Substantial molecular evidence suggests a role for human papillomavirus (HPV) in the pathogenesis of oropharyngeal squamous-cell carcinoma, but epidemiologic data have been inconsistent.We performed a hospital-based, case-control study of 100 patients with newly diagnosed oropharyngeal cancer and 200 control patients without cancer to evaluate associations between HPV infection and oropharyngeal cancer. Multivariate logistic-regression models were used for case-control comparisons.A high lifetime number of vaginal-sex partners (26 or more) was associated with oropharyngeal cancer (odds ratio, 3.1; 95% confidence interval [CI], 1.5 to 6.5), as was a high lifetime number of oral-sex partners (6 or more) (odds ratio, 3.4; 95% CI, 1.3 to 8.8). The degree of association increased with the number of vaginal-sex and oral-sex partners (P values for trend, 0.002 and 0.009, respectively). Oropharyngeal cancer was significantly associated with oral HPV type 16 (HPV-16) infection (odds ratio, 14.6; 95% CI, 6.3 to 36.6), oral infection with any of 37 types of HPV (odds ratio, 12.3; 95% CI, 5.4 to 26.4), and seropositivity for the HPV-16 L1 capsid protein (odds ratio, 32.2; 95% CI, 14.6 to 71.3). HPV-16 DNA was detected in 72% (95% CI, 62 to 81) of 100 paraffin-embedded tumor specimens, and 64% of patients with cancer were seropositive for the HPV-16 oncoprotein E6, E7, or both. HPV-16 L1 seropositivity was highly associated with oropharyngeal cancer among subjects with a history of heavy tobacco and alcohol use (odds ratio, 19.4; 95% CI, 3.3 to 113.9) and among those without such a history (odds ratio, 33.6; 95% CI, 13.3 to 84.8). The association was similarly increased among subjects with oral HPV-16 infection, regardless of their tobacco and alcohol use. By contrast, tobacco and alcohol use increased the association with oropharyngeal cancer primarily among subjects without exposure to HPV-16.Oral HPV infection is strongly associated with oropharyngeal cancer among subjects with or without the established risk factors of tobacco and alcohol use.

Background: Human papillomavirus (HPV), the causal agent of cervical cancer, appears to be involved in the etiology of cancer of the oral cavity and oropharynx. To investigate these associations, we conducted a multicenter case-control study of cancer of the oral cavity and oropharynx in nine countries. Methods: We recruited 1670 case patients (1415 with cancer of the oral cavity and 255 with cancer of the oropharynx) and 1732 control subjects and obtained an interview, oral exfoliated cells, and blood from all participants and fresh biopsy specimens from case patients. HPV DNA was detected by polymerase chain reaction (PCR). Antibodies against HPV16 L1, E6, and E7 proteins in plasma were detected with enzyme-linked immunosorbent assays. Multivariable models were used for case-control and case-case comparisons. Results: HPV DNA was detected in biopsy specimens of 3.9% (95% confidence interval [CI] = 2.5% to 5.3%) of 766 cancers of the oral cavity with valid PCR results and 18.3% (95% CI = 12.0% to 24.7%) of 142 cancers of the oropharynx (oropharynx and tonsil combined) with valid PCR results. HPV DNA in cancer biopsy specimens was detected less frequently among tobacco smokers and paan chewers and more frequently among subjects who reported more than one sexual partner or who practiced oral sex. HPV16 DNA was found in 94.7% of HPV DNA-positive case patients. HPV DNA in exfoliated cells was not associated with cancer risk or with HPV DNA detection in biopsy specimens. Antibodies against HPV16 L1 were associated with risk for cancers of the oral cavity (odds ratio [OR] = 1.5, 95% CI = 1.1 to 2.1) and the oropharynx (OR = 3.5, 95% CI = 2.1 to 5.9). Antibodies against HPV16 E6 or E7 were also associated with risk for cancers of the oral cavity (OR = 2.9, 95% CI = 1.7 to 4.8) and the oropharynx (OR = 9.2, 95% CI = 4.8 to 17.7). Conclusions: HPV appears to play an etiologic role in many cancers of the oropharynx and possibly a small subgroup of cancers of the oral cavity. The most common HPV type in genital cancers (HPV16) was also the most common in these tumors. The mechanism of transmission of HPV to the oral cavity warrants further investigation.

The APO-1 antigen as defined by the mouse monoclonal antibody anti-APO-1 was previously found to be expressed on the cell surface of activated human T and B lymphocytes and a variety of malignant human lymphoid cell lines. Cross-linking of the APO-1 antigen by anti-APO-1 induced programmed cell death, apoptosis, of APO-1 positive cells. To characterize the APO-1 cell surface molecule and to better understand its role in induction of apoptosis, the APO-1 protein was purified to homogeneity from membranes of SKW6.4 B lymphoblastoid cells by solubilization with sodium deoxycholate, affinity chromatography with anti-APO-1 antibody, and reversed phase high performance liquid chromatography. Each purification step was followed by an APO-1-specific solid phase enzyme-linked immunosorbent assay using the monoclonal antibody anti-APO-1. In sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, the APO-1 antigen was found to be a membrane glycoprotein of 48-kDa. Endoproteinase-cleaved peptides of the APO-1 protein were subjected to amino acid sequencing, and corresponding oligonucleotides were used to identify a full-length APO-1 cDNA clone from an SKW6.4 cDNA library. The deduced amino acid sequence of APO-1 showed sequence identity with the Fas antigen, a cysteine-rich transmembrane protein of 335 amino acids with significant similarity to the members of the tumor necrosis factor/nerve growth factor receptor superfamily. The APO-1 antigen was expressed upon transfection of APO-1 cDNA into BL60-P7 Burkitt's lymphoma cells and conferred sensitivity towards anti-APO-1-induced apoptosis to the transfectants.

Abstract Human papillomavirus type 16 (HPV16) plays a role in the development of a subgroup of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). However, uncertainty exists about the true impact of HPV in this tumor type as conflicting reports have been published with prevalence rates from 0 to 100%. We aimed to find a detection algorithm of a biologically and thus clinically meaningful infection, applicable for high‐throughput screening of frozen and formalin‐fixed paraffin embedded (FFPE) specimens. By considering detection of HPV E6 oncogene expression in frozen biopsies as gold standard for a meaningful HPV infection, the value of several assays was evaluated on FFPE tumor specimens and sera of 48 HNSCC patients. The following assays were evaluated on FFPE tissue samples: HPV DNA general primer (GP)5+/6+ PCR, viral load analysis, HPV16 DNA FISH detection, HPV16 E6 mRNA RT‐PCR, p16 immunostaining, and on corresponding serum samples detection of antibodies against the HPV16 proteins L1, E6 and E7. Comparing single assays on FFPE tissue samples detection of E6 expression by RT‐PCR was superior, but application remains at present limited to HPV16 detection. Most suitable algorithm with 100% sensitivity and specificity appeared p16 immunostaining followed by GP5+/6+ PCR on the p16‐positive cases. We show that clinically meaningful viral HPV infections can be more reliably measured in FFPE HNSCC samples in a standard and high throughput manner, paving the way for prognostic and experimental vaccination studies, regarding not only HNSCC, but possibly also cancer types with HPV involvement in subgroups such as penile and anal cancer. © 2007 Wiley‐Liss, Inc.

We conducted a large international study to estimate fractions of head and neck cancers (HNCs) attributable to human papillomavirus (HPV-AFs) using six HPV-related biomarkers of viral detection, transcription, and cellular transformation. Formalin-fixed, paraffin-embedded cancer tissues of the oral cavity (OC), pharynx, and larynx were collected from pathology archives in 29 countries. All samples were subject to histopathological evaluation, DNA quality control, and HPV-DNA detection. Samples containing HPV-DNA were further subject to HPV E6*I mRNA detection and to p16INK4a, pRb, p53, and Cyclin D1 immunohistochemistry. Final estimates of HPV-AFs were based on HPV-DNA, HPV E6*I mRNA, and/or p16INK4a results. A total of 3680 samples yielded valid results: 1374 pharyngeal, 1264 OC, and 1042 laryngeal cancers. HPV-AF estimates based on positivity for HPV-DNA, and for either HPV E6*I mRNA or p16INK4a, were 22.4%, 4.4%, and 3.5% for cancers of the oropharynx, OC, and larynx, respectively, and 18.5%, 3.0%, and 1.5% when requiring simultaneous positivity for all three markers. HPV16 was largely the most common type. Estimates of HPV-AF in the oropharynx were highest in South America, Central and Eastern Europe, and Northern Europe, and lowest in Southern Europe. Women showed higher HPV-AFs than men for cancers of the oropharynx in Europe and for the larynx in Central-South America. HPV contribution to HNCs is substantial but highly heterogeneous by cancer site, region, and sex. This study, the largest exploring HPV attribution in HNCs, confirms the important role of HPVs in oropharyngeal cancer and drastically downplays the previously reported involvement of HPVs in the other HNCs.

Abstract Background: More than 100 different human papillomaviruses (HPVs) can cause proliferative diseases, many of which are malignant, such as cervical cancer. HPV serology is complex because infection and disease lead to distinct type-specific antibody responses. Using bead-based technology, we have developed an assay platform that allows the simultaneous detection of antibodies against up to 100 in situ affinity–purified recombinant HPV proteins. Methods: Twenty-seven HPV proteins were expressed as glutathione S-transferase fusion proteins and affinity-purified in one step by incubation of glutathione-displaying beads in bacterial lysate. Spectrally distinct bead sets, each carrying one particular antigen, were mixed, incubated with serum, and differentiated in a flow cytometer-like analyzer (xMAP; Luminex Corp). Antibodies bound to the antigens were detected via fluorescent secondary reagents. We studied 756 sera from 2 case-control studies of cervical cancer. Results: Glutathione S-transferase fusion proteins bound with high affinity to glutathione-displaying beads (Kd = 6.9 × 10−9 mol/L). The dynamic range of multiplex serology covered 1.5 orders of magnitude, and antibodies were detected at serum dilutions >1:1 000 000. Imprecision (median CV) was ≤5.4%, and assay reproducibility was high (R2 = 0.97). Results on clinical samples showed high concordance with ELISA (κ = 0.846), but multiplex serology exhibited increased detection of weak antibody responses. Antibodies to the E6 oncoproteins of the rare HPV types 52 and 58 were associated with cervical cancer (P <0.001). Conclusion: Multiplex serology enables antibody analyses of large numbers of sera against up to 100 antigens in parallel and has the potential to replace ELISA technology.

ABSTRACT Typing of human papillomaviruses (HPV) by DNA hybridization procedures, such as reverse line blot (RLB) assay, is sensitive and well validated. However, the application of these assays to high-throughput analyses is limited. Here, we describe the development of multiplex human papillomavirus genotyping (MPG), a quantitative and sensitive high-throughput procedure for the identification of multiple high- and low-risk genital HPV genotypes in a single reaction. MPG is based on the amplification of HPV DNA by a general primer PCR (GP5+/6+) and the subsequent detection of the products with type-specific oligonucleotide probes coupled to fluorescence-labeled polystyrene beads (Luminex suspension array technology). Up to 100 different HPV types can be detected simultaneously with MPG, and the method is fast and labor saving. We detected all 22 HPV types examined with high specificity and reproducibility (the median interplate coefficient of variation was below 10%). Detection limits for the different HPV types varied between 100 and 800 pg of PCR products. We compared the performance of MPG to an established RLB assay on GP5+/6+-PCR products derived from 94 clinical samples. The evaluation showed an excellent agreement (kappa = 0.922) but also indicated a higher sensitivity of MPG. In conclusion, MPG appears to be highly suitable for large-scale epidemiological studies and vaccination trials as well as for routine diagnostic purposes.

Background Human papillomavirus (HPV) contribution in vulvar intraepithelial lesions (VIN) and invasive vulvar cancer (IVC) is not clearly established. This study provides novel data on HPV markers in a large series of VIN and IVC lesions. Methods Histologically confirmed VIN and IVC from 39 countries were assembled at the Catalan Institute of Oncology (ICO). HPV-DNA detection was done by polymerase chain reaction using SPF-10 broad-spectrum primers and genotyping by reverse hybridisation line probe assay (LiPA25) (version 1). IVC cases were tested for p16INK4a by immunohistochemistry (CINtec histology kit, ROCHE). An IVC was considered HPV driven if both HPV-DNA and p16INK4a overexpression were observed simultaneously. Data analyses included algorithms allocating multiple infections to calculate type-specific contribution and logistic regression models to estimate adjusted prevalence (AP) and its 95% confidence intervals (CI). Results Of 2296 cases, 587 were VIN and 1709 IVC. HPV-DNA was detected in 86.7% and 28.6% of the cases respectively. Amongst IVC cases, 25.1% were both HPV-DNA and p16INK4a positive. IVC cases were largely keratinising squamous cell carcinoma (KSCC) (N = 1234). Overall prevalence of HPV related IVC cases was highest in younger women for any histological subtype. SCC with warty or basaloid features (SCC_WB) (N = 326) were more likely to be HPV and p16INK4a positive (AP = 69.5%, CI = 63.6–74.8) versus KSCC (AP = 11.5%, CI = 9.7–13.5). HPV 16 was the commonest type (72.5%) followed by HPV 33 (6.5%) and HPV 18 (4.6%). Enrichment from VIN to IVC was significantly high for HPV 45 (8.5-fold). Conclusion Combined data from HPV-DNA and p16INK4a testing are likely to represent a closer estimate of the real fraction of IVC induced by HPV. Our results indicate that HPV contribution in invasive vulvar cancer has probably been overestimated. HPV 16 remains the major player worldwide.

Knowledge about human papillomaviruses (HPV) types involved in anal cancers in some world regions is scanty. Here, we describe the HPV DNA prevalence and type distribution in a series of invasive anal cancers and anal intraepithelial neoplasias (AIN) grades 2/3 from 24 countries. We analyzed 43 AIN 2/3 cases and 496 anal cancers diagnosed from 1986 to 2011. After histopathological evaluation of formalin-fixed paraffin-embedded samples, HPV DNA detection and genotyping was performed using SPF-10/DEIA/LiPA25 system (version 1). A subset of 116 cancers was further tested for p16INK4a expression, a cellular surrogate marker for HPV-associated transformation. Prevalence ratios were estimated using multivariate Poisson regression with robust variance in the anal cancer data set. HPV DNA was detected in 88.3% of anal cancers (95% confidence interval [CI]: 85.1–91.0%) and in 95.3% of AIN 2/3 (95% CI: 84.2–99.4%). Among cancers, the highest prevalence was observed in warty–basaloid subtype of squamous cell carcinomas, in younger patients and in North American geographical region. There were no statistically significant differences in prevalence by gender. HPV16 was the most frequent HPV type detected in both cancers (80.7%) and AIN 2/3 lesions (75.4%). HPV18 was the second most common type in invasive cancers (3.6%). p16INK4a overexpression was found in 95% of HPV DNA-positive anal cancers. In view of the results of HPV DNA and high proportion of p16INK4a overexpression, infection by HPV is most likely to be a necessary cause for anal cancers in both men and women. The large contribution of HPV16 reinforces the potential impact of HPV vaccines in the prevention of these lesions.