Sjögren's syndrome is a common autoimmune disease (affecting ∼0.7% of European Americans) that typically presents as keratoconjunctivitis sicca and xerostomia. Here we report results of a large-scale association study of Sjögren's syndrome. In addition to strong association within the human leukocyte antigen (HLA) region at 6p21 (Pmeta = 7.65 × 10(-114)), we establish associations with IRF5-TNPO3 (Pmeta = 2.73 × 10(-19)), STAT4 (Pmeta = 6.80 × 10(-15)), IL12A (Pmeta = 1.17 × 10(-10)), FAM167A-BLK (Pmeta = 4.97 × 10(-10)), DDX6-CXCR5 (Pmeta = 1.10 × 10(-8)) and TNIP1 (Pmeta = 3.30 × 10(-8)). We also observed suggestive associations (Pmeta < 5 × 10(-5)) with variants in 29 other regions, including TNFAIP3, PTTG1, PRDM1, DGKQ, FCGR2A, IRAK1BP1, ITSN2 and PHIP, among others. These results highlight the importance of genes that are involved in both innate and adaptive immunity in Sjögren's syndrome.

Abstract Objective To investigate functional properties of the germinal center (GC)–like structures observed in salivary glands of patients with Sjögren's syndrome (SS) and to determine the frequency with which such structures develop. Methods Hematoxylin and eosin–stained sections from 165 minor salivary gland biopsy samples were screened for GC‐like structures. Expression of markers for GCs (CD3, CD20, Ki‐67, CD35, CD31), adhesion molecules (intercellular adhesion molecule 1, lymphocyte function–associated antigen 1, vascular cell adhesion molecule 1, very late activation antigen 4), chemokines (CXCL13, CCL21, CXCL12), and production of autoantibodies (anti‐Ro/SSA and anti‐La/SSB) was investigated by immunohistochemistry. Apoptosis was investigated by TUNEL staining. Results GC‐like structures were observed in 28 of 165 patients (17%). When GCs were defined as T and B cell aggregates with proliferating cells with a network of follicular dendritic cells and activated endothelial cells, such microenvironments were found in all patients in whom structures with GC‐like morphology were observed. The defined microenvironments were not found in patients without apparent GC‐like structures. The GCs formed within the target tissue showed functional features with production of autoantibodies (anti‐Ro/SSA and anti‐La/SSB) and apoptotic events (by TUNEL staining), and the local production of anti‐Ro/SSA and anti‐La/SSB autoantibodies was significantly increased ( P = 0.04) in patients with GC development. Conclusion Lymphoid neogenesis and functional ectopic GC formation take place in salivary glands of a subset of patients with SS. Our data suggest that the ectopic secondary lymphoid follicles contain all elements needed for driving the autoimmune response. Our findings underscore a key role for the target organ in recruitment of inflammatory cells and propagation of the disease process.

Ro52/Trim21 is targeted as an autoantigen in systemic lupus erythematosus and Sjögren's syndrome. Polymorphisms in the Ro52 gene have been linked to these autoimmune conditions, but the molecular mechanism by which Ro52 may promote development of systemic autoimmune diseases has not been explored. To address this issue, we generated Ro52-null mice (Ro52−/−), which appear phenotypically normal if left unmanipulated. However, Ro52−/− mice develop severe dermatitis extending from the site of tissue injury induced by ear tags. The affected mice further develop several signs of systemic lupus with hypergammaglobulinemia, autoantibodies to DNA, proteinuria, and kidney pathology. Ro52, which was recently identified as an E3 ligase, mediates ubiquitination of several members of the interferon regulatory factor (IRF) family, and the Ro52-deficient mice have an enhanced production of proinflammatory cytokines that are regulated by the IRF transcription factors, including cytokines involved in the Th17 pathway (interleukin [IL] 6, IL-12/IL-23p40, and IL-17). Loss of IL-23/IL-17 by genetic deletion of IL-23/p19 in the Ro52−/− mice conferred protection from skin disease and systemic autoimmunity. These data reveal that the lupus-associated Ro52 protein is an important negative regulator of proinflammatory cytokine production, and they provide a mechanism by which a defective Ro52 function can lead to tissue inflammation and systemic autoimmunity through the IL-23–Th17 pathway.

Abstract Objectives To determine prevalence and clinical associations of anti-Four-and-a-half-LIM-domain 1 (FHL1) autoantibodies in patients with idiopathic inflammatory myopathies (IIM) and to evaluate autoantibody levels over time. Methods Sera at the time of diagnosis from patients with IIM (n = 449), autoimmune disease controls (DC, n = 130), neuromuscular diseases (NMDs, n = 16) and healthy controls (HC, n = 100) were analysed for anti-FHL1 autoantibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Patients with IIM FHL1+ and FHL1− were included in a longitudinal analysis. Serum levels were correlated to disease activity. Results Autoantibodies to FHL1 were more frequent in patients with IIM (122/449, 27%) compared with DC (autoimmune DC and NMD, 13/146, 9%, P &lt; 0.001) and HC (3/100.3%, P &lt; 0.001). Anti-FHL1 levels were higher in IIM [median (IQR)=0.62 (0.15–1.04)] in comparison with DC [0.22 (0.08–0.58)], HC [0.35 (0.23–0.47)] and NMD [0.48 (0.36–0.80)] P &lt; 0.001. Anti-FHL1+ patients with IIM were younger at the time of diagnosis compared with the anti-FHL1− group (P = 0.05) and were seronegative for other autoantibodies in 25%. In the first follow-up, anti-FHL1+ sample 20/33 (60%) positive at baseline had turned negative for anti-FHL1 autoantibodies. Anti-FHL1 autoantibodies rarely appeared after initiating treatment. Anti-FHL1 autoantibody levels correlated with CK (r = 0.62, P= 0.01), disease activity measured using the Myositis Disease Activity Assessment Tool (MYOACT) (n = 14, P = 0.004) and inversely with Manual Muscle Test-8 (r = −0.59, P = 0.02) at baseline. Conclusion Anti-FHL1 autoantibodies were present in 27% of patients with IIM; of these, 25% were negative for other autoantibodies. Other autoimmune diseases had lower frequencies and levels. Anti-FHL1 levels often decreased with immunosuppressive treatment, correlated with disease activity measures at diagnosis and rarely appeared after start of treatment.

OBJECTIVES Systemic inflammatory autoimmune diseases (SIADs) such as systemic lupus erythematosus (SLE), primary Sjögren's syndrome (pSS) and idiopathic inflammatory myopathies (myositis) are complex conditions characterized by shared circulating autoantibodies and clinical manifestations, including skin rashes, among others. This study aimed at elucidating the genetics underlying these common features. METHODS We performed targeted DNA sequencing of coding and regulatory regions from ~1,900 immune‐related genes in a large SIAD cohort of 2,292 well‐characterized Scandinavian patients with SLE, pSS and myositis, as well as 1,252 controls. A gene‐based functionally‐weighted genetic score for aggregate testing of all genetic variants, including rare variants, was complemented by in‐silico functional analyses and in‐vitro reporter experiments. RESULTS Case‐control association analysis detected known and potentially novel genetic loci in agreement with previous genetic and transcriptomics findings linked to the SIAD autoimmune background. Intriguingly, case‐case comparisons between patient subgroups with and without specific autoantibodies revealed that the subgroups defined by ANA and anti‐dsDNA antibodies have unique genetic profiles reflecting their heterogeneity. When focusing on clinical features, we overall showed that DUSP1 protective genetic variants lead to increased gene expression and potentially to anti‐inflammatory effects on the SIAD‐associated skin phenotype. This is consistent with recent genetic findings on eczema and with the previously reported downregulation of the MAPK signaling‐related gene DUSP1 in other skin disorders. CONCLUSION Together, this suggests common molecular mechanisms potentially underlying overlapping clinical manifestations shared among different disorders and informs clinical heterogeneity, which could be translated to improve disease diagnostic and treatment, also in more generalized disease frameworks.

Abstract Skin‐resident antigen‐presenting cells (APC) play an important role in maintaining peripheral tolerance via immune checkpoint proteins and induction of T regulatory cells (Tregs). However, there is a lack of knowledge on how to expand or recruit immunoregulatory cutaneous cells without causing inflammation. Here, it is shown that administration of a non‐coding single‐stranded oligonucleotide (ssON) leads to CCR2‐dependent accumulation of CD45 + CD11b + Ly6C + cells in the skin that express substantial levels of PD‐L1 and ILT3. Transcriptomic analyses of skin biopsies reveal the upregulation of key immunosuppressive genes after ssON administration. Functionally, the cutaneous CD11b + cells inhibit Th 1/2/9 responses and promote the induction of CD4 + FoxP3 + T‐cells. In addition, ssON treatment of imiquimod‐induced inflammation results in significantly reduced Th 17 responses. It is also shown that induction of IL‐10 production in the presence of cutaneous CD11b + cells isolated after ssON administrations is partly PD‐L1 dependent. Altogether, an immunomodulatory ssON is identified that can be used therapeutically to recruit cutaneous CD11b + cells with the capacity to dampen Th cells.

Background:

 The diagnosis and management of primary Sjögren's syndrome (pSS) remains a challenge, and treatments preventing progression of the disease are yet to be discovered. Proximity extension assay (PEA) allows for highly sensitive and specific detection of aberrances in the serum and tissue proteome. Variabilities of proteomic profiles will allow for stratification of patient subsets and may aid identification of patients at risk for extraglandular manifestations, monitoring of the disease course, as well as evaluation of immunomodulatory effects of novel treatments. 

Objectives:

 To obtain an in-depth understanding of the salivary gland and serum proteome in patients with pSS and to relate proteomic variations to clinical, serological, and genetic parameters. 

Methods:

 Paired lysates of salivary gland biopsies and serum from patients with pSS (n=80) and sicca controls (n=19), as well as serum samples from patients with pSS and healthy controls from a Swedish (n=456 and n=141) and a Norwegian (n=233 and n=137) cohort were analyzed by Olink PEA technology. Patients were stratified based on occurrence of extraglandular manifestations and the presence or absence of ANA, anti-Ro/SSA, and anti-La/SSB autoantibodies. Risk-associated HLA alleles were imputed. Proteins detected in >80% of samples were analyzed, and all analyses were adjusted for age and sex. Cut-off for significance was set at 5% FDR and ± 0.5 log2 FC. 

Results:

 Initial screening of salivary gland lysates and serum using six different PEA panels encompassing 512 unique protein markers determined the Immuno-Oncology panel to be the most relevant for further use in the larger cohorts. In the Swedish discovery cohort, 28 serum proteins significantly associated with pSS compared to healthy controls, out of which 16 were successfully validated in the Norwegian replication cohort. The most significant proteins comparing patients and healthy controls in the discovery cohort which could also be validated were galectin-9, CCL19, TNF, and soluble PD-1. Pulmonary involvement was present in 23 patients and associated with a striking up-regulation of 22 inflammatory proteins. Differences in distinct protein levels were also noted for cutaneous, lymphadenopathy, renal, and biological manifestations with CXCL10 being the most frequently detected marker. Notably, levels of the 16 validated protein biomarkers were found to gradually increase according to autoantibody profiles, with the lowest levels in ANA negative patients and highest levels in patients positive for both anti-Ro/SSA and anti-La/SSB. Statistical analysis of trend among these patient subgroups revealed that the protein level gradients were significant for all 16 proteins (p<0.0001). Correspondingly, higher inflammatory protein levels as well as a higher protein type I interferon (pIFN) score associated with frequency of the risk-associated HLA-DRB1*03 and DRB1*15. 

Conclusion:

 These data increase our understanding of the dysregulated proteome in patients with pSS and indicate how such aberrances relate to the presence of autoantibody specificities, risk-associated HLA as well as extraglandular manifestations. 

REFERENCES:

 NIL. 

Acknowledgements:

 This study was partly funded by the NECESSITY grant of EU Innovative Medicines Initiative 2. 

Disclosure of Interests:

 Albin Björk: None declared, Johannes Mofors: None declared, Lauro Meneghel: None declared, Marika Kvarnström: None declared, Roland Jonsson: None declared, Roald Omdal: None declared, Helena Forsblad-d'Elia: None declared, Sara Magnusson Bucher: None declared, Per Eriksson: None declared, Thomas Mandl Working as medical lead at UCB., Peter Olsson: None declared, Juliana Imgenberg-Kreuz: None declared, Gunnel Nordmark: None declared, Marie Wahren-Herlenius: None declared.

Fine mapping and bioinformatic analysis of the DDX6-CXCR5 genetic risk association in Sjogrens Disease (SjD) and Systemic Lupus Erythematosus (SLE) identified five common SNPs with functional evidence in immune cell types: rs4938573, rs57494551, rs4938572, rs4936443, rs7117261. Functional interrogation of nuclear protein binding affinity, enhancer/promoter regulatory activity, and chromatin-chromatin interactions in immune, salivary gland epithelial, and kidney epithelial cells revealed cell type-specific allelic effects for all five SNPs that expanded regulation beyond effects on DDX6 and CXCR5 expression. Mapping the local chromatin regulatory network revealed several additional genes of interest, including lnc-PHLDB1-1. Collectively, functional characterization implicated the risk alleles of these SNPs as modulators of promoter and/or enhancer activities that regulate cell type-specific expression of DDX6, CXCR5, and lnc-PHLDB1-1, among others. Further, these findings emphasize the importance of exploring the functional significance of SNPs in the context of complex chromatin architecture in disease-relevant cell types and tissues.