Abstract Zika virus (ZIKV) is unique among mosquito-borne flaviviruses in that it is also vertically and sexually transmitted by humans. The male reproductive tract is thought to be a ZIKV reservoir; however, the reported magnitude and duration of viral persistence in male genital tissues varies widely in humans and non-human primate models. ZIKV tissue and cellular tropism and potential effects on male fertility also remain unclear. The objective of this study was to resolve these questions by analyzing archived genital tissues from 51 ZIKV-inoculated male macaques and correlating data on plasma viral kinetics, tissue tropism, and ZIKV-induced pathological changes in the reproductive tract. We hypothesized that ZIKV would persist in the male macaque genital tract for longer than there was detectable viremia, where it would localize to germ and epithelial cells and associate with lesions. We detected ZIKV RNA and infectious virus in testis, epididymis, seminal vesicle, and prostate gland. In contrast to prepubertal males, sexually mature macaques were significantly more likely to harbor persistent ZIKV RNA or infectious virus somewhere in the genital tract, with detection as late as 60 days post-inoculation. ZIKV RNA localized primarily to testicular stem cells/sperm precursors and epithelial cells, including Sertoli cells, epididymal duct epithelium, and glandular epithelia of the seminal vesicle and prostate gland. ZIKV infection was associated with microscopic evidence of inflammation in the epididymis and prostate gland of sexually mature males, which could have significant effects on male fertility. The findings from this study increase our understanding of persistent ZIKV infection which can inform risk of sexual transmission during assisted reproductive therapies as well as potential impacts on male fertility. Author Summary Zika virus (ZIKV) spread since 2015 led to establishment of urban epidemic cycles involving humans and Aedes mosquitoes. ZIKV is also sexually and vertically transmitted and causes congenital Zika syndrome. Together, these features show that ZIKV poses significant global public health risks. By virtue of similar reproductive anatomy and physiology to humans, macaques serve as a useful model for ZIKV infection. However, macaque studies to date have been limited by small sample size, typically 1 to 5 animals. Although mounting evidence identifies the male reproductive tract as a significant ZIKV reservoir, data regarding the duration of ZIKV persistence, potential for sexual transmission, and male genitourinary sequelae remain sparse. Here, we analyzed archived genital tissues from more than 50 ZIKV-inoculated male macaques. Our results show that ZIKV can persist in the male macaque reproductive tract after the resolution of viremia, with virus localization to sperm precursors and epithelial cells, and microscopic evidence of inflammation in the epididymis and prostate gland. Additionally, we show that freezing is not a viable method of destroying infectious ZIKV. Our findings help explain cases of sexual transmission of ZIKV in humans, which also carries a risk for transmission via assisted fertility procedures, even after resolution of detectable viremia.

Abstract OBJECTIVE To describe the prevalence, clinical findings, lesions, and risk factors associated with chlamydial infections in free-ranging raptors presented to a university veterinary medical teaching hospital. METHODS Medical records retrospectively searched for raptors admitted from January 1993 through April 2022 were tested for Chlamydia spp infections using quantitative PCR (qPCR), immunohistochemistry, culture, and sequencing. Findings were collected and analyzed. Multivariable logistic regression analyzed the association between Chlamydia spp infection status and risk factors, including age class, species, sex, and season of admission. RESULTS The prevalence for cases that tested positive for Chlamydia spp on 1 or more diagnostic tests, including mucosal qPCR samples for Chlamydia spp, tissue PCR for C buteoni s, and mucosal qPCR genotyped as C buteonis, was 1.9% (74 of 3,983). All positive cases were from the genus Buteo (n = 74). Juvenile birds and winter season had higher odds of infection. All birds were in poor body condition (n = 74), often with moderate-to-severe CBC and biochemistry abnormalities consistent with multiorgan chronic inflammatory disease, emaciation, and dehydration. On postmortem examination of Chlamydia -positive birds (58 of 74), hepatitis (44 of 56), nephritis (24 of 39), splenitis (22 of 53), airsacculitis (21 of 43), myocarditis (21 of 39), and pneumonia (21 of 38) were common lesions, with intracellular bacteria in multiple tissues. CONCLUSIONS Signalment, season of admission, clinical signs, clinicopathologic findings, and Chlamydia -specific testing identified chlamydial infections in free-ranging raptors. Appropriate protections to prevent potential zoonotic transmission in clinical wildlife rehabilitation settings are recommended. CLINICAL RELEVANCE Many clinical parameters used to identify C psittaci infection in parrots can also be used to identify chlamydial infections in raptors.

ABSTRACT The rapid emergence and global dissemination of SARS-CoV-2 that causes COVID-19 continues to cause an unprecedented global health burden resulting in nearly 7 million deaths. While multiple vaccine countermeasures have been approved for emergency use, additional treatments are still needed due to sluggish vaccine rollout, vaccine hesitancy, and inefficient vaccine-mediated protection. Immunoadjuvant compounds delivered intranasally can guide non-specific innate immune responses during the critical early stages of viral replication, reducing morbidity and mortality. N- dihydro g alacto c hitosan (GC) is a novel mucoadhesive immunostimulatory polymer of β- 0-4-linked N-acetylglucosamine that is solubilized by the conjugation of galactose glycans with current applications as a cancer immunotherapeutic. We tested GC as a potential countermeasure for COVID-19. GC was well-tolerated and did not produce histopathologic lesions in the mouse lung. GC administered intranasally before and after SARS-CoV-2 exposure diminished morbidity and mortality in humanized ACE2 receptor expressing mice by up to 75% and reduced infectious virus levels in the upper airway. Fluorescent labeling of GC shows that it is confined to the lumen or superficial mucosa of the nasal cavity, without involvement of adjacent or deeper tissues. Our findings demonstrate a new application for soluble immunoadjuvants such as GC for preventing disease associated with SARS-CoV-2 and may be particularly attractive to persons who are needle-averse. IMPORTANCE The ongoing COVID-19 pandemic necessitates new approaches to reduce disease caused by SARS-CoV-2. We tested the immunoadjuvant N-dihydro g alacto c hitosan (GC), used previously as an immunostimulant for tumor therapy and adjuvant for viral vaccines, as a potential COVID-19 countermeasure. When GC was administered before and after inoculation of a lethal dose of SARS-CoV-2 into the nose of humanized mice expressing an entry receptor for the virus, fewer mice showed weight loss and died compared to mice that received only the vehicle but no GC. GC-treated mice also had lower levels of infectious SARS-CoV-2 in their upper airway. These results suggest that GC may be a candidate to prevent or treat COVID-19. Single Sentence Summary The immunoadjuvant N-dihydrogalactochitosan diminishes SARS-CoV-2 disease in humanized ACE2 mice, representing a new countermeasure against COVID-19.