed in wild-type (WT) rats and in rats with heterozygous and homozygous Txn1 -F54L mutations. We performed RNA-seq analysis of the WT and homozygotes. To confirm phenotypic reproducibility, the Txn1 -F54L mutation was generated in rats with different genetic backgrounds using CRISPR/Cas9 genome editing technology. Txn1 -F54L mutant rats exhibited progressive albuminuria, hypoalbuminemia, hypercholesterolemia, and hypertension. Renal pathology revealed marked nephrosclerosis, tubular dilatation, interstitial fibrosis, and decreased number of mitochondria, mainly in the paroxysmal tubules. We confirmed a similar phenotype of chronic kidney disease (CKD) in different rat strains. RNA-seq showed the downregulation of mitochondria-related genes and significant upregulation of genes associated with inflammation, pyroptosis, apoptosis, and necroptosis in mutant rats. Our results show that the Txn1 mutation is a monogenic cause of CKD termination. The underlying pathology involves several regulated cell-death pathways. Thus, our study provides a new animal model of oxidative stress-induced CKD. Txn1- F54L mutant rats will aid in developing therapeutic strategies for CKD. Translational Statement We found that the deficiency of thioredoxin (Txn1), which regulates oxidative stress, spontaneously caused chronic kidney disease (CKD) in rats. The Txn1-F54L ( Adem ) rat is a new model of CKD with complications such as anemia, hypertension, and cardiovascular disease. Renal pathology revealed nephrosclerosis, interstitial fibrosis, and mitochondrial damage. The molecular basis of the underlying pathologies included inflammation, pyroptosis, apoptosis, and necroptosis. These pathological changes are partially linked to renal diseases such as diabetic nephropathy, hypertensive nephrosclerosis, and ischemic reperfusion injury. Adem rats could help understand the common pathological mechanisms of these renal diseases and develop therapeutic strategies.

Objective: Chronic infusion of angiotensin II (AngII) promotes development of abdominal aortic aneurysms (AAAs) in Apolipoprotein E-deficient (ApoE-/-) mice. Interleukin 33 (IL-33), known as one of IL-1 family, is rapidly released from damaged endothelial and epithelial cells. IL-33 binds to its receptor, ST2, and exerts various physiological functions through its downstream signaling. Previous studies have shown that exogenous IL-33 attenuates development of AAAs through wound healing resolution. The purpose of this study was to evaluate whether IL-33 deficiency exacerbated development of AAAs by using IL-33xApoE double deficient (IL-33-/-xApoE-/-) mice. Methods and Results: Male ApoE-/- and IL-33-/-xApoE-/- (8-12 weeks old) mice were assigned into saline infused group (ApoE-/- n=5, IL-33-/-xApoE-/- n=7) and AngII infused group (ApoE-/- n=19, IL-33-/-xApoE-/- n=19). Mice were infused subcutaneously with either saline or AngII by osmotic minipumps for 4 weeks. During 4-week AngII infusion, 3 mice died by AAA rupture in each AngII-infused group. There was no significant difference in ex vivo abdominal aortic width between saline infused groups (ApoE-/- 0.87±0.17 mm vs IL-33-/-xApoE-/- 0.87±0.14 mm, n.s.) nor body weight (ApoE-/- 27.3±0.9 g vs IL-33-/-xApoE-/- 27.9±0.9 g, n.s.) but serum total cholesterol concentrations in IL-33-/-xApoE-/- was higher than in ApoE-/- (522±85 mg/dL vs 427±108 mg/dL, p=0.026). AngII equally elevated systolic blood pressure (ApoE-/- 151±15 mmHg, IL-33-/-xApoE-/- 155±17 mmHg, n.s.). AngII increased ex vivo maximum abdominal aortic width in AngII infused groups, but AAAs were further exacerbated in the group of IL-33-/-xApoE-/- mice (ApoE-/- 1.31±0.09 mm vs IL-33-/-xApoE-/- 1.76±0.09 mm, p=0.001). In addition, the severity of AAAs in AngII infused groups was significantly worse in IL-33-/-xApoE-/- than in ApoE-/- (p=0.037). Conclusion: Our study demonstrated IL-33 deficiency exacerbated AngII-induced AAAs in male ApoE-/- mice.

BACKGROUND: Cytoskeletal structural proteins maintain cell structural integrity by bridging extracellular matrix (ECM) with contractile filaments. During AAA development, (i) aortic medial degeneration is associated with loss of smooth muscle cell (SMC) integrity, and (ii) fibrogenic mesenchymal cells (FMSCs) mediates ECM remodeling. Calpains cleave cytoskeletal proteins that maintain cell structural integrity. Pharmacological inhibition of calpains exert beneficial effects on Angiotensin II (AngII)-induced AAAs in low density receptor deficient (LDLR-/-) mice. OBJECTIVES: To evaluate the functional contribution of FMSCs-derived calpain-2 on (i) cytoskeletal structural protein and ECM alterations, and (ii) AAA progression. METHODS: Calpain-2 protein, and cytoskeletal protein (e.g. filamin or talin) fragmentation in human and mice AAA tissues were assessed by immunohistochemical and western blot analyses. LDLR-/- mice that were either inducible-whole body or FMSC-specific calpain-2 deficient were fed a fat-enriched diet and infused with AngII for 4 weeks. The association of cytoskeletal protein to ECM was evaluated using aortic SMCs, in vitro. In addition, the effect of calpain-2 deficiency on the stability of established AAA was examined. RESULTS: Calpain-2 protein, and filamin/talin fragmentation are significantly elevated in AAAs. Ubiquitous or FMSC-specific depletion of calpain-2 suppressed AngII-induced AAAs, filamin/talin fragmentation and promoted ECM protein, collagen. Calpain-2 silencing in SMCs reduced AngII-induced filamin/talin fragmentation. In addition, silencing of filamin or talin in SMCs significantly reduced collagen protein. Furthermore, calpain-2 deficiency suppressed established AAA rupture. CONCLUSION: Calpain-2 activation promotes cytoskeletal structural protein fragmentation and ECM degradation of experimental AAA aortas. Treatment with calpain-2 specific inhibitor may facilitate the clinical management of AAA.### Competing Interest StatementThe authors have declared no competing interest.

Introduction ACE cleaves angiotensin I (Ang I) to angiotensin II (Ang II) inducing vasoconstriction via Ang II type 1 (AT1) receptor, while ACE2 cleaves Ang II to Ang (1–7) causing vasodilatation by acting on the Mas receptor. In diabetic kidney disease (DKD), it is still unclear whether plasma or urine ACE2 levels predict renal outcomes or not. Research design and methods Among 777 participants with diabetes enrolled in the Urinary biomarker for Continuous And Rapid progression of diabetic nEphropathy study, the 296 patients followed up for 9 years were investigated. Plasma and urinary ACE2 levels were measured by the ELISA. The primary end point was a composite of a decrease of estimated glomerular filtration rate (eGFR) by at least 30% from baseline or initiation of hemodialysis or peritoneal dialysis. The secondary end points were a 30% increase or a 30% decrease in albumin-to-creatinine ratio from baseline to 1 year. Results The cumulative incidence of the renal composite outcome was significantly higher in group 1 with lowest tertile of plasma ACE2 (p=0.040). Group 2 with middle and highest tertile was associated with better renal outcomes in the crude Cox regression model adjusted by age and sex (HR 0.56, 95% CI 0.31 to 0.99, p=0.047). Plasma ACE2 levels demonstrated a significant association with 30% decrease in ACR (OR 1.46, 95% CI 1.044 to 2.035, p=0.027) after adjusting for age, sex, systolic blood pressure, hemoglobin A1c, and eGFR. Conclusions Higher baseline plasma ACE2 levels in DKD were protective for development and progression of albuminuria and associated with fewer renal end points, suggesting plasma ACE2 may be used as a prognosis marker of DKD. Trial registration number UMIN000011525.

Objectives: Patients with hemodialysis (HD) have a higher incidence of CVD and worse prognosis than non-dialysis patients. Recently, a new device can measure novel parameters of arterial stiffness such as brachial artery volume elastic modulus (VE) and estimated brachial artery lumen cross-sectional area (eA) in a minimally invasive and simplified manner. Using this device, we investigated the relationship between these parameters and prognosis in HD patients. Methods and Results: This was a multicenter, prospective, observational study. A total of 246 patients on maintenance dialysis at six maintenance dialysis centers were registered. They were 158 men (64%), mean age 69±13 years, mean years on dialysis 5.8±6.2 years, BP 143±23/78±13 mmHg, Hb 11.5±6.9 g/dL, Alb 3.5±0.4 g/dL, corrected-Ca 9.2±0.8 mg/dL, P 5.4±2.7 mg/dL, iPTH 164±180 pg/mL. 125 patients (51%) had diabetes mellitus and 122 patients (50%) were current and past smokers. 51 (20%) had a history of ischemic heart disease, 23 (9%) had a history of symptomatic stroke, and 45 (18%) had a history of peripheral arterial disease. VE and eA were measured in the non-shunt limb during dialysis. Outcomes were death and MACE (non-fatal ischemic heart disease, symptomatic stroke, and PAD requiring intervention). 44 patients died, 20 had ischemic heart disease, 6 had symptomatic stroke, and 6 had PAD during the 3-year observation period. Patients were divided into 2 groups based on the median VE value and analyzed using the Kaplan-Meier method for death plus MACE, death, and MACE each, but no significant differences were found. eA was also examined in the same way, but no significant differences were found. Further, patients were divided into 4 groups based on the VE and eA values (high&high, high&low, low&high, and low&low for VE&eA, respectively) and were studied in the same fashion, the high&low and low&high groups had significantly higher incidence of death plus MACE (log-rank p=0.0184) and MACE (log-rank p=0.0310) than the high&high and low&low groups. Conclusion: In HD patients, we found that the combined assessment of VE and eA was significantly associated with their prognosis, suggesting that these parameters may be clinically useful.