Treatment of quiescent Swiss 3T3 fibroblasts with serum, or with the phosphatase inhibitors okadaic acid and vanadate, induced a 2- to 11-fold activation of the serine/ threonine RAC protein kinase (RAC-PK). Kinase activation was accompanied by decreased mobility of RAC-PK on SDS/PAGE such that three electrophoretic species (a to c) of the kinase were detected by immunoblot analysis, indicative of differentially phosphorylated forms. Addition of vanadate to arrested cells increased the RAC-PK phosphorylation level 3-to 4-fold. Unstimulated RAC-PK was phosphorylated predominantly on serine, whereas the activated kinase was phosphorylated on both serine and threonine residues. Treatment of RAC-PK in vitro with protein phosphatase 2A led to kinase inactivation and an increase in electrophoretic mobility. Deletion of the N-terminal region containing the pleckstrin homology domain did not affect RAC-PK activation by okadaic acid, but it reduced vanadate-stimulated activity and also blocked the serum-induced activation. Deletion of the serine/threonine rich C-terminal region impaired both RAC-PKalpha basal and vanadate-stimulated activity. Studies using a kinase-deficient mutant indicated that autophosphorylation is not involved in RAC-PKalpha activation. Stimulation of RAC-PK activity and electrophoretic mobility changes induced by serum were sensitive to wortmannin. Taken together the results suggest that RAC-PK is a component of a signaling pathway regulated by phosphatidylinositol (PI) 3-kinase, whose action is required for RAC-PK activation by phosphorylation.

Research Article1 November 1995free access The principal target of rapamycin-induced p70s6k inactivation is a novel phosphorylation site within a conserved hydrophobic domain. R. B. Pearson R. B. Pearson Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author P. B. Dennis P. B. Dennis Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author J. W. Han J. W. Han Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author N. A. Williamson N. A. Williamson Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author S. C. Kozma S. C. Kozma Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author R. E. Wettenhall R. E. Wettenhall Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author G. Thomas G. Thomas Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author R. B. Pearson R. B. Pearson Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author P. B. Dennis P. B. Dennis Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author J. W. Han J. W. Han Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author N. A. Williamson N. A. Williamson Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author S. C. Kozma S. C. Kozma Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author R. E. Wettenhall R. E. Wettenhall Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author G. Thomas G. Thomas Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. Search for more papers by this author Author Information R. B. Pearson1, P. B. Dennis1, J. W. Han1, N. A. Williamson1, S. C. Kozma1, R. E. Wettenhall1 and G. Thomas1 1Friedrich Miescher-Institute, Basel, Switzerland. The EMBO Journal (1995)14:5279-5287https://doi.org/10.1002/j.1460-2075.1995.tb00212.x PDFDownload PDF of article text and main figures. ToolsAdd to favoritesDownload CitationsTrack CitationsPermissions ShareFacebookTwitterLinked InMendeleyWechatReddit Figures & Info The immunosuppressive agent rapamycin induces inactivation of p70s6k with no effect on other mitogen-activated kinases. Here we have employed a combination of techniques, including mass spectrometry, to demonstrate that this effect is associated with selective dephosphorylation of three previously unidentified p70s6k phosphorylation sites: T229, T389 and S404. T229 resides at a conserved position in the catalytic domain, whose phosphorylation is essential for the activation of other mitogen-induced kinases. However, the principal target of rapamycin-induced p70s6k inactivation is T389, which is located in an unusual hydrophobic sequence outside the catalytic domain. Mutation of T389 to alanine ablates kinase activity, whereas mutation to glutamic acid confers constitutive kinase activity and rapamycin resistance. The importance of this site and its surrounding motif to kinase function is emphasized by its presence in a large number of protein kinases of the second messenger family and its conservation in putative p70s6k homologues from as distantly related organisms as yeast and plants. Previous ArticleNext Article Volume 14Issue 211 November 1995In this issue RelatedDetailsLoading ...

Here, We report another type of actin histidine methyltransferase, METTL18, that regulates the metastatic potential of breast cancer in human. Among methyltransferases, METTL18 was highly amplified in human breast cancer. Particularly, poor prognosis was associated with high expression of METTL18 in HER2-negative breast cancer patients. This gene product was found to be a critical component of metastatic responses. Loss of METTL18 expression significantly reduced metastatic responses of breast tumor cells both in vitro and in vivo. It was observed that METTL18 increased actin polymerization, upregulated complex formation with HSP90AA1 and Src, enhanced the activity of an intermediate form of Src with tyrosine phosphorylation at both Y416 and Y527, and induced cellular metastatic responses, including morphological change, migration, and invasion of MDA-MB-231 cells in vitro and in mice. Methylated actin at His73 served as a critical site for interaction with HSP90AA1 and Src to activate p85/PI3K and STAT3. Our findings suggest that METTL18 plays critical roles in metastatic responses of HER2-negative breast cancer cells via actin polymerization and the generation of an intermediate form of Src.

The dispersion of titanium dioxide (TiO2) determines the performance of TiO2-based formulations in cosmetic and coating applications. In particular, the chemical and structural characteristics of the surfactants used to prepare TiO2 dispersions are significant. However, the influence of surfactants on TiO2 dispersion quality has not been systematically investigated. In this study, we observed the effects of the ionic character of commercial surfactants on the dispersion stability and UV-blocking efficacy of TiO2. Among the experimental surfactant groups, anionic sodium dodecyl sulfate was efficient in stabilizing TiO2 as a water-in-oil formulation and enhancing its UV-blocking efficacy. Furthermore, an anionic fatty acid as a surfactant with a longer alkyl chain length was sufficient to stabilize the TiO2 formulation, which also displayed the highest UV-blocking efficacy, comparable to the values of commercial TiO2-based cosmetic products.